| 摘要 | 第3-13页 |
| ABSTRACT | 第13-23页 |
| 第一章 前言 | 第28-46页 |
| 参考文献 | 第43-46页 |
| 第二章 实验方法和步骤 | 第46-74页 |
| 主要实验试剂和耗材 | 第46-74页 |
| 1. 材料 | 第46-74页 |
| 1.1 主要仪器设备 | 第46-47页 |
| 1.2 主要实验试剂和耗材 | 第47-74页 |
| 第三章 实验结果 | 第74-138页 |
| 1、软骨分化过程中MTORC1通路活性发生变化 | 第74-78页 |
| 1.1 随着软骨细胞分化,mTORC1通路活性发生相应改变 | 第74-75页 |
| 1.2 体外培养的原代软骨细胞随着肥大分化,mTORC1活性降低 | 第75-76页 |
| 1.3 ITS诱导培养基及普通培养基诱导软骨肥大分化的比较 | 第76页 |
| 1.4 TSC1蛋白随着软骨分化表达量随之发生变化 | 第76-77页 |
| 1.5 讨论及结论 | 第77-78页 |
| 2、雷帕霉素促进软骨细胞终末肥大分化 | 第78-82页 |
| 2.1 雷帕霉素能够有效抑制软骨细胞增殖 | 第78-79页 |
| 2.2 雷帕霉素对于原代软骨细胞肥大分化的影响 | 第79-80页 |
| 2.3 雷帕霉素促进小鼠软骨细胞终末分化 | 第80-81页 |
| 2.4 讨论及结论 | 第81-82页 |
| 3、软骨细胞内过度激活的MTORC1通路会导致小鼠软骨发育不良 | 第82-89页 |
| 3.1 构建的TSC1CKO小鼠敲除效果 | 第82-83页 |
| 3.2 TSC1CKO小鼠软骨细胞mTORC1过度活化 | 第83-84页 |
| 3.3 TSC1CKO小鼠表现出侏儒的症状 | 第84-86页 |
| 3.4 TSCICKO软骨肥大分化出现异常 | 第86-88页 |
| 3.5 TSC1CKO小鼠出现胸椎前凸 | 第88页 |
| 3.6 讨论及结论 | 第88-89页 |
| 4、TSC1CKO小鼠软骨细胞增殖增加 | 第89-93页 |
| 4.1 TSC1CKO小鼠的软骨细胞处于增殖期的增多 | 第89页 |
| 4.2 BrdU免疫荧光显示TSC1CKO小鼠软骨细胞增殖增多 | 第89-91页 |
| 4.3 Cyclin B1免疫组化显示TSC1CKO小鼠软骨细胞增殖增加 | 第91页 |
| 4.4 TSC1CKO小鼠软骨细胞增殖曲线以及PCNA、Cyclin D1、CyclinB1的表达情况 | 第91-92页 |
| 4.5 讨论及总结 | 第92-93页 |
| 5 、过度激活的MTORC1通路抑制软骨细胞的成熟分化 | 第93-102页 |
| 5.1 TSC1CKO小鼠生长板增厚是由于肥大细胞增多 | 第93-94页 |
| 5.2 TSC1CKO小鼠肥大分化相关基因表达降低 | 第94页 |
| 5.3 TSC1CKO小鼠软骨肥大分化相关蛋白表达降低 | 第94-96页 |
| 5.4 BrdU chase显示TSC1CKO小鼠软骨细胞肥大分化变慢 | 第96-97页 |
| 5.5 Western blots对TSC1CKO小鼠软骨细胞周期的影响 | 第97-98页 |
| 5.6 p57KIP2表达减少导致软骨细胞肥大分化变慢 | 第98-99页 |
| 5.7 TSC1CKO小鼠终末肥大分化受阻 | 第99-100页 |
| 5.8 TSC1CKO小鼠骨化延迟 | 第100-101页 |
| 5.9 讨论及总结 | 第101-102页 |
| 6 、雷帕霉素可以抑制TSC1敲除小鼠的软骨发育不良表型的发生 | 第102-108页 |
| 6.1 喂饲雷帕霉素可以降低TSC1CKO小鼠的死亡率 | 第102-103页 |
| 6.2 雷帕霉素能够改善TSC1CKO软骨发育不良表型 | 第103-104页 |
| 6.3 雷帕霉素可以降低TSC1CKO小鼠生长板肥大区高度 | 第104-105页 |
| 6.4 雷帕霉素对TSC1CKO小鼠增殖的影响 | 第105页 |
| 6.5 喂饲雷帕霉素对TSC1CKO小鼠软骨肥大分化及终末肥大分化的影响 | 第105-106页 |
| 6.6 TSC1CKO小鼠软骨细胞高表达HIF1a | 第106-107页 |
| 6.7 讨论及总结 | 第107-108页 |
| 7、TSC1CKO小鼠软骨细胞PTHRP表达增高 | 第108-124页 |
| 7.1 TSC1CKO小鼠软骨细胞IHH-PTHrP情况 | 第108-109页 |
| 7.2 TSC1CKO小鼠软骨细胞IHH过度活化 | 第109-111页 |
| 7.3 雷帕霉素能够抑制TSC1CKO小鼠的PTHrP的过表达 | 第111-112页 |
| 7.4 雷帕霉素对于PTHrP、Gli1、Patchcd1表达的影响 | 第112页 |
| 7.5 雷帕霉素对TSC1CKO小鼠软骨细胞增殖的影响 | 第112-113页 |
| 7.6 Gli2 siRNA干扰可以降低PTHrP表达 | 第113-114页 |
| 7.7 雷帕霉素对于Gli2过表达的影响 | 第114-115页 |
| 7.8 IGF-1刺激对PTHrP表达的影响 | 第115页 |
| 7.9 S6K1过表达对于PTHrP及Patched1表达的影响 | 第115-116页 |
| 7.10 S6K1、Gli2过表达对于PTHrP水平的影响 | 第116-117页 |
| 7.11 GDC-0449不能抑制TSC1CKO增殖 | 第117-119页 |
| 7.12 雷帕霉素可以抑制TSC1CKO小鼠软骨细胞过度表达的Gli1、Patched1、PTHrP | 第119-120页 |
| 7.13 TSC1敲除对于Gli2和PTHrP启动子之间结合能力的影响 | 第120页 |
| 7.14 TSC1对于IHH表达的影响 | 第120-121页 |
| 7.15 Patched1在TSC1CKO小鼠及TSC1~(flox/flox)软骨细胞上的表达 | 第121-122页 |
| 7.16 TSC1、pS6、PTHrP、Patched1的表达情况 | 第122-124页 |
| 7.17 讨论及总结 | 第124页 |
| 8、MTORC1/S6K1通路通过影响GLI2来调控PTHRP分泌 | 第124-134页 |
| 8.1 S6K1在体内可以同Gli1、Gli2蛋白结合 | 第124-125页 |
| 8.2 TSC1CKO小鼠软骨细胞中Gli2蛋白磷酸化增多 | 第125-126页 |
| 8.3 TSC1敲除影响Gli1、Gli2的核浆分布 | 第126-127页 |
| 8.4 S6K1过表达对于Gli1、Gli2核浆分布的影响 | 第127页 |
| 8.5 TSC1敲除对Gli2核浆分布的影响 | 第127-128页 |
| 8.6 IGF-1对Gli1、Gli2核浆分布的影响 | 第128-129页 |
| 8.7 TSC1敲除影响了SuFu同Gli1、Gli2的结合 | 第129-130页 |
| 8.8 Gli2突变体对于Gli2同SuFu结合能力的影响 | 第130-131页 |
| 8.9 Gli2突变体对于PTHrP、Gli1表达的影响 | 第131-132页 |
| 8.10 过表达S6K1对于PTHrP、Gli1、Patched1表达的影响 | 第132页 |
| 8.11 TSC1CKO小鼠软骨细胞以及雷帕霉素处理过后的PTHrP表达情况 | 第132-133页 |
| 8.12 讨论及总结 | 第133-134页 |
| 9、TSC1敲除对于软骨内成骨影响,以及GLI1、GLI2通路的影响模式图 | 第134-135页 |
| 参考文献 | 第135-138页 |
| 第四章 讨论 | 第138-143页 |
| 参考文献 | 第141-143页 |
| 第五章 结论 | 第143-144页 |
| 附录 | 第144-145页 |
| 成果 | 第145-147页 |
| 致谢 | 第147-149页 |
