| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩略语 | 第9-11页 |
| 1. 文献综述 | 第11-20页 |
| 1.1 链霉菌(Streptomyces)简介 | 第11页 |
| 1.2 模式菌株天蓝色链霉菌(Streptomyces coelicolor A3(2))简介 | 第11-12页 |
| 1.3 阿维链霉菌(Streptomyces avermitilis)简介 | 第12-16页 |
| 1.3.1 阿维菌素生物合成基因簇 | 第13-14页 |
| 1.3.2 阿维链霉菌的生物合成途径 | 第14-15页 |
| 1.3.3 阿维链霉菌的全基因组测序 | 第15页 |
| 1.3.4 阿维菌素的生物合成调控机制 | 第15-16页 |
| 1.4 阿维菌素高产菌株的选育 | 第16-18页 |
| 1.5 阿维链霉菌中的转座研究 | 第18页 |
| 1.6 本研究的工作基础、目的和意义 | 第18-20页 |
| 2. 材料与方法 | 第20-35页 |
| 2.1 材料 | 第20-26页 |
| 2.1.1 菌株 | 第20页 |
| 2.1.2 质粒 | 第20-22页 |
| 2.1.3 引物 | 第22页 |
| 2.1.4 培养基及生化试剂 | 第22-25页 |
| 2.1.5 抗生素 | 第25-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-35页 |
| 2.2.1 链霉菌培养及菌种保藏 | 第26页 |
| 2.2.2 大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第26页 |
| 2.2.3 大肠杆菌质粒DNA的快速检测 | 第26-27页 |
| 2.2.4 链霉菌总DNA的提取 | 第27页 |
| 2.2.5 大肠杆菌链霉菌属间接合转移 | 第27-28页 |
| 2.2.6 大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第28页 |
| 2.2.7 Southern杂交 | 第28-30页 |
| 2.2.8 DNA片段凝胶回收 | 第30-31页 |
| 2.2.9 TA克隆 | 第31-32页 |
| 2.2.10 PCR | 第32-33页 |
| 2.2.11 阿维链霉菌的发酵 | 第33页 |
| 2.2.12 阿维链霉菌的NTG诱变 | 第33页 |
| 2.2.13 阿维菌素的HPLC测定 | 第33-35页 |
| 3. 结果与分析 | 第35-64页 |
| 3.1 阿维链霉菌双标记系统的构建 | 第35-41页 |
| 3.1.1 双标记系统简介 | 第35页 |
| 3.1.2 双标记系统质粒的构建 | 第35页 |
| 3.1.3 双标记菌株PX1的构建 | 第35-38页 |
| 3.1.4 双标记菌株PX1的发酵 | 第38-40页 |
| 3.1.5 双标记菌株PX1中双标记系统测试 | 第40-41页 |
| 3.2 基于双标记系统的阿维菌素高产菌株选育 | 第41-43页 |
| 3.2.1 双标记菌株的NTG诱变 | 第41页 |
| 3.2.2 诱变菌株的表型观察 | 第41-42页 |
| 3.2.3 诱变菌株的发酵 | 第42-43页 |
| 3.3 归位内切酶I-SceI标记在阿维链霉菌基因中断中的应用 | 第43-50页 |
| 3.3.1 归位内切酶I-Scel简介 | 第43页 |
| 3.3.2 携带I-SceI标记的基因中断载体的构建 | 第43-45页 |
| 3.3.3 携带I-SceI标记的基因中断载体的改进 | 第45-47页 |
| 3.3.4 携带I-SceI标记的基因中断载体在阿维链霉菌中的应用 | 第47-50页 |
| 3.3.4.1 melC2-melC1基因簇敲除载体的构建 | 第47页 |
| 3.3.4.2 阿维链霉菌中melC2-melC1基因簇的敲除 | 第47-49页 |
| 3.3.4.3 阿维链霉菌melC2-melC1基因簇缺失菌株的验证 | 第49-50页 |
| 3.4 阿维链霉菌中转座载体系统的研究 | 第50-64页 |
| 3.4.1 自杀型载体pHL734在阿维链霉菌中的应用 | 第50-51页 |
| 3.4.2 复制型转座载体在阿维链霉菌中的应用 | 第51-54页 |
| 3.4.2.1 复制型转座载体pHL754的构建 | 第51页 |
| 3.4.2.2 复制型转座载体pHL754丢失频率测试 | 第51-53页 |
| 3.4.2.3 复制型转座载体pHL754转座突变菌株的筛选 | 第53-54页 |
| 3.4.3 引入负筛选标记codA的复制型转座载体的应用 | 第54-57页 |
| 3.4.3.1 负筛选标记codA简介 | 第54页 |
| 3.4.3.2 携带负筛选标记codA的转座载体pHL755的构建 | 第54-56页 |
| 3.4.3.3 链霉菌中5-FC的MIC测试 | 第56-57页 |
| 3.4.3.4 转座载体pHL755在阿维链霉菌中的应用 | 第57页 |
| 3.4.4 携带I-SceI标记的复制型转座载体的应用 | 第57-61页 |
| 3.4.4.1 携带I-SceI标记的复制型转座载体pHL764的构建 | 第57-58页 |
| 3.4.4.2 转座载体pHL764在天蓝色链霉菌中的转座测试 | 第58页 |
| 3.4.4.3 接合转移子M145/pHL764的PCR验证 | 第58-59页 |
| 3.4.4.4 接合转移子M145/pHL764的测序验证及分析 | 第59-60页 |
| 3.4.4.5 转座载体pHL764在阿维链霉菌中的转座测试 | 第60-61页 |
| 3.4.5 携带I-SceI标记的复制型转座载体的改进 | 第61-64页 |
| 3.4.5.1 携带oripIJ101复制子的转座载体pHL765的构建 | 第61-62页 |
| 3.4.5.2 转座载体pHL765丢失频率计算 | 第62页 |
| 3.4.5.3 转座载体pHL765在阿维链霉菌中的应用 | 第62-63页 |
| 3.4.5.4 阿维链霉菌接合转移子NRRL8165/pHL765的测序验证及分析 | 第63-64页 |
| 4. 总结与讨论 | 第64-69页 |
| 4.1 总结 | 第64-66页 |
| 4.2 讨论 | 第66-68页 |
| 4.3 展望 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
