| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 主要英文缩写与译名 | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-23页 |
| 1.1 家蚕及盲椿简介 | 第15-17页 |
| 1.2 蜕皮激素在昆虫生长发育及蜕皮过程中的作用 | 第17页 |
| 1.3 昆虫蜕皮过程中血液或表皮主要酶系的变化 | 第17-18页 |
| 1.4 蜕皮相关酶的概述 | 第18-20页 |
| 1.5 实验相关技术概述 | 第20-23页 |
| 1.5.1 RNA干扰技术 | 第20-21页 |
| 1.5.1.1 RNA干扰的作用机制 | 第20页 |
| 1.5.1.2 RNA干扰的实现方法-体外酶法 | 第20-21页 |
| 1.5.2 荧光定量PCR技术 | 第21页 |
| 1.5.3 免疫荧光技术 | 第21-23页 |
| 第二章 研究内容及结果 | 第23-113页 |
| 第一节 家蚕部分 | 第23-81页 |
| 1 家蚕蜕皮相关酶的生物信息学分析 | 第23-38页 |
| 1.1 酚氧化酶的生物信息学分析 | 第23-29页 |
| 1.1.1 酚氧化酶原Ⅰ(PPO1)的生物信息学分析 | 第23-26页 |
| 1.1.2 酚氧化酶原Ⅱ(PPO2)的生物信息学分析 | 第26-29页 |
| 1.2 几丁质酶(Chi)的生物信息学分析 | 第29-31页 |
| 1.3 多巴脱羧酶(BmDdc)的生物信息学分析 | 第31-34页 |
| 1.4 酪氨酸羟化酶(Th)的生物信息学分析 | 第34-37页 |
| 1.5 乙酰转移酶(At)的生物信息学分析 | 第37-38页 |
| 2 家蚕蜕皮相关酶基因的表达量分析 | 第38-49页 |
| 2.1 蜕皮相关酶基因小蚕期的表达量分析 | 第38-44页 |
| 2.1.1 材料与试剂 | 第38-39页 |
| 2.1.2 方法 | 第39-41页 |
| 2.1.2.1 家蚕幼虫前期全蚕总RNA的提取及第一链cDNA合成 | 第39-41页 |
| 2.1.2.2 蜕皮相关酶基因在家蚕幼虫前期的荧光定量PCR分析 | 第41页 |
| 2.1.3 结果与讨论 | 第41-44页 |
| 2.2 蜕皮相关酶基因在大蚕期各组织的表达量分析 | 第44-49页 |
| 2.2.1 材料与试剂 | 第44-45页 |
| 2.2.2 方法 | 第45页 |
| 2.2.2.1 家蚕各组织总RNA的提取及第一链cDNA合成 | 第45页 |
| 2.2.2.2 蜕皮相关酶基因在大蚕期各组织的定性分析 | 第45页 |
| 2.2.2.3 蜕皮相关酶基因在大蚕期各组织的定量分析 | 第45页 |
| 2.2.3 结果和分析 | 第45-49页 |
| 2.2.3.1 蜕皮相关酶基因在大蚕期各组织的定性分析 | 第45-46页 |
| 2.2.3.2 蜕皮相关酶基因在大蚕期各组织的定量分析 | 第46-49页 |
| 3 蜕皮激素对酶表达的影响 | 第49-55页 |
| 3.1 材料与试剂 | 第49页 |
| 3.2 方法 | 第49-51页 |
| 3.2.1 家蚕各组织总RNA的提取及第一链cDNA合成 | 第49-50页 |
| 3.2.2 蜕皮激素的添食 | 第50页 |
| 3.2.3 蜕皮激素滴度的测定 | 第50-51页 |
| 3.3 结果及分析 | 第51-55页 |
| 3.3.1 添食蜕皮激素对家蚕蜕皮激素滴度的影响 | 第51页 |
| 3.3.2 添食蜕皮激素对蜕皮相关基因表达量的影响 | 第51-55页 |
| 4 家蚕蜕皮激素相关酶基因的RNAi研究 | 第55-66页 |
| 4.1 家蚕酚氧化酶基因的RNAi研究 | 第55-61页 |
| 4.1.1 材料与试剂 | 第55页 |
| 4.1.2 方法 | 第55-58页 |
| 4.1.2.1 RNA的提取和cDNA的合成 | 第55页 |
| 4.1.2.2 dsRNA的合成 | 第55-58页 |
| 4.1.2.3 RNAi试验 | 第58页 |
| 4.1.2.4 酚氧化酶活性的测定 | 第58页 |
| 4.1.3 结果及分析 | 第58-61页 |
| 4.1.3.1 家蚕酚氧化酶RNAi对表型的影响 | 第58-60页 |
| 4.1.3.2 家蚕酚氧化酶RNAi对酶活性的影响 | 第60-61页 |
| 4.1.3.3 家蚕酚氧化酶RNAi对酶基因表达量的影响 | 第61页 |
| 4.2 家蚕多巴脱羧酶的RNAi研究 | 第61-66页 |
| 4.2.1 材料与试剂 | 第61页 |
| 4.2.2 方法 | 第61-62页 |
| 4.2.2.1 RNA的提取和cDNA的合成 | 第61-62页 |
| 4.2.2.2 dsRNA的合成 | 第62页 |
| 4.2.2.3 RNAi试验 | 第62页 |
| 4.2.2.4 多巴脱羧酶活性测定 | 第62页 |
| 4.2.3 结果与分析 | 第62-66页 |
| 4.2.3.1 家蚕多巴脱羧酶RNAi对表型的影响 | 第62-64页 |
| 4.2.3.2 家蚕多巴脱羧酶RNAi对酶活性的影响 | 第64-65页 |
| 4.2.3.3 家蚕多巴脱羧酶RNAi对基因表达的影响 | 第65页 |
| 4.2.3.4 细胞多巴脱羧酶RNAi对蜕皮相关基因表达量的影响 | 第65-66页 |
| 5 家蚕多巴脱羧酶(BmDdc)的表达及定位 | 第66-81页 |
| 5.1 材料与试剂 | 第66-69页 |
| 5.2 方法 | 第69-74页 |
| 5.2.1 BmDdc基因表达载体的构建 | 第69页 |
| 5.2.2 BmDdc基因在大肠杆菌中的表达 | 第69页 |
| 5.2.3 Western Blot | 第69-70页 |
| 5.2.4 BmDdc融合表达产物的纯化 | 第70页 |
| 5.2.5 多克隆抗体的制备及纯化 | 第70-71页 |
| 5.2.6 多克隆抗体的组织鉴定 | 第71-73页 |
| 5.2.6.1 家蚕BmN细胞及组织的蛋白提取 | 第71页 |
| 5.2.6.2 BmDdc抗体的组织检测 | 第71-73页 |
| 5.2.7 BmDdc的细胞定位 | 第73页 |
| 5.2.7.1 细胞的dsRNA处理 | 第73页 |
| 5.2.7.2 细胞免疫荧光分析 | 第73页 |
| 5.2.8 BmDdc的组织定位 | 第73-74页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第74-81页 |
| 5.3.1 BmDdc的原核表达 | 第74-76页 |
| 5.3.2 BmDdc多克隆抗体的组织鉴定 | 第76页 |
| 5.3.3 BmDdc的细胞与组织定位 | 第76-81页 |
| 第二节 牧草盲椿部分 | 第81-113页 |
| 1 牧草盲椿的生命发育规律 | 第81-84页 |
| 1.1 实验方法 | 第82页 |
| 1.2 牧草盲蝽生命发育过程 | 第82-84页 |
| 2 牧草盲蝽蜕皮相关酶基因的克隆 | 第84-88页 |
| 2.1 实验方法 | 第84-88页 |
| 2.1.1 模板的合成 | 第84-85页 |
| 2.1.2 蜕皮相关酶基因的克隆 | 第85-86页 |
| 2.1.3 序列测序 | 第86-88页 |
| 2.1.3.1 PCR产物连接 | 第86页 |
| 2.1.3.2 连接产物转化 | 第86页 |
| 2.1.3.3 克隆产物的检测 | 第86-88页 |
| 2.2 结果分析 | 第88页 |
| 3 牧草盲椿蜕皮相关酶基因的表达谱 | 第88-99页 |
| 3.1 半定量分析 | 第88-93页 |
| 3.1.1 实验方法 | 第88-90页 |
| 3.1.2 实验结果 | 第90-93页 |
| 3.1.2.1 组织表达量分析 | 第90-91页 |
| 3.1.2.2 发育时期表达量分析 | 第91页 |
| 3.1.2.3 组织时期表达分析 | 第91-93页 |
| 3.2 定量分析 | 第93-99页 |
| 3.2.1 试验方法 | 第93-95页 |
| 3.2.2 实验结果 | 第95-99页 |
| 4 几丁质酶基因的生物信息学分析 | 第99-104页 |
| 5 牧草盲椿蜕皮激素浓度的测定 | 第104-108页 |
| 5.1 试验方法 | 第104-106页 |
| 5.1.1 实验样品的收集 | 第104页 |
| 5.1.2 蜕皮激素浓度的测定 | 第104-106页 |
| 5.2 实验结果 | 第106-108页 |
| 6 牧草盲椿蜕皮激素调控 | 第108-113页 |
| 6.1 实验材料与方法 | 第108-109页 |
| 6.1.1 蜕皮激素调控的早期诱导 | 第108页 |
| 6.1.2 牧草盲椿蜕皮激素的晚期诱导 | 第108-109页 |
| 6.2 实验结果 | 第109-113页 |
| 6.2.1 早期诱导的基因表达 | 第109页 |
| 6.2.2 早期诱导对生长发育的影响 | 第109-110页 |
| 6.2.3 蜕皮激素晚期诱导对生长发育的影响 | 第110-113页 |
| 第三章 结论及后续研究展望 | 第113-117页 |
| 3.1 主要结论 | 第113-114页 |
| 3.2 创新点 | 第114页 |
| 3.3 后续研究展望 | 第114-117页 |
| 参考文献 | 第117-124页 |
| 附录 | 第124-127页 |
| 攻读博士学位期间发表论文 | 第124-126页 |
| 参与课题 | 第126-127页 |
| 致谢 | 第127页 |
