| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第一章 绪论 | 第10-24页 |
| 1.1 古菌概述 | 第10-11页 |
| 1.2 硫化叶菌概述 | 第11-12页 |
| 1.3 硫化叶菌遗传操作系统 | 第12-16页 |
| 1.3.1 筛选标记 | 第12-13页 |
| 1.3.2 目的基因敲除系统 | 第13-15页 |
| 1.3.3 敲除载体和穿梭载体 | 第15-16页 |
| 1.4 DNA损伤与修复 | 第16-18页 |
| 1.4.1 DNA损伤 | 第16-17页 |
| 1.4.2 DNA损伤修复 | 第17页 |
| 1.4.3 同源重组修复 | 第17-18页 |
| 1.4.4 非同源末端连接修复 | 第18页 |
| 1.5 HJ解离酶 | 第18-19页 |
| 1.6 SisPINA简介 | 第19-21页 |
| 1.6.1 SisPINA的发现 | 第19-20页 |
| 1.6.2 SisPINA基本生物信息学介绍 | 第20-21页 |
| 1.7 本文的立题依据和基本思路 | 第21-24页 |
| 1.7.1 立题依据 | 第21页 |
| 1.7.2 基本思路 | 第21-24页 |
| 第二章 SisPINA基因的必需性分析 | 第24-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-27页 |
| 2.2.1 pSSR-LacS-SisPINA及其突变体质粒的构建 | 第24-25页 |
| 2.2.2 S.islandicus Rey15A (E233S)-pMID-SisPINA-T菌株的电转化 | 第25页 |
| 2.2.3 目的转化子的筛选 | 第25页 |
| 2.2.4 回补菌株SisPINA位点基因型的分析 | 第25-26页 |
| 2.2.5 点突变位点的必需性分析 | 第26-27页 |
| 2.3 实验结果 | 第27-38页 |
| 2.3.1 pSSR-LacS-SisPINA及其突变体载体的构建 | 第27-28页 |
| 2.3.2 目的转化子的筛选 | 第28-29页 |
| 2.3.3 PCR分析突变体回补菌株的SisPINA位点基因型 | 第29-36页 |
| 2.3.4 进一步分析点突变位点的重要性 | 第36-38页 |
| 2.4 总结与讨论 | 第38-40页 |
| 第三章 SisPINA蛋白低水平表达菌株的构建及表型分析 | 第40-52页 |
| 3.1 实验材料 | 第40-41页 |
| 3.2 实验方法 | 第41-44页 |
| 3.2.1 质粒pK-ASisPINA,pK-A(30/2)SisPINA,pK-A(38/2)SisPINA的构建 | 第41页 |
| 3.2.2 质粒的线性化处理及电转化 | 第41-42页 |
| 3.2.3 整合型菌株的筛选与鉴定 | 第42-43页 |
| 3.2.4 整合型菌株中目的蛋白表达量的SDS-PAGE及Western blotting分析 | 第43页 |
| 3.2.5 生长曲线测定 | 第43-44页 |
| 3.2.6 菌株对UV、HU敏感性分析 | 第44页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第44-51页 |
| 3.3.1 SisPINA低表达水平菌株的筛选 | 第44-46页 |
| 3.3.2 整合型菌株SisPINA表达量的Western检测 | 第46-48页 |
| 3.3.3 SisPINA不同表达水平菌株的生长曲线测定 | 第48-49页 |
| 3.3.4 SisPINA低水平表达菌株的HU,UV敏感性分析 | 第49-51页 |
| 3.4 总结与讨论 | 第51-52页 |
| 第四章 SisPINA及其点突变体过表达菌株的表型分析 | 第52-68页 |
| 4.1 实验方法 | 第52-54页 |
| 4.1.1 SisPINA及其点突变体表达载体的构建 | 第52-54页 |
| 4.1.2 过表达质粒的电转化 | 第54页 |
| 4.1.3 Western-bloting分析SisPINA及其点突变体的表达情况 | 第54页 |
| 4.1.4 生长曲线测定 | 第54页 |
| 4.1.5 细胞显微形态观察 | 第54页 |
| 4.2 结果与讨论 | 第54-65页 |
| 4.2.1 SisPINA及其点突变体的过表达载体的构建 | 第54-55页 |
| 4.2.2 目的转化子的筛选 | 第55-56页 |
| 4.2.3 目的蛋白表达量的Western blotting检测 | 第56-58页 |
| 4.2.4 过表达无标签SisPINA及其点突变体蛋白菌株的表型分析 | 第58-65页 |
| 4.3 总结与讨论 | 第65-68页 |
| 第五章 总结与展望 | 第68-70页 |
| 附录 | 第70-80页 |
| 参考文献 | 第80-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 附件 | 第85页 |
