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白灵侧耳结实相关基因的克隆及表达分析

摘要第4-5页
Abstracts第5-6页
1 引言第10-20页
    1.1 白灵侧耳概述第10页
        1.1.1 我国白灵侧耳分布及分类地位第10页
        1.1.2 形态特征及食药用价值第10页
    1.2 外界因素对食用菌结实的影响第10-13页
        1.2.1 营养因素第11-12页
            1.2.1.1 碳源第11页
            1.2.1.2 氮源第11页
            1.2.1.3 碳氮比第11页
            1.2.1.4 矿质元素第11页
            1.2.1.5 生长激素第11-12页
        1.2.2 环境因素第12-13页
            1.2.2.1 光第12页
            1.2.2.2 温度第12-13页
            1.2.2.3 湿度第13页
            1.2.2.4 通风第13页
    1.3 遗传因素对食用菌结实的影响第13-15页
        1.3.1 与多种食用菌结实相关的基因及蛋白第13-14页
        1.3.2 与食用菌结实相关的其他基因及蛋白第14-15页
    1.4 食用菌领域基因差异表达的研究方法第15-19页
        1.4.1 基因表达系列分析(SAGE)第16页
        1.4.2 代表性差异分析(RDA)第16-17页
        1.4.3 抑制性消减杂交(SSH)第17页
        1.4.4 mRNA 差异显示技术(DDRT-PCR)第17-19页
            1.4.4.1 mRNA 差异显示技术概述第17-18页
            1.4.4.2 mRNA 差异显示技术在食用菌研究中的应用第18页
            1.4.4.3 mRNA 差异显示技术的优缺点第18-19页
    1.5 本研究的目的及意义第19-20页
2 试验材料第20-24页
    2.1 供试菌株第20页
    2.2 供试培养基及制备第20页
    2.3 供试试剂第20-23页
        2.3.1 RNA 提取与纯化试剂第20-21页
        2.3.2 反转录试剂盒第21页
        2.3.3 琼脂糖凝胶电泳试剂第21页
        2.3.4 聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳试剂第21页
        2.3.5 差异显示 PCR 反应试剂第21-22页
        2.3.6 胶回收试剂盒第22页
        2.3.7 T 克隆试剂第22-23页
    2.4 供试仪器第23-24页
3 试验方法第24-32页
    3.1 白灵菇菌丝体的培养及原基的获得第24页
    3.2 总 RNA 提取第24-25页
        3.2.1 RNA 提取预处理第24页
        3.2.2 RNA 提取(LiCl 沉淀法)第24-25页
        3.2.3 消解 RNA 中的 DNA 污染第25页
    3.3 cDNA 第一链的合成第25-26页
    3.4 内参基因的扩增第26页
    3.5 mRNA 差异显示分析第26-27页
    3.6 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测第27页
    3.7 差异条带回收及二次扩增第27-28页
    3.8 目的片段的回收及纯化第28页
    3.9 差异片段克隆第28-30页
        3.9.1 差异片段与 T 载体连接第28-29页
        3.9.2 转化第29页
        3.9.3 阳性克隆检测第29-30页
    3.10 半定量 PCR 验证第30-31页
    3.11 差异片段的同源性分析第31-32页
4 结果与分析第32-38页
    4.1 总 RNA 提取分析第32页
    4.2 内参基因扩增第32-33页
    4.3 差异显示分析第33-34页
    4.4 片段回收及二次扩增第34-35页
    4.5 克隆测序及半定量 PCR 验证第35-36页
    4.6 发育相关差异基因片段序列分析第36-38页
5 讨论第38-41页
    5.1 差异片段在发育中的作用机制第38-39页
    5.2 本研究存在的问题及对策第39-41页
6 结论第41-42页
附录第42-44页
参考文献第44-52页
作者简历第52-53页
致谢第53-54页

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