| 中文摘要 | 第1-15页 |
| 英文摘要 | 第15-17页 |
| 1 前言 | 第17-25页 |
| ·卡尔文循环 | 第17-19页 |
| ·景天庚酮糖-1, 7-二磷酸酯酶（SBPase） | 第19-23页 |
| ·SBPase的结构 | 第20-21页 |
| ·SBPase的性质与功能 | 第21-22页 |
| ·SBPase基因克隆与表达调控 | 第22-23页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| ·技术路线 | 第24-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-44页 |
| ·供试材料 | 第25-27页 |
| ·植物材料 | 第25页 |
| ·材料处理 | 第25页 |
| ·菌株与载体 | 第25-26页 |
| ·酶及生化试剂 | 第26页 |
| ·PCR引物 | 第26-27页 |
| ·培养基（见附录） | 第27页 |
| ·试验方法 | 第27-43页 |
| ·总RNA 的提取 | 第27页 |
| ·cDNA第一条链的合成 | 第27-28页 |
| ·SBPase基因全长的克隆 | 第28-33页 |
| ·中间片段的获得 | 第28-29页 |
| ·3′RACE 获得3′端序列 | 第29页 |
| ·5′RACE 获得5′端序列 | 第29-31页 |
| ·全长cDNA的克隆 | 第31页 |
| ·目的基因的回收 | 第31-32页 |
| ·目的基因的连接与转化 | 第32页 |
| ·碱法小量提取质粒DNA | 第32-33页 |
| ·序列分析 | 第33页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第33-35页 |
| ·引物设计 | 第33页 |
| ·表达载体构建 | 第33-34页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第34-35页 |
| ·农杆菌介导转化番茄 | 第35-36页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第35页 |
| ·冻融法转化农杆菌 | 第35页 |
| ·利用农杆菌介导转化番茄 | 第35-36页 |
| ·转基因番茄植株的PCR检测 | 第36-37页 |
| ·植株基因组DNA的提取 | 第36-37页 |
| ·转基因植株的PCR筛选 | 第37页 |
| ·原核表达载体的构建及Western 杂交 | 第37-41页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第37-38页 |
| ·组氨酸标签融合蛋白的表达 | 第38页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第38页 |
| ·蛋白的纯化 | 第38-39页 |
| ·抗体的制备 | 第39页 |
| ·抗血清效价的测定 | 第39页 |
| ·Western杂交 | 第39-41页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第41-42页 |
| ·反转录反应 | 第41页 |
| ·基因表达 | 第41-42页 |
| ·SBPase活性的测定 | 第42页 |
| ·转基因番茄生长和生理指标的测定 | 第42-43页 |
| ·生长指标 | 第42页 |
| ·光合速率、最大光合速率和RuBP再生速率 | 第42页 |
| ·叶绿素荧光参数 | 第42-43页 |
| ·淀粉含量 | 第43页 |
| ·可溶性糖含量 | 第43页 |
| ·电解质渗漏率 | 第43页 |
| ·数据分析 | 第43-44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-77页 |
| ·番茄SBPase基因的分离及序列分析 | 第44-48页 |
| ·LeSBP的分离 | 第44-45页 |
| ·LeSBP的序列分析 | 第45-48页 |
| ·LeSBP的表达分析 | 第48-55页 |
| ·LeSBP在大肠杆菌中的表达 | 第48-51页 |
| ·原核表达载体pET-LeSBP的构建 | 第48-50页 |
| ·组氨酸标签融合蛋白的表达 | 第50-51页 |
| ·LeSBP在番茄中的表达特性 | 第51-55页 |
| ·LeSBP在番茄不同组织中的表达 | 第51-52页 |
| ·LeSBP在番茄不同叶位叶片中的表达 | 第52-53页 |
| ·番茄功能叶片的LeSBP 表达昼夜变化 | 第53-55页 |
| ·番茄叶片的净光合速率 | 第55页 |
| ·LeSBP在番茄中的遗传转化 | 第55-60页 |
| ·正、反义表达载体的构建 | 第55-57页 |
| ·正、反义表达载体的鉴定 | 第57页 |
| ·转正、反义LeSBP植株的分子鉴定 | 第57-60页 |
| ·LeSBP过量表达对番茄光合作用及生长发育的影响 | 第60-64页 |
| ·转正义LeSBP番茄叶片的SBPase活性 | 第60页 |
| ·LeSBP过量表达对番茄光合速率的影响 | 第60-61页 |
| ·LeSBP过量表达对番茄碳水化合物含量的影响 | 第61页 |
| ·LeSBP过量表达对番茄生长发育的影响 | 第61-64页 |
| ·对株高和茎粗的影响 | 第62页 |
| ·对叶片大小的影响 | 第62-63页 |
| ·对生物量的影响 | 第63-64页 |
| ·对初花期的影响 | 第64页 |
| ·LeSBP的缺失对光合作用及生长发育的影响 | 第64-69页 |
| ·转反义LeSBP番茄叶片的SBPase活性 | 第64-65页 |
| ·LeSBP缺失对番茄叶片光合速率的影响 | 第65-66页 |
| ·LeSBP缺失对番茄叶片碳水化合物含量的影响 | 第66页 |
| ·LeSBP缺失对番茄生长发育的影响 | 第66-69页 |
| ·对株高和茎粗的影响 | 第66-67页 |
| ·对叶片大小的影响 | 第67-68页 |
| ·对生物量的影响 | 第68页 |
| ·对初花期的影响 | 第68-69页 |
| ·转基因番茄植株的耐冷性分析 | 第69-77页 |
| ·LeSBP过量表达对番茄耐冷性的影响 | 第69-73页 |
| ·低温下正义植株LeSBP 表达和SBPase活性变化 | 第69-70页 |
| ·低温下正义番茄植株叶片光合速率的变化 | 第70-71页 |
| ·低温下正义植株RuBP再生速率的变化 | 第71页 |
| ·低温下正义番茄植株叶片光化学效率的变化 | 第71-72页 |
| ·低温下正义番茄植株叶片电解质渗漏率的变化 | 第72-73页 |
| ·LeSBP的缺失对番茄耐冷性的影响 | 第73-77页 |
| ·低温下反义植株LeSBP 表达和SBPase活性的变化 | 第73页 |
| ·低温下反义番茄植株叶片光合速率的变化 | 第73-74页 |
| ·低温下反义植株RuBP再生速率的变化 | 第74-75页 |
| ·低温下反义番茄植株叶片光化学效率的变化 | 第75页 |
| ·低温下反义番茄植株叶片电解质渗漏率的变化 | 第75-77页 |
| 4 讨论 | 第77-80页 |
| ·番茄LeSBP 的基因序列特征 | 第77-78页 |
| ·日光温室番茄SBPase活性及基因表达特性与光合速率的关系 | 第78页 |
| ·过量表达LeSBP可提高番茄的光合功能及生长速率 | 第78-79页 |
| ·LeSBP 的缺失抑制番茄光合作用和生长发育 | 第79页 |
| ·LeSBP 过量表达可提高番茄的低温耐性 | 第79-80页 |
| 5 结论 | 第80-82页 |
| 参考文献 | 第82-93页 |
| 附录 | 第93-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第100-101页 |
| 博士学位论文内容简介及自评 | 第101页 |
