| 摘要 | 第5-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 第1章 绪论 | 第16-25页 |
| 1.1 β-葡萄糖苷酶的简介 | 第16-20页 |
| 1.1.1 β-葡萄糖苷酶的理化性质 | 第16-17页 |
| 1.1.2 β-葡萄糖苷酶的来源 | 第17-18页 |
| 1.1.3 β-葡萄糖苷酶的发酵研究 | 第18-19页 |
| 1.1.4 β-葡萄糖苷酶的应用 | 第19-20页 |
| 1.1.4.1 纤维素降解 | 第19页 |
| 1.1.4.2 生产低聚龙胆糖 | 第19页 |
| 1.1.4.3 作为风味酶 | 第19-20页 |
| 1.1.4.4 脱苦作用 | 第20页 |
| 1.1.4.5 其他方面 | 第20页 |
| 1.2 巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第20-23页 |
| 1.2.1 巴斯德毕赤酵母表达系统简介 | 第20-21页 |
| 1.2.2 毕赤酵母表达系统的特点 | 第21页 |
| 1.2.3 毕赤酵母高密度补料培养控制研究 | 第21-23页 |
| 1.3 离子注入技术 | 第23页 |
| 1.4 本论文研究目的及主要内容 | 第23-25页 |
| 1.4.1 本论文研究目的 | 第23-24页 |
| 1.4.2 主要研究内容 | 第24-25页 |
| 第2章 常压室温等离子体诱变选育β-葡萄糖苷酶高产菌株 | 第25-42页 |
| 2.0 引言 | 第25-26页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第26-27页 |
| 2.1.1 菌种 | 第26页 |
| 2.1.2 培养基 | 第26页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第26页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第26-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-32页 |
| 2.2.1 培养方法 | 第27页 |
| 2.2.2 菌体浓度测定 | 第27-28页 |
| 2.2.3 β-葡萄糖苷酶酶活力测定 | 第28页 |
| 2.2.4 毕赤酵母在48微孔板中产β-葡萄糖苷酶培养条件的优化 | 第28-29页 |
| 2.2.5 诱变方法 | 第29-30页 |
| 2.2.5.1 ARTP诱变方法 | 第29页 |
| 2.2.5.2 紫外诱变方法 | 第29页 |
| 2.2.5.3 ARTP-UV复合诱变方法 | 第29-30页 |
| 2.2.6 高通量筛选模型的建立 | 第30页 |
| 2.2.7 遗传稳定性分析 | 第30-31页 |
| 2.2.8 诱变谱 | 第31-32页 |
| 2.3 结果与分析 | 第32-41页 |
| 2.3.1 对硝基苯酚标准曲线 | 第32页 |
| 2.3.2 毕赤酵母在48微孔板中产β-葡萄糖苷酶培养条件的优化 | 第32-36页 |
| 2.3.2.1 装液量对毕赤酵母生长的影响 | 第32-33页 |
| 2.3.2.2 甲醇添加时机对毕赤酵母产β-葡萄糖苷酶的影响 | 第33-34页 |
| 2.3.2.3 甲醇添加量对毕赤酵母产β-葡萄糖苷酶的影响 | 第34-36页 |
| 2.3.3 诱变 | 第36-39页 |
| 2.3.3.1 ARTP诱变选育 | 第36-37页 |
| 2.3.3.2 紫外诱变选育 | 第37-38页 |
| 2.3.3.3 ARTP-UV复合诱变选育 | 第38-39页 |
| 2.3.4 变色圈圈径比、微孔板酶活与摇瓶酶活相关性检验 | 第39-40页 |
| 2.3.5 高产菌株的遗传稳定性 | 第40-41页 |
| 2.4 本章小结 | 第41-42页 |
| 第3章 毕赤酵母产β-葡萄糖苷酶发酵条件优化 | 第42-54页 |
| 3.0 引言 | 第42页 |
| 3.1 材料与仪器 | 第42-43页 |
| 3.1.1 菌种 | 第42-43页 |
| 3.1.2 培养基 | 第43页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第43页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第43页 |
| 3.2 实验方法 | 第43-44页 |
| 3.2.1 培养方法 | 第43页 |
| 3.2.2 菌体浓度测定 | 第43-44页 |
| 3.2.3 β-葡萄糖苷酶酶活力测定 | 第44页 |
| 3.2.4 产酶条件优化 | 第44页 |
| 3.3 结果与分析 | 第44-53页 |
| 3.3.1 碳源对毕赤酵母生长及产β-葡萄糖苷酶的影响 | 第44-46页 |
| 3.3.2 氮源对毕赤酵母生长及产β-葡萄糖苷酶的影响 | 第46-47页 |
| 3.3.3 甲醇浓度对毕赤酵母产β-葡萄糖苷酶的影响 | 第47-48页 |
| 3.3.4 培养基初始pH对毕赤酵母产β-葡萄糖苷酶的影响 | 第48-49页 |
| 3.3.5 装液量对毕赤酵母产β-葡萄糖苷酶的影响 | 第49页 |
| 3.3.6 β-葡萄糖苷酶发酵条件优化 | 第49-53页 |
| 3.3.6.1 响应面实验设计及结果 | 第49-50页 |
| 3.3.6.2 回归模型的方差分析 | 第50-51页 |
| 3.3.6.3 各因素对酶活影响的响应面 | 第51-53页 |
| 3.3.6.4 响应面法优化结果验证 | 第53页 |
| 3.4 本章小结 | 第53-54页 |
| 第4章 3L发酵罐高密度发酵产β-葡糖糖苷酶 | 第54-63页 |
| 4.0 引言 | 第54页 |
| 4.1 材料与仪器 | 第54-55页 |
| 4.1.1 菌种 | 第54页 |
| 4.1.2 培养基 | 第54-55页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第55页 |
| 4.1.4 主要仪器 | 第55页 |
| 4.2 实验方法 | 第55-58页 |
| 4.2.1 毕赤酵母3L发酵罐高密度培养方法 | 第55-56页 |
| 4.2.2 菌体浓度测定 | 第56页 |
| 4.2.3 β-葡萄糖苷酶酶活力测定 | 第56页 |
| 4.2.4 考马斯亮蓝G-250染色法测定蛋白质含量方法 | 第56-57页 |
| 4.2.5 甘油流加培养阶段的流加控制 | 第57页 |
| 4.2.6 甲醇诱导表达阶段的甲醇流加控制 | 第57页 |
| 4.2.7 高密度发酵产酶培养的pH控制 | 第57-58页 |
| 4.3 结果与分析 | 第58-62页 |
| 4.3.1 不同甘油流加方式对毕赤酵母生长及产酶的影响 | 第58-59页 |
| 4.3.2 不同甲醇流加方式对毕赤酵母生长及产酶的影响 | 第59-61页 |
| 4.3.3 不同pH控制方式对毕赤酵母生长及产酶的影响 | 第61-62页 |
| 4.4 本章小结 | 第62-63页 |
| 第5章 β-葡萄糖苷酶的分离纯化及其酶学性质研究 | 第63-77页 |
| 5.0 引言 | 第63页 |
| 5.1 材料与仪器 | 第63-64页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第63页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第63-64页 |
| 5.1.3 主要仪器 | 第64页 |
| 5.2 实验方法 | 第64-68页 |
| 5.2.1 β-葡萄糖苷酶酶活力测定 | 第64页 |
| 5.2.2 考马斯亮蓝G-250染色法测定蛋白质含量方法 | 第64页 |
| 5.2.3 β-葡萄糖苷酶的分离纯化 | 第64-66页 |
| 5.2.3.1 粗酶液的制备 | 第64-65页 |
| 5.2.3.2 硫酸铵沉淀 | 第65页 |
| 5.2.3.3 Sephadex G-100凝胶过滤层析 | 第65页 |
| 5.2.3.4 SDS-PAGE鉴定β-葡萄糖苷酶纯度及分子量 | 第65-66页 |
| 5.2.4 β-葡萄糖苷酶酶学性质研究 | 第66-68页 |
| 5.2.4.1 温度对β-葡萄糖苷酶活性的影响及热稳定性 | 第66页 |
| 5.2.4.2 pH对β-葡萄糖苷酶活性的影响及pH稳定性 | 第66页 |
| 5.2.4.3 金属离子对β-葡萄糖苷酶活性的影响 | 第66-67页 |
| 5.2.4.4 抑制剂对β-葡萄糖苷酶活性的影响 | 第67页 |
| 5.2.4.5 β-葡萄糖苷酶分解pNPG动力学参数测定 | 第67-68页 |
| 5.3 结果与分析 | 第68-75页 |
| 5.3.1 β-葡萄糖苷酶的分离纯化 | 第68-71页 |
| 5.3.1.1 硫酸铵沉淀 | 第68-69页 |
| 5.3.1.2 Sephadex G-100凝胶过滤层析 | 第69-70页 |
| 5.3.1.3 SDS-PAGE鉴定纯度及分子量 | 第70页 |
| 5.3.1.4 β-葡萄糖苷酶的纯化结果 | 第70-71页 |
| 5.3.2 β-葡萄糖苷酶酶学性质 | 第71-75页 |
| 5.3.2.1 温度对β-葡萄糖苷酶活性的影响及热稳定性 | 第71-72页 |
| 5.3.2.2 pH对β-葡萄糖苷酶活性的影响及pH稳定性 | 第72-73页 |
| 5.3.2.3 金属离子对β-葡萄糖苷酶活性的影响 | 第73-74页 |
| 5.3.2.4 抑制剂对β-葡萄糖苷酶活性的影响 | 第74-75页 |
| 5.3.2.5 β-葡萄糖苷酶分解pNPG动力学参数测定 | 第75页 |
| 5.4 本章小结 | 第75-77页 |
| 第6章 结论与展望 | 第77-80页 |
| 6.1 结论 | 第77-78页 |
| 6.2 展望 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-88页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89页 |
