| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-19页 |
| 1.1 抗菌肽的来源及分类 | 第12-13页 |
| 1.2 生物学功能 | 第13-15页 |
| 1.2.1 一般性质 | 第14页 |
| 1.2.2 结构特点 | 第14-15页 |
| 1.2.3 生物活性 | 第15页 |
| 1.3 抗菌肽的应用前景及存在的问题 | 第15-16页 |
| 1.4 新型抗菌肽的分子设计 | 第16页 |
| 1.5 基因工程表达抗菌多肽的研究现状 | 第16-17页 |
| 1.5.1 原核表达系统 | 第16-17页 |
| 1.5.2 真核表达系统 | 第17页 |
| 1.6 本课题研究目的与内容 | 第17-19页 |
| 1.6.1 研究目的与意义 | 第17-18页 |
| 1.6.2 研究内容 | 第18-19页 |
| 第二章 新型抗菌肽的分子设计及生物信息学分析 | 第19-29页 |
| 2.1 材料与方法 | 第19-22页 |
| 2.1.1 生物信息学工具 | 第19页 |
| 2.1.2 分子设计方法 | 第19-22页 |
| 2.2 结果分析 | 第22-27页 |
| 2.2.1 抗菌肽的分子设计 | 第22-23页 |
| 2.2.2 改造肽的生物信息学分析 | 第23-27页 |
| 2.3 讨论 | 第27-29页 |
| 第三章 在毕赤酵母pPICZαA表达系统中表达 | 第29-52页 |
| 3.1 试验材料 | 第29-33页 |
| 3.1.1 质粒与菌株 | 第29-30页 |
| 3.1.2 酶与主要试剂 | 第30页 |
| 3.1.3 引物合成及DNA测序 | 第30页 |
| 3.1.4 培养基及缓冲液等试剂的配制 | 第30-32页 |
| 3.1.5 主要仪器与设备 | 第32-33页 |
| 3.2 试验方法 | 第33-42页 |
| 3.2.1 改造抗菌肽基因的设计及合成 | 第33-35页 |
| 3.2.2 重组质粒pPICZαA-X系列的构建 | 第35-37页 |
| 3.2.3 重组酵母转化子pPICZαA-Xs-GS115系列的获得 | 第37-40页 |
| 3.2.4 目的抗菌肽的诱导表达及纯化 | 第40页 |
| 3.2.5 改造抗菌肽抑菌活性初步测定 | 第40-42页 |
| 3.3 结果分析 | 第42-49页 |
| 3.3.1 抗菌肽目的基因扩增 | 第42页 |
| 3.3.2 重组质粒pPICZαA-X系列的构建 | 第42-46页 |
| 3.3.3 重组酵母转化子pPICZαA-Xs-GS115系列的获得 | 第46-49页 |
| 3.3.4 目的抗菌肽的诱导表达及纯化 | 第49页 |
| 3.3.5 抑菌活性的初步检测 | 第49页 |
| 3.4 讨论 | 第49-52页 |
| 3.4.1 引物的设计 | 第49页 |
| 3.4.2 抗菌肽基因的设计 | 第49页 |
| 3.4.3 聚合酶的选择 | 第49-50页 |
| 3.4.4 表达系统及宿主菌的选择 | 第50页 |
| 3.4.5 表达载体的选择 | 第50-51页 |
| 3.4.6 载体与目的基因酶切连接 | 第51页 |
| 3.4.7 酵母重组转化子的鉴定 | 第51页 |
| 3.4.8 抗菌肽诱导表达及活性测定 | 第51-52页 |
| 第四章 在毕赤酵母pPIC9表达系统中表达 | 第52-70页 |
| 4.1 试验材料 | 第52-53页 |
| 4.1.1 质粒与菌株 | 第52页 |
| 4.1.2 酶与主要试剂 | 第52页 |
| 4.1.3 引物合成及DNA测序 | 第52页 |
| 4.1.4 培养基及缓冲液等试剂的配制 | 第52-53页 |
| 4.1.5 主要仪器与设备 | 第53页 |
| 4.2 试验方法 | 第53-58页 |
| 4.2.1 改造抗菌肽基因的设计及合成 | 第53-54页 |
| 4.2.2 重组质粒pPIC9-X系列的构建 | 第54-55页 |
| 4.2.3 重组酵母转化子pPIC9-Xs-GS115系列的获得 | 第55-56页 |
| 4.2.4 目的抗菌肽的诱导表达及纯化 | 第56页 |
| 4.2.5 改造抗菌肽抑菌活性初步测定 | 第56页 |
| 4.2.6 改造抗菌肽的Tricine-SDS-PAGE电泳分析 | 第56-58页 |
| 4.3 结果分析 | 第58-69页 |
| 4.3.1 抗菌肽目的基因扩增 | 第58页 |
| 4.3.2 重组质粒pPIC9-X系列的构建 | 第58-62页 |
| 4.3.3 重组酵母转化子pPIC9-Xs-GS115系列的获得 | 第62-66页 |
| 4.3.4 目的抗菌肽的诱导表达及纯化 | 第66页 |
| 4.3.5 抑菌活性的初步检测 | 第66-68页 |
| 4.3.6 重组表达上清的Tricine-SDS-PAGE | 第68-69页 |
| 4.4 讨论 | 第69-70页 |
| 4.4.1 表达载体的选择 | 第69页 |
| 4.4.2 DNA聚合酶的选择 | 第69页 |
| 4.4.3 抗菌肽诱导表达及活性测定 | 第69页 |
| 4.4.4 重组表达上清的Tricine-SDS-PAGE | 第69-70页 |
| 第五章 结论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-74页 |
| 附录 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
