| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 前言 | 第12-25页 |
| 1.1 链霉菌简介 | 第12-13页 |
| 1.2 天然产物及其应用 | 第13-14页 |
| 1.3 非核糖体肽类(NRPs)化合物 | 第14-19页 |
| 1.3.1 通过改变单体的识别改造NRPs | 第16-17页 |
| 1.3.2 通过改变单体数改造NRPs | 第17-18页 |
| 1.3.3 通过修饰酶结构修饰NRPs | 第18-19页 |
| 1.4 异戊二烯化生物碱类化合物 | 第19-21页 |
| 1.5 二酮哌嗪(Diketopiperazines,DKPs) | 第21-23页 |
| 1.6 本课题研究目的和意义 | 第23-25页 |
| 第二章 Streptomycessp.OUC6819基因组文库的构建 | 第25-38页 |
| 2.1 引言 | 第25-26页 |
| 2.2 实验材料 | 第26-30页 |
| 2.2.1 菌株与质粒 | 第26页 |
| 2.2.2 主要实验仪器 | 第26-27页 |
| 2.2.3 实验试剂 | 第27页 |
| 2.2.4 培养基与缓冲液配方 | 第27-30页 |
| 2.3 实验方法 | 第30-36页 |
| 2.3.1 菌种保藏 | 第30-31页 |
| 2.3.2 大肠杆菌质粒的快速提取 | 第31页 |
| 2.3.3 碱裂解法质粒提取步骤 | 第31页 |
| 2.3.4 质粒去RNA处理 | 第31-32页 |
| 2.3.5 链霉菌总DNA提取 | 第32页 |
| 2.3.6 载体的去磷酸化 | 第32页 |
| 2.3.7 Streptomycessp.OUC6819基因组DNA的纯化 | 第32-33页 |
| 2.3.8 Streptomycessp.OUC6819基因组DNA的部分酶切 | 第33-34页 |
| 2.3.9 载体SuperCos1的处理及与目的片段的连接 | 第34-35页 |
| 2.3.10 噬菌体体外包装 | 第35页 |
| 2.3.11 侵染宿主菌 | 第35-36页 |
| 2.3.12 基因组文库质量检测及保存 | 第36页 |
| 2.4 结果与分析 | 第36-37页 |
| 2.4.1 载体与基因组DNA的处理 | 第36-37页 |
| 2.4.2 文库质量及随机性检测 | 第37页 |
| 2.5 本章小结 | 第37-38页 |
| 第三章 Drimentines生物合成基因簇的克隆与分析 | 第38-51页 |
| 3.1 引言 | 第38页 |
| 3.2 实验材料 | 第38-39页 |
| 3.2.1 实验菌株与质粒 | 第38-39页 |
| 3.2.2 引物 | 第39页 |
| 3.3 实验方法 | 第39-44页 |
| 3.3.1 E.coli电转化感受态细胞的制备及转化 | 第39-40页 |
| 3.3.2 链霉菌与大肠杆菌间的接合转移 | 第40-41页 |
| 3.3.3 发酵30 | 第41页 |
| 3.3.4 PCR30 | 第41-42页 |
| 3.3.5 胶回收目的片段(50bp-40kb) | 第42-43页 |
| 3.3.6 PCR产物纯化试剂盒(100bp-10kb) | 第43页 |
| 3.3.7 加A反应 | 第43-44页 |
| 3.3.8 序列分析网站 | 第44页 |
| 3.4 结果与分析 | 第44-50页 |
| 3.4.1 D rimentines基因簇的克隆 | 第44-45页 |
| 3.4.2 含有gap的DNA片段的亚克隆 | 第45-46页 |
| 3.4.3 Drimentines生物合成基因簇的基因结构分析与注释 | 第46-48页 |
| 3.4.4 Drimentines生物合成基因簇的鉴定 | 第48-50页 |
| 3.5 本章小结 | 第50-51页 |
| 第四章 Drimentines基因簇在天蓝色链霉菌中表达研究 | 第51-59页 |
| 4.1 引言 | 第51页 |
| 4.2 实验材料 | 第51-52页 |
| 4.2.1 实验菌株及质粒 | 第51-52页 |
| 4.2.3 引物 | 第52页 |
| 4.3 实验方法 | 第52页 |
| 4.4 结果与分析 | 第52-58页 |
| 4.4.1 Cos4在天蓝色链霉菌中的表达 | 第52-54页 |
| 4.4.2 pHC2在天蓝色链霉菌中的表达 | 第54-56页 |
| 4.4.3 pHC5在天蓝色链霉菌中的表达 | 第56-58页 |
| 4.5 本章小结 | 第58-59页 |
| 第五章 DriM的体外表达与产物酶学性质研究 | 第59-72页 |
| 5.1 引言 | 第59页 |
| 5.2 实验材料 | 第59-61页 |
| 5.2.1 菌株及质粒 | 第59页 |
| 5.2.2 缓冲液 | 第59-60页 |
| 5.2.3 引物 | 第60-61页 |
| 5.3 方法 | 第61-65页 |
| 5.3.1 目的基因的扩增及载体的处理 | 第61-62页 |
| 5.3.2 酶的表达 | 第62页 |
| 5.3.3 酶的纯化 | 第62-63页 |
| 5.3.4 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第63-64页 |
| 5.3.5 蛋白浓度测定 | 第64页 |
| 5.3.6 酶催化活性的检测 | 第64-65页 |
| 5.4 结果与分析 | 第65-71页 |
| 5.4.1 pET28a::driM重组质粒构建 | 第65-66页 |
| 5.4.2 DriM的表达 | 第66-67页 |
| 5.4.3 DriM的催化活性 | 第67-71页 |
| 5.5 讨论 | 第71-72页 |
| 第六章 总结与展望 | 第72-74页 |
| 6.1 本研究工作总结 | 第72页 |
| 6.2 主要创新点 | 第72-73页 |
| 6.3 Drimentines生物合成研究工作展望 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 个人简历、在学校期间发表的学术论文与研究成果 | 第80-81页 |
| 符号简写 | 第81-83页 |
