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红树林来源Streptomyces sp.OUC6819中Drimentines类化合物生物合成研究

摘要第5-7页
Abstract第7-8页
第一章 前言第12-25页
    1.1 链霉菌简介第12-13页
    1.2 天然产物及其应用第13-14页
    1.3 非核糖体肽类(NRPs)化合物第14-19页
        1.3.1 通过改变单体的识别改造NRPs第16-17页
        1.3.2 通过改变单体数改造NRPs第17-18页
        1.3.3 通过修饰酶结构修饰NRPs第18-19页
    1.4 异戊二烯化生物碱类化合物第19-21页
    1.5 二酮哌嗪(Diketopiperazines,DKPs)第21-23页
    1.6 本课题研究目的和意义第23-25页
第二章 Streptomycessp.OUC6819基因组文库的构建第25-38页
    2.1 引言第25-26页
    2.2 实验材料第26-30页
        2.2.1 菌株与质粒第26页
        2.2.2 主要实验仪器第26-27页
        2.2.3 实验试剂第27页
        2.2.4 培养基与缓冲液配方第27-30页
    2.3 实验方法第30-36页
        2.3.1 菌种保藏第30-31页
        2.3.2 大肠杆菌质粒的快速提取第31页
        2.3.3 碱裂解法质粒提取步骤第31页
        2.3.4 质粒去RNA处理第31-32页
        2.3.5 链霉菌总DNA提取第32页
        2.3.6 载体的去磷酸化第32页
        2.3.7 Streptomycessp.OUC6819基因组DNA的纯化第32-33页
        2.3.8 Streptomycessp.OUC6819基因组DNA的部分酶切第33-34页
        2.3.9 载体SuperCos1的处理及与目的片段的连接第34-35页
        2.3.10 噬菌体体外包装第35页
        2.3.11 侵染宿主菌第35-36页
        2.3.12 基因组文库质量检测及保存第36页
    2.4 结果与分析第36-37页
        2.4.1 载体与基因组DNA的处理第36-37页
        2.4.2 文库质量及随机性检测第37页
    2.5 本章小结第37-38页
第三章 Drimentines生物合成基因簇的克隆与分析第38-51页
    3.1 引言第38页
    3.2 实验材料第38-39页
        3.2.1 实验菌株与质粒第38-39页
        3.2.2 引物第39页
    3.3 实验方法第39-44页
        3.3.1 E.coli电转化感受态细胞的制备及转化第39-40页
        3.3.2 链霉菌与大肠杆菌间的接合转移第40-41页
        3.3.3 发酵30第41页
        3.3.4 PCR30第41-42页
        3.3.5 胶回收目的片段(50bp-40kb)第42-43页
        3.3.6 PCR产物纯化试剂盒(100bp-10kb)第43页
        3.3.7 加A反应第43-44页
        3.3.8 序列分析网站第44页
    3.4 结果与分析第44-50页
        3.4.1 D rimentines基因簇的克隆第44-45页
        3.4.2 含有gap的DNA片段的亚克隆第45-46页
        3.4.3 Drimentines生物合成基因簇的基因结构分析与注释第46-48页
        3.4.4 Drimentines生物合成基因簇的鉴定第48-50页
    3.5 本章小结第50-51页
第四章 Drimentines基因簇在天蓝色链霉菌中表达研究第51-59页
    4.1 引言第51页
    4.2 实验材料第51-52页
        4.2.1 实验菌株及质粒第51-52页
        4.2.3 引物第52页
    4.3 实验方法第52页
    4.4 结果与分析第52-58页
        4.4.1 Cos4在天蓝色链霉菌中的表达第52-54页
        4.4.2 pHC2在天蓝色链霉菌中的表达第54-56页
        4.4.3 pHC5在天蓝色链霉菌中的表达第56-58页
    4.5 本章小结第58-59页
第五章 DriM的体外表达与产物酶学性质研究第59-72页
    5.1 引言第59页
    5.2 实验材料第59-61页
        5.2.1 菌株及质粒第59页
        5.2.2 缓冲液第59-60页
        5.2.3 引物第60-61页
    5.3 方法第61-65页
        5.3.1 目的基因的扩增及载体的处理第61-62页
        5.3.2 酶的表达第62页
        5.3.3 酶的纯化第62-63页
        5.3.4 聚丙烯酰胺凝胶电泳第63-64页
        5.3.5 蛋白浓度测定第64页
        5.3.6 酶催化活性的检测第64-65页
    5.4 结果与分析第65-71页
        5.4.1 pET28a::driM重组质粒构建第65-66页
        5.4.2 DriM的表达第66-67页
        5.4.3 DriM的催化活性第67-71页
    5.5 讨论第71-72页
第六章 总结与展望第72-74页
    6.1 本研究工作总结第72页
    6.2 主要创新点第72-73页
    6.3 Drimentines生物合成研究工作展望第73-74页
参考文献第74-79页
致谢第79-80页
个人简历、在学校期间发表的学术论文与研究成果第80-81页
符号简写第81-83页

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