| 摘要 | 第6-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩写符号 | 第12-16页 |
| 第一章 前言 | 第16-26页 |
| 1.1 被子植物胚胎发生过程 | 第16-17页 |
| 1.2 早期胚胎发生中基因表达的研究 | 第17-19页 |
| 1.2.1 合子基因表达的研究 | 第17-18页 |
| 1.2.2 二胞原胚中基因表达的研究 | 第18-19页 |
| 1.3 植物早期胚胎的分离技术及转录谱研究 | 第19-20页 |
| 1.4 少量材料的cDNA扩增 | 第20-21页 |
| 1.5 cDNA文库构建技术 | 第21-23页 |
| 1.6 甘露聚糖酶的研究现状 | 第23-24页 |
| 1.7 本论文的基础、研究目的和意义 | 第24-26页 |
| 第二章 烟草二胞原胚顶、基细胞cDNA文库的构建 | 第26-42页 |
| 2.1 引言 | 第26-27页 |
| 2.2 材料试剂与仪器 | 第27-29页 |
| 2.2.1 植物材料 | 第27页 |
| 2.2.2 试剂 | 第27-28页 |
| 2.2.3 仪器设备 | 第28-29页 |
| 2.3 实验方法与步骤 | 第29-36页 |
| 2.3.1 烟草二胞原胚顶、基细胞的分离 | 第29页 |
| 2.3.2 Dynalbeads Oligo(dT)_(25)提取mRNA | 第29-30页 |
| 2.3.3 逆转录 | 第30-31页 |
| 2.3.4 LD-PCR扩增cDNA | 第31-32页 |
| 2.3.5 蛋白酶K消化 | 第32-33页 |
| 2.3.6 SfiI酶切 | 第33页 |
| 2.3.7 酶切后cDNA片段的分级分离 | 第33-34页 |
| 2.3.8 与λTriplEx2载体连接 | 第34页 |
| 2.3.9 cDNA文库包装 | 第34页 |
| 2.3.10 XL1-Blue菌种准备 | 第34-35页 |
| 2.3.11 文库滴度测定 | 第35页 |
| 2.3.12 重组效率鉴定 | 第35页 |
| 2.3.13 PCR鉴定文库中插入片断的长度 | 第35-36页 |
| 2.4 实验结果 | 第36-40页 |
| 2.4.1 顶基细胞分离 | 第36-38页 |
| 2.4.2 cDNA文库构建:LD-PCR扩增cDNA | 第38页 |
| 2.4.3 cDNA文库构建:cDNA分级分离 | 第38-39页 |
| 2.4.4 cDNA文库滴度,重组率与插入片段长度 | 第39-40页 |
| 2.5 讨论 | 第40-42页 |
| 第三章 烟草二胞原胚顶、基细胞转录谱分析 | 第42-53页 |
| 3.1 引言 | 第42页 |
| 3.2 材料试剂与仪器 | 第42-43页 |
| 3.2.1 材料 | 第42页 |
| 3.2.2 试剂 | 第42-43页 |
| 3.2.3 仪器设备 | 第43页 |
| 3.2.4 应用软件 | 第43页 |
| 3.3 实验方法与步骤 | 第43-45页 |
| 3.3.1 BM25.8菌种准备 | 第43-44页 |
| 3.3.2 将噬菌体转化为pTriplEx2质粒 | 第44页 |
| 3.3.3 随机挑选克隆测序 | 第44页 |
| 3.3.4 生物信息学分析 | 第44-45页 |
| 3.4 实验结果 | 第45-50页 |
| 3.4.1 顶基细胞EST测序及聚类分析 | 第45页 |
| 3.4.2 顶基细胞各自的高丰度转录本比较 | 第45-47页 |
| 3.4.3 顶基细胞EST功能分类比较 | 第47-49页 |
| 3.4.4 顶基细胞EST与合子比较 | 第49-50页 |
| 3.5 讨论 | 第50-53页 |
| 3.5.1 顶基细胞转录谱的特点 | 第50-51页 |
| 3.5.2 顶基细胞转录谱差异不大 | 第51页 |
| 3.5.3 EST序列分析的流程 | 第51-52页 |
| 3.5.4 EST表达模式的验证 | 第52-53页 |
| 第四章 顶、基细胞差异表达基因的PCR检测 | 第53-75页 |
| 4.1 引言 | 第53页 |
| 4.2 材料试剂与仪器 | 第53-54页 |
| 4.2.1 植物材料 | 第53页 |
| 4.2.2 试剂 | 第53-54页 |
| 4.2.3 仪器设备 | 第54页 |
| 4.2.4 应用软件 | 第54页 |
| 4.3 实验方法与步骤 | 第54-61页 |
| 4.3.1 烟草二胞原胚顶、基细胞的分离 | 第54-55页 |
| 4.3.2 烟草球形胚、心形胚的分离 | 第55页 |
| 4.3.3 Dynalbeads Oligo(dT)_(25)提取mRNA | 第55页 |
| 4.3.4 Super SMART扩增cDNA | 第55-57页 |
| 4.3.5 RT-PCR | 第57-58页 |
| 4.3.6 qPCR | 第58-61页 |
| 4.4 实验结果 | 第61-72页 |
| 4.4.1 顶基细胞RT-PCR结果 | 第61-63页 |
| 4.4.2 球形胚、心形胚RT-PCR结果 | 第63-68页 |
| 4.4.3 顶基细胞qPCR结果 | 第68-71页 |
| 4.4.4 合子qPCR结果 | 第71-72页 |
| 4.5 讨论 | 第72-75页 |
| 4.5.1 合子不等分裂产生的顶、基细胞在转录水平上存在差异 | 第72-73页 |
| 4.5.2 合子转录本的不均等分布以及细胞特异的新转录本可能参与了顶、基细胞命运决定 | 第73-75页 |
| 第五章 MAN家族基因启动子的克隆与分析 | 第75-91页 |
| 5.1 引言 | 第75页 |
| 5.2 材料试剂与仪器 | 第75-76页 |
| 5.2.1 植物材料 | 第75页 |
| 5.2.2 试剂 | 第75-76页 |
| 5.2.3 仪器设备 | 第76页 |
| 5.3 实验方法与步骤 | 第76-86页 |
| 5.3.1 5'RACE | 第76-78页 |
| 5.3.2 琼脂糖凝胶回收纯化DNA | 第78-79页 |
| 5.3.3 T载体连接 | 第79页 |
| 5.3.4 热激转化大肠杆菌DH5α | 第79页 |
| 5.3.5 菌落PCR鉴定 | 第79-80页 |
| 5.3.6 质粒提取 | 第80-81页 |
| 5.3.7 CTAB法提取基因组 | 第81页 |
| 5.3.8 MAN家族基因启动子克隆 | 第81-82页 |
| 5.3.9 pAtMAN:GUS载体构建 | 第82-83页 |
| 5.3.10 pAtMAN:GFP:NLS载体构建 | 第83-84页 |
| 5.3.11 电转化农杆菌GV3101 | 第84页 |
| 5.3.12 浸花法转化拟南芥 | 第84-85页 |
| 5.3.13 转基因植株筛选 | 第85页 |
| 5.3.14 GUS染色 | 第85-86页 |
| 5.4 实验结果 | 第86-90页 |
| 5.4.1 克隆烟草contig500的全长cDNA序列 | 第86-87页 |
| 5.4.2 contig500生物信息学分析 | 第87-88页 |
| 5.4.3 MAN家族基因芯片数据 | 第88-89页 |
| 5.4.4 pAtMAN:GUS载体构建 | 第89页 |
| 5.4.5 pAtMAN:GFP:NLS载体构建 | 第89-90页 |
| 5.5 讨论 | 第90-91页 |
| 第六章 MAN基因在有性生殖中的功能分析 | 第91-101页 |
| 6.1 引言 | 第91页 |
| 6.2 材料试剂与仪器 | 第91-92页 |
| 6.2.1 植物材料 | 第91页 |
| 6.2.2 试剂 | 第91-92页 |
| 6.2.3 仪器设备 | 第92页 |
| 6.3 实验方法与步骤 | 第92-98页 |
| 6.3.1 amiRNA设计及克隆 | 第92-95页 |
| 6.3.2 pAtMAN7:amiRNA载体构建 | 第95-97页 |
| 6.3.3 pGRP23:AtMAN7过表达载体构建 | 第97-98页 |
| 6.4 实验结果 | 第98-99页 |
| 6.4.1 pAtMAN7:amiRNA载体构建 | 第98-99页 |
| 6.4.2 pGRP23:AtMAN7过表达载体构建 | 第99页 |
| 6.5 讨论 | 第99-101页 |
| 第七章 总结 | 第101-105页 |
| 参考文献 | 第105-110页 |
| 在读期间发表和投稿论文 | 第110-111页 |
| 致谢 | 第111页 |
