| 摘要 | 第7-8页 |
| ABSTRACT | 第8页 |
| 缩略语表 | 第9-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-20页 |
| 1.1 微生物次级代谢产物及其应用 | 第11页 |
| 1.2 链霉菌生理特性及其次级代谢产物的概述 | 第11-13页 |
| 1.3 多杀菌素及其产生菌刺糖多孢菌 | 第13-18页 |
| 1.3.1 多杀菌素的产品及其应用 | 第13页 |
| 1.3.2 多杀菌素产生菌刺糖多孢菌 | 第13页 |
| 1.3.3 多杀菌素的分子结构 | 第13-14页 |
| 1.3.4 多杀菌素的生物合成基因簇 | 第14-15页 |
| 1.3.5 多杀菌素的生物合成途径 | 第15-16页 |
| 1.3.6 多杀菌素的作用机理及生物活性 | 第16-17页 |
| 1.3.7 多杀菌素类衍生物 | 第17-18页 |
| 1.4 本课题研究的立论依据、目的、意义 | 第18-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-38页 |
| 2.1 菌株 | 第20页 |
| 2.2 质粒与引物 | 第20-23页 |
| 2.3 培养基与生化试剂 | 第23-26页 |
| 2.4 放线菌菌种培养及保藏 | 第26页 |
| 2.5 大肠杆菌和刺糖多孢菌的两亲本属间接合转移 | 第26-27页 |
| 2.6 DNA基本操作 | 第27-29页 |
| 2.6.1 大肠杆菌质粒的快速检测 | 第27-28页 |
| 2.6.2 链霉菌总DNA的提取 | 第28页 |
| 2.6.3 酶连反应 | 第28-29页 |
| 2.6.4 PCR及相关技术 | 第29页 |
| 2.7 基因片段转移技术 | 第29-30页 |
| 2.7.1 大肠杆菌化学法制备感受态细胞 | 第29页 |
| 2.7.2 大肠杆菌高效电转化感受态细胞制备 | 第29-30页 |
| 2.8 原位杂交 | 第30-33页 |
| 2.8.1 放线菌cosmid文库构建 | 第30-31页 |
| 2.8.2 文库转膜 | 第31页 |
| 2.8.3 探针制备并标记 | 第31-32页 |
| 2.8.4 预杂交,杂交 | 第32页 |
| 2.8.5 洗膜 | 第32页 |
| 2.8.6 显色 | 第32页 |
| 2.8.7 脱色,脱探针 | 第32-33页 |
| 2.9 放线菌BAC文库构建 | 第33-38页 |
| 2.9.1 菌丝体plug制备 | 第33-34页 |
| 2.9.2 plugDNA部分酶切预实验 | 第34-35页 |
| 2.9.3 plugDNA部分酶切 | 第35页 |
| 2.9.4 DNA大片段分离 | 第35-36页 |
| 2.9.5 大片段DNA回收 | 第36-37页 |
| 2.9.6 BAC酶连电转化 | 第37页 |
| 2.9.7 BAC转化子酶切验证 | 第37-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-53页 |
| 3.1 刺糖多孢菌NRRL18395的遗传操作 | 第38-39页 |
| 3.2 刺糖多孢菌NRRL18395 cosmid文库的构建 | 第39-40页 |
| 3.3 鼠李糖合成相关基因的克隆及组合 | 第40-44页 |
| 3.3.1 PCR扩增epi、gtt及克隆 | 第40-41页 |
| 3.3.2 原位杂交筛选刺糖多孢菌NRRL18395 cosmid文库 | 第41-42页 |
| 3.3.3 鼠李糖和福乐糖胺合成途径的组装及PCR验证 | 第42-44页 |
| 3.4 刺糖多孢菌NRRL18395BAC文库的构建 | 第44-53页 |
| 3.4.1 Cre-LoxP体内环化克隆外源大片段DNA | 第44-45页 |
| 3.4.2 Cre-LoxP系统克隆外源基因转化子结果 | 第45-46页 |
| 3.4.3 BamHⅠ作为克隆位点常规方法构建BAC文库 | 第46-48页 |
| 3.4.4 BAC转化克隆质粒验证 | 第48-51页 |
| 3.4.5 BAC载体的改造 | 第51-53页 |
| 4 总结与讨论 | 第53-57页 |
| 4.1 总结 | 第53-54页 |
| 4.1.1 刺糖多孢菌NRRL18395的遗传操作 | 第53-54页 |
| 4.1.2 多杀菌素生物合成基因簇的克隆及组合 | 第54页 |
| 4.2 讨论 | 第54-56页 |
| 4.3 展望 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
