| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 中文摘要 | 第12-13页 |
| ABBREVIATION | 第13-15页 |
| 1. INTRODUCTION | 第15-39页 |
| 1.1. Bovine herpervirus 1(Bo HV-1) | 第17-18页 |
| 1.2. Virus structure | 第18-20页 |
| 1.3. Bo HV-1 replication | 第20-29页 |
| 1.3.1. Transcription of Bo HV-1 genome | 第22-24页 |
| 1.3.2. Assembly and egress of virions | 第24-28页 |
| 1.3.3. Release/Exit of virions | 第28-29页 |
| 1.4. Latency- reactivation | 第29-34页 |
| 1.4.1. Establishment of latency | 第29-30页 |
| 1.4.2. Maintenance of latency | 第30页 |
| 1.4.3. Reactivation from latency | 第30-32页 |
| 1.4.4. Latency related gene | 第32-34页 |
| 1.5. Immune evasion strategies adopted by Bo HV-1 | 第34-35页 |
| 1.6. Role of tegument proteins in viral assembly and egress | 第35-37页 |
| 1.7. Bovine herpesvirus 1 UL51 Protein (p UL51) | 第37-38页 |
| 1.8. Objective of this study | 第38-39页 |
| 2. MATERIALS AND METHODS | 第39-73页 |
| 2.1. Virus strain and cell line | 第39页 |
| 2.2. Plasmid Vectors and Escheresia coli (E. coli) | 第39页 |
| 2.3. Reagents and Equipments | 第39-44页 |
| 2.3.1. Cell growth medium | 第39页 |
| 2.3.2. Cell maintenance medium | 第39页 |
| 2.3.3. 2x DMEM | 第39-40页 |
| 2.3.4. 1.6-2% low melting point agarose | 第40页 |
| 2.3.5. Virus genome extraction and transfection reagents | 第40-41页 |
| 2.3.6. Escherichia coli culture media and related reagents | 第41-43页 |
| 2.3.7. SDS PAGE & Western Blot | 第43-44页 |
| 2.4. Construction of Bo HV-1 bavcterial artificial chromosome (BAC): | 第44-54页 |
| 2.4.1. Construction steps of BAC transfer vector | 第45-46页 |
| 2.4.2. Recovery and purification of PCR product | 第46-49页 |
| 2.4.3. Viral genome extraction | 第49-50页 |
| 2.4.4. Co-transfection of p MD-g B-p HA2-UL26 with viral genome | 第50-51页 |
| 2.4.5. Purification of v Bo HV-1 | 第51页 |
| 2.4.6. Identification and isolation of circular Bo HV-1BAC DNA | 第51-52页 |
| 2.4.7. Electroporation of recombinant Bo HV-1 BAC genome and screening of its clones | 第52-53页 |
| 2.4.8. Excise the BAC sequence and rescue virus | 第53-54页 |
| 2.5. Construction of p UL51 mutant virus | 第54-57页 |
| 2.5.1. PCR amplification of I-Sce Kan DNA fragment | 第54页 |
| 2.5.2. First step red recombination | 第54-55页 |
| 2.5.3. Second red recombination | 第55-57页 |
| 2.5.4. Rescue UL51 mutant virus | 第57页 |
| 2.6. Reversion of UL51 gene mutantion | 第57-60页 |
| 2.6.1. For second red recombination | 第58-60页 |
| 2.7. Construction of HA tag recombinant viruses | 第60页 |
| 2.8. Confirmation of the recombinant viruses | 第60-62页 |
| 2.8.1. Genomic DNA elimination reaction | 第61页 |
| 2.8.2. Reverse transcription reaction | 第61-62页 |
| 2.9. Expression of HA tag | 第62-66页 |
| 2.9.1. SDS-PAGE and Western blot analysis | 第62-65页 |
| 2.9.2. Western blot analysis | 第65-66页 |
| 2.10. Growth curve analysis | 第66-67页 |
| 2.10.1. Titration of virus on MDBK cells/ Plaque assay | 第66-67页 |
| 2.11. Plaque assay | 第67页 |
| 2.12. Characterization of UL51 protein | 第67-68页 |
| 2.13. Silver staining | 第68页 |
| 2.14. Mass spectrometry | 第68-69页 |
| 2.15. Immunofluorescence and confocal microscopy | 第69-70页 |
| 2.16. Transmission Electron Microscopy (TEM) | 第70页 |
| 2.17.Immunoprecipitation analysis | 第70-71页 |
| 2.18. Rabbit infection | 第71-73页 |
| 3. RESULTS AND ANALYSIS | 第73-99页 |
| 3.1. Construction of BAC and Recombinant viruses | 第73-84页 |
| 3.1.1. Amplification of two homologous arms of the transfer vector | 第73-74页 |
| 3.1.2. The construction of transfer vector | 第74-75页 |
| 3.1.3. Construction and screening of recombinant virus | 第75-76页 |
| 3.1.4. Screening and identification of p Bo HV-1 clones | 第76-77页 |
| 3.1.5. Construction of U51 gene mutant of Bo HV-1 | 第77-78页 |
| 3.1.6. Construction of HA Tag recombinant viruses | 第78-80页 |
| 3.1.7. Reversion of p Bo HV1-UL51?76-232 | 第80-81页 |
| 3.1.8. Characterization of Recombinant viruses | 第81-84页 |
| 3.2. Analysis of Viral Growth Properties | 第84-87页 |
| 3.2.1. Single step and multi step growth kinetics | 第84-86页 |
| 3.2.2. Plaque assay | 第86-87页 |
| 3.3. Characterization of the UL51 protein | 第87-93页 |
| 3.3.1. Mass spectrometric analysis of UL51 protein | 第87-89页 |
| 3.3.2. Intracellular co-localization of the UL51 protein with cis-Golgi marker protein(GM-130) | 第89-92页 |
| 3.3.3. Immunoprecipitation of UL51 protein along with GM130 | 第92-93页 |
| 3.4. The effect of the UL51 mutation on the virion egress pathway | 第93-94页 |
| 3.5. Ultra structure analysis of UL51 mutant virus | 第94-97页 |
| 3.5.1. Transmission Electron Microscopy (TEM) | 第94-96页 |
| 3.5.2. Quantitation of virions | 第96-97页 |
| 3.6. Properties of v Bo HV1-UL51?76–232, v Bo HV1, and v Bo HV1-UL51R viruses inrabbits | 第97-99页 |
| 3.6.1. Rabbits infection | 第97-98页 |
| 3.6.2. Titers of serum neutralizing (SN) antibodies of infected rabbits | 第98-99页 |
| 4. DISCUSSION | 第99-102页 |
| 4.1. The p UL51 indispensible for efficient viral growth in vitro | 第99页 |
| 4.2. The p UL51 plays a role in viral assembly and egress | 第99-100页 |
| 4.3. The p UL51 fully co-localized with cis-Golgi marker protein (GM130) | 第100-101页 |
| 4.4. The p UL51 contributes to the Bo HV-1 virulence in rabbits | 第101-102页 |
| 5. CONCLUSION | 第102-103页 |
| REFERENCES | 第103-117页 |
| PAPERS PUBLISHED | 第117-118页 |
| ACKNOWLEDGEMENT | 第118-119页 |
