| 符号说明 | 第5-9页 |
| 中文摘要 | 第9-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 引言 | 第12-19页 |
| 1.1 产气荚膜梭菌简介 | 第12-15页 |
| 1.2 产气荚膜梭菌病在国内外流行状况 | 第15-17页 |
| 1.3 产气荚膜梭菌疾病致病机理及防控措施 | 第17-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-28页 |
| 2.1 菌种与培养基 | 第19-20页 |
| 2.1.1 D 型产气荚膜梭菌种 | 第19页 |
| 2.1.2 5%绵羊血-1%葡萄糖琼脂基础平板 | 第19-20页 |
| 2.1.3 产毒素培养基——Gardon 汤 | 第20页 |
| 2.1.4 PBS（1000ml 配制 | 第20页 |
| 2.1.5 硫乙醇酸盐流体培养基 | 第20页 |
| 2.2 实验动物 | 第20页 |
| 2.3 主要试剂及仪器 | 第20-21页 |
| 2.4 主要试剂的配制 | 第21-22页 |
| 2.4.1 饱和硫酸铵的配制 | 第21页 |
| 2.4.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳主要试剂及配制 | 第21-22页 |
| 2.4.2.1 30%丙烯酰胺的配制 | 第21页 |
| 2.4.2.2 10%SDS 的配制 | 第21页 |
| 2.4.2.3 1.5 M Tris-CL 的配制 | 第21页 |
| 2.4.2.4 10%APS 的配制 | 第21页 |
| 2.4.2.5 Running Buffer 的配制 | 第21页 |
| 2.4.2.6 染色液的配制 | 第21-22页 |
| 2.4.2.7 脱色液的配制 | 第22页 |
| 2.4.3 汞类防腐剂残留量测定主要试剂及配制 | 第22页 |
| 2.4.3.1 0.05%双硫腙浓溶液的配制 | 第22页 |
| 2.4.3.2 0.00125%双硫腙滴定液的配制 | 第22页 |
| 2.4.3.3 20%盐酸羟胺试液的配制 | 第22页 |
| 2.4.4 甲醛残留量的测定主要试剂及配制 | 第22页 |
| 2.4.4.1 醋酸—醋酸铵缓冲液配制 | 第22页 |
| 2.4.4.2 乙酰丙酮试液配制 | 第22页 |
| 2.4.4.3 甲醛溶液含量标定 | 第22页 |
| 2.5 试验方法 | 第22-28页 |
| 2.5.1 菌种的复苏 | 第22-23页 |
| 2.5.2 细菌增菌 | 第23页 |
| 2.5.3 毒素的制备 | 第23页 |
| 2.5.4 验证毒素α、ε的存在 | 第23-25页 |
| 2.5.4.1 聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测外毒素中存在α、ε | 第23-24页 |
| 2.5.4.1.1 D 型产气荚膜梭菌外毒素粗提 | 第23页 |
| 2.5.4.1.2 粗提毒素聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第23-24页 |
| 2.5.4.2 应用 ELISA 试剂盒检测外毒素中存在α、ε | 第24-25页 |
| 2.5.5 D 型产气荚膜梭菌外毒素毒力测定 | 第25页 |
| 2.5.6 毒素的灭活及类毒素疫苗的制备 | 第25页 |
| 2.5.6.1 D 型产气荚膜梭菌毒素灭活时间的测定 | 第25页 |
| 2.5.6.2 白油佐剂类毒素疫苗的制备 | 第25页 |
| 2.5.7 类毒素疫苗的检验 | 第25-28页 |
| 2.5.7.1 类毒素疫苗物理性状检验 | 第25-27页 |
| 2.5.7.1.1 类毒素疫苗剂型检查 | 第25-26页 |
| 2.5.7.1.2 类毒素疫苗稳定性检查 | 第26页 |
| 2.5.7.1.3 甲醛及硫柳汞的测定 | 第26-27页 |
| 2.5.7.1.3.1 甲醛残留量的测定 | 第26页 |
| 2.5.7.1.3.2 硫柳汞防腐剂残留量的测定 | 第26-27页 |
| 2.5.7.2 无菌检验 | 第27页 |
| 2.5.7.3 类毒素疫苗安全检验 | 第27页 |
| 2.5.7.4 绵羊的最小致死量（MLD）测定 | 第27页 |
| 2.5.7.5 类毒素疫苗免疫效力检验 | 第27页 |
| 2.5.7.6 类毒素疫苗的抗体消长规律 | 第27-28页 |
| 2.5.7.6.1 应用 ELISA 检测抗毒素抗体 | 第28页 |
| 3 结果与分析 | 第28-33页 |
| 3.1 D 型产气荚膜梭菌外毒素粗提结果 | 第28-29页 |
| 3.2 ELISA 检测外毒素结果 | 第29-30页 |
| 3.3 D 型产气荚膜梭菌外毒素毒力测定结果 | 第30页 |
| 3.4 D 型产气荚膜梭菌毒素灭活时间测定结果 | 第30-31页 |
| 3.5 类毒素疫苗物理性状检验结果 | 第31页 |
| 3.6 类毒素疫苗纯粹检验及甲醛和硫柳汞残留量测定 | 第31页 |
| 3.7 类毒素疫苗安全检验结果 | 第31页 |
| 3.8 绵羊最小致死量测定结果 | 第31页 |
| 3.9 类毒素疫苗免疫剂量的确定 | 第31-32页 |
| 3.10 类毒素疫苗的抗体消长规律结果 | 第32-33页 |
| 4 讨论 | 第33-35页 |
| 4.1 研制类毒素疫苗的意义 | 第33页 |
| 4.2 D 型产气荚膜梭菌外毒素的灭活 | 第33-34页 |
| 4.3 对白油佐剂的选择 | 第34-35页 |
| 4.4 抗体保护周期 | 第35页 |
| 5 结论 | 第35-36页 |
| 6 参考文献 | 第36-42页 |
| 致谢 | 第42-43页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第43-44页 |
| 附录 | 第44-46页 |
