| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 文献综述 | 第12-32页 |
| 一、螺原体(SPIROPLASMA)的研究概况 | 第12-19页 |
| 1 螺原体的基本生物学特性 | 第12页 |
| 2 螺原体基因组研究 | 第12-19页 |
| 2.1 螺原体基因组特征和全基因组测序 | 第12-14页 |
| 2.2 螺原体的致病性相关基因 | 第14-16页 |
| 2.3 螺原体代谢特征 | 第16-19页 |
| 二、蜜蜂螺原体两种致病相关因子的研究进展 | 第19-23页 |
| 1 蜜蜂肠道围食膜的研究 | 第19-20页 |
| 1.1 围食膜的组成结构 | 第19-20页 |
| 1.2 围食膜的功能研究 | 第20页 |
| 2 几丁质酶和几丁质脱乙酰酶的结构与功能 | 第20-23页 |
| 三、螺原体对宿主抗氧化应激系统相关酶影响的研究 | 第23-25页 |
| 四、本研究的主要内容、目的及意义 | 第25-26页 |
| 参考文献 | 第26-32页 |
| 第一章 蜜蜂螺原体CH-1几丁质酶、几丁质脱乙酰酶基因的研究 | 第32-76页 |
| 第一节 蜜蜂螺原体CH-1几丁质脱乙酰酶基因的生物信息学分析 | 第32-40页 |
| 前言 | 第32-33页 |
| 1 材料与方法 | 第33-34页 |
| 1.1 材料 | 第33页 |
| 1.2 方法 | 第33-34页 |
| 2 结果与分析 | 第34-40页 |
| 2.1 几丁质脱乙酰酶氨基酸序列结构及其理化性质预测 | 第34页 |
| 2.2 蜜蜂螺原体与其他细菌的几丁质脱乙酰酶氨基酸序列相似性分析 | 第34-35页 |
| 2.3 螺原体几丁质脱乙酰酶的亲/疏水性、信号肽等预测分析 | 第35-37页 |
| 2.4 几丁质脱乙酰酶蛋白的结构预测分析 | 第37-38页 |
| 2.5 几丁质脱乙酰酶基因编码序列比对 | 第38-40页 |
| 第二节 蜜蜂螺原体CH-1几丁质酶及几丁质脱乙酰酶基因的克隆表达 | 第40-62页 |
| 前言 | 第40-41页 |
| 1 材料与方法 | 第41-50页 |
| 1.1 菌株与质粒 | 第41页 |
| 1.2 培养基与试剂 | 第41-44页 |
| 1.3 螺原体基因组DNA的提取 | 第44页 |
| 1.4 螺原体几丁质酶及几丁质脱乙酰酶相关基因chiA/chid的扩增 | 第44-47页 |
| 1.5 重组质粒pETchid的构建 | 第47-48页 |
| 1.6 几丁质酶及几丁质脱乙酰酶的原核表达及纯化 | 第48-49页 |
| 1.7 包涵体蛋白复性 | 第49页 |
| 1.8 Western blot验证 | 第49-50页 |
| 2 结果与分析 | 第50-57页 |
| 2.1 螺原体基因组DNA与表达载体pET-28a(+)的提取 | 第50页 |
| 2.2 几丁质酶及几丁质脱乙酰酶基因的克隆 | 第50-53页 |
| 2.3 几丁质酶及几丁质脱乙酰酶的诱导表达及纯化 | 第53-56页 |
| 2.4 Western blot验证 | 第56-57页 |
| 3 小结与讨论 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-62页 |
| 第三节 蜜蜂螺原体CH-1几丁质脱乙酰酶活力及基本酶学性质的研究 | 第62-76页 |
| 前言 | 第62-63页 |
| 1 材料与方法 | 第63-67页 |
| 1.1 培养基与试剂 | 第63-64页 |
| 1.2 粗酶液制备 | 第64页 |
| 1.3 蛋白质浓度测定 | 第64-65页 |
| 1.4 几丁质脱乙酰酶(CDA)活力测定 | 第65页 |
| 1.5 酶的最适反应温度及温度稳定性测定 | 第65-66页 |
| 1.6 酶的最适pH及pH稳定性测定 | 第66页 |
| 1.7 各种不同金属离子对酶活力的影响 | 第66-67页 |
| 2 结果与分析 | 第67-72页 |
| 2.1 几丁质脱乙酰酶(CDA)活力测定 | 第67-68页 |
| 2.2 几丁质脱乙酰酶的最适反应温度及温度稳定性测定 | 第68-69页 |
| 2.3 几丁质脱乙酰酶的最适pH及pH稳定性测定 | 第69页 |
| 2.4 各种不同金属离子对酶活力的影响 | 第69-72页 |
| 3 小结与讨论 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-76页 |
| 第二章 蜜蜂螺原体CH-1对意蜂抗氧化相关酶的影响 | 第76-88页 |
| 前言 | 第76-77页 |
| 1 材料与方法 | 第77-81页 |
| 1.1 供试菌株 | 第77页 |
| 1.2 相关试剂 | 第77-78页 |
| 1.3 螺原体对意蜂的感染 | 第78页 |
| 1.4 粗酶液的制备 | 第78页 |
| 1.5 蛋白质含量测定 | 第78页 |
| 1.6 超氧化物歧化酶(SOD)活力测定 | 第78-79页 |
| 1.7 过氧化氢酶(CAT)活力测定 | 第79-80页 |
| 1.8 谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力测定 | 第80-81页 |
| 2 结果与分析 | 第81-85页 |
| 2.1 螺原体对意蜂的致病性 | 第81-82页 |
| 2.2 意蜂组织中螺原体的检测 | 第82页 |
| 2.3 螺原体CH-1对意蜂抗氧化相关酶的影响 | 第82-85页 |
| 3 小结与讨论 | 第85-87页 |
| 参考文献 | 第87-88页 |
| 全文总结 | 第88-90页 |
| 一、主要研究结果 | 第88-89页 |
| 二、主要创新点 | 第89页 |
| 三、研究展望 | 第89-90页 |
| 附录 | 第90-92页 |
| 攻读硕士期间发表的学术论文 | 第92-94页 |
| 致谢 | 第94页 |
