| 致谢 | 第8-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述(线粒体DNA突变、核修饰基因及环境因素的相互作用) | 第13-33页 |
| 1.1 引言 | 第13-14页 |
| 1.2 线粒体DNA致病突变 | 第14-19页 |
| 1.2.1 线粒体基因病 | 第14-16页 |
| 1.2.2 A1555G突变与非综合症耳聋 | 第16-19页 |
| 1.3 氨基糖苷类抗生素的耳毒性 | 第19-22页 |
| 1.3.1 氨基糖苷类抗生素结构与耳毒性 | 第19页 |
| 1.3.2 氨基糖苷类抗生素与rRNA的相互作用 | 第19-22页 |
| 1.4 核修饰基因对A1555G突变表型表达的影响 | 第22-28页 |
| 1.4.1 tRNA修饰与TRMU的基本功能 | 第22-25页 |
| 1.4.2 TRMU基因修饰A1555G表型表达 | 第25-26页 |
| 1.4.3 TRMU基因突变与急性肝衰竭 | 第26-27页 |
| 1.4.4 A1555G突变的其他核修饰基因 | 第27-28页 |
| 1.5 A1555G突变研究的酿酒酵母模型 | 第28-30页 |
| 1.6 线粒体基因病的防治与干预 | 第30-32页 |
| 1.7 结论 | 第32-33页 |
| 第二章 MTO2敲除抑制携带P_(454)~R突变酵母对氨基糖苷类抗生素的敏感性 | 第33-64页 |
| 2.1 引言 | 第33页 |
| 2.2 实验材料与方法 | 第33-49页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第33-34页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第34-49页 |
| 2.2.2.1 酿酒酵母菌株活化 | 第34页 |
| 2.2.2.2 MTO2基因型确定及15S rRNA二级结构分析 | 第34-37页 |
| 2.2.2.3 酿酒酵母菌株的表型鉴定 | 第37页 |
| 2.2.2.4 酵母生长曲线绘制与倍增时间计算 | 第37-38页 |
| 2.2.2.5 酵母菌株呼吸速率测定 | 第38页 |
| 2.2.2.6 线粒体膜电位检测 | 第38-39页 |
| 2.2.2.7 Northern杂交分析RNA转录水平 | 第39-44页 |
| 2.2.2.8 抑菌圈法测定酵母的新霉素摄入量 | 第44页 |
| 2.2.2.9 酵母菌株对抗生素的依赖性 | 第44-45页 |
| 2.2.2.10 Western杂交分析已糖激酶翻译水平 | 第45-49页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第49-60页 |
| 2.3.1 酵母P_(454)~R突变与人A1555G/C1494T突变同源 | 第49-50页 |
| 2.3.2 MTO2敲除抑制携带P_(454)~R突变酵母对新霉素的敏感性 | 第50-51页 |
| 2.3.3 MTO2敲除抑制携带P_(454)~R突变酵母对新霉素敏感性的机制研究 | 第51-58页 |
| 2.3.3.1 新霉素处理抑制携带P_(454)~R突变菌株的有氧呼吸 | 第51-52页 |
| 2.3.3.2 新霉素处理降低携带P_(454)~R突变菌株的线粒体膜电位 | 第52-53页 |
| 2.3.3.3 线粒体基因转录水平的变化 | 第53-55页 |
| 2.3.3.4 糖酵解调控基因表达水平的变化 | 第55-56页 |
| 2.3.3.5 酵母菌株的新霉素摄入量 | 第56-57页 |
| 2.3.3.6 酵母菌株新霉素抗性基因的表达水平 | 第57-58页 |
| 2.3.4 MTO2敲除抑制携带P_(454)~R突变菌株对4,5-氨基糖苷类抗生素的敏感性 | 第58-59页 |
| 2.3.5 mto2(P~R)菌株的巴龙霉素依赖性 | 第59-60页 |
| 2.4 讨论 | 第60-63页 |
| 2.4.1 PR454突变与氨基糖苷类抗生素敏感性 | 第60-61页 |
| 2.4.2 MTO2调控P_(454)~R突变相关抗生素敏感性的机制 | 第61-62页 |
| 2.4.3 mto2(P~R)菌株的巴龙霉素依赖性 | 第62-63页 |
| 2.5 结论 | 第63-64页 |
| 第三章 人TRMU cDNA转化菌株的抗生素敏感性研究 | 第64-79页 |
| 3.1 引言 | 第64页 |
| 3.2 实验材料与方法 | 第64-68页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第64页 |
| 3.2.2 实验方法 | 第64-68页 |
| 3.2.2.1 pDB20/hTRMU表达质粒构建 | 第65页 |
| 3.2.2.2 pGFP-c-Fus/hTRMU表达质粒构建 | 第65-66页 |
| 3.2.2.3 LiAc-DMSO法转化酵母菌株 | 第66-67页 |
| 3.2.2.4 Trmu在酵母中的亚细胞定位 | 第67页 |
| 3.2.2.5 酵母菌株的呼吸速率测定 | 第67页 |
| 3.2.2.6 线粒体膜电位检测 | 第67页 |
| 3.2.2.7 Northern杂交检测COX1、CYTB转录水平 | 第67-68页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第68-75页 |
| 3.3.1 TRMUA10S突变抑制P_(454)~R突变酵母的新霉素敏感性 | 第68-70页 |
| 3.3.2 Trmu蛋白质在酵母线粒体中特异性表达 | 第70-71页 |
| 3.3.3 TRMUA10S突变抑制携带P_(454)~R突变菌株新霉素敏感性的机制研究 | 第71-75页 |
| 3.3.3.1 TRMU转化菌株的呼吸速率 | 第71-72页 |
| 3.3.3.2 线粒体膜电位检测 | 第72-74页 |
| 3.3.3.3 TRMU异源表达对COX1、CYTB转录水平的影响 | 第74-75页 |
| 3.3.4 TRMUA10S突变抑制携带A1555G突变淋巴细胞的抗生素敏感性 | 第75页 |
| 3.4 讨论 | 第75-78页 |
| 3.4.1 TRMU A10S突变抑制线粒体突变相关的抗生素敏感性 | 第75-76页 |
| 3.4.2 酿酒酵母作为模式生物研究线粒体耳聋的优劣 | 第76-77页 |
| 3.4.3 酵母MTO2敲除与人TRMU A10S突变的异同 | 第77页 |
| 3.4.4 TRMUA10S突变抑制A1555G突变细胞抗生素敏感性的启示 | 第77-78页 |
| 3.5 本章小结 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-84页 |
| 附录Ⅰ：主要试剂的配制方法 | 第84-90页 |
| 附录Ⅱ：英文缩略词 | 第90-91页 |
| 作者简介 | 第91页 |
