| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 第一章 绪论 | 第13-21页 |
| 1.1 与灰葡萄孢菌致病相关基因的研究进展 | 第13-14页 |
| 1.2 与灰葡萄孢致病相关的酶类及其作用 | 第14-15页 |
| 1.2.1 与破坏宿主表面屏障相关的酶 | 第14-15页 |
| 1.2.2 与利用植物能量相关的酶 | 第15页 |
| 1.3 与灰葡萄孢菌致病相关的毒素种类及其作用 | 第15-17页 |
| 1.3.1 二环倍半萜烯和以灰霉二醛为骨架的化合物 | 第16页 |
| 1.3.2 botrydial的生物合成途径和相关基因 | 第16-17页 |
| 1.4 信号转导调控在灰葡萄孢致病过程中的重要性 | 第17页 |
| 1.5 植物对灰葡萄孢的抗病机制 | 第17-18页 |
| 1.6 活性氧在植物抗病过程中的重要作用 | 第18-19页 |
| 1.7 蛋白磷酸酶PP2A在真核生物中的重要作用 | 第19-21页 |
| 第二章 灰葡萄孢菌突变体库的建立及筛选 | 第21-32页 |
| 2.1 材料 | 第21-24页 |
| 2.1.1 供试菌株 | 第21页 |
| 2.1.2 载体 | 第21-22页 |
| 2.1.3 主要供试试剂及仪器 | 第22-24页 |
| 2.1.4 主要培养基 | 第24页 |
| 2.2 方法 | 第24-27页 |
| 2.2.1 农杆菌AGL-1感受态细胞制备方法 | 第24-25页 |
| 2.2.2 农杆菌介导的灰葡萄孢菌的转化过程 | 第25-26页 |
| 2.2.3 转化子生物学性状分析 | 第26-27页 |
| 2.3 结果与分析 | 第27-30页 |
| 2.3.1 灰葡萄孢菌转化子获得以及抗性稳定性检测 | 第27页 |
| 2.3.2 突变体的生物性状 | 第27-29页 |
| 2.3.3 致病力测定 | 第29-30页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第30-32页 |
| 第三章 T-DNA插入的分子鉴定及突变体插入位点侧翼序列的克隆分析、单异核鉴定 | 第32-56页 |
| 3.1 材料 | 第32-33页 |
| 3.1.1 供试菌株 | 第32页 |
| 3.1.2 供试试剂及仪器 | 第32-33页 |
| 3.2 方法 | 第33-42页 |
| 3.2.1 转化子基因组DNA提取 | 第33-34页 |
| 3.2.2 琼脂糖凝胶电泳检测 | 第34-35页 |
| 3.2.3 转化子的PCR分子验证 | 第35-36页 |
| 3.2.4 转化子中T-DNA插入位点侧翼序列的克隆和测序 | 第36-40页 |
| 3.2.5 T-DNA插入灰葡萄孢基因组交界区的PCR验证 | 第40-41页 |
| 3.2.6 转化子单异核鉴定 | 第41-42页 |
| 3.3 结果与分析 | 第42-55页 |
| 3.3.1 转化子潮霉素基因PCR鉴定 | 第42-43页 |
| 3.3.2 灰葡萄孢菌基因组T-DNA旁侧序列的克隆分析 | 第43-53页 |
| 3.3.3 转化子的单异核鉴定 | 第53-55页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第55-56页 |
| 第四章 突变体中T-DNA插入的Southern blotting分析和标记基因表达分析 | 第56-66页 |
| 4.1 材料 | 第56页 |
| 4.1.1 供试菌株 | 第56页 |
| 4.1.2 供试试剂及仪器 | 第56页 |
| 4.2 方法 | 第56-63页 |
| 4.2.1 Southern blot分析 | 第56-60页 |
| 4.2.2 RT-PCR检测T-DNA插入的基因是否表达 | 第60-63页 |
| 4.3 结果与分析 | 第63-64页 |
| 4.3.1 Southern bloting | 第63页 |
| 4.3.2 转化子RT-PCR分子鉴定 | 第63-64页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第64-66页 |
| 第五章 表达载体构建、突变体遗传互补以及突变体目的基因的功能研究 | 第66-81页 |
| 5.1 材料 | 第66-67页 |
| 5.1.1 菌株 | 第66页 |
| 5.1.2 试剂与仪器 | 第66-67页 |
| 5.2 方法 | 第67-71页 |
| 5.2.1 入门载体pENTR/D-TOPO-Bc79的构建 | 第67页 |
| 5.2.2 构建pCAMBIA-Bar-Bc 79载体 | 第67-68页 |
| 5.2.3 互补转化子的获得及表型分析 | 第68页 |
| 5.2.4 转化子中Bar基因的鉴定 | 第68页 |
| 5.2.5 药物敏感性实验 | 第68-69页 |
| 5.2.6 几丁质含量的测定 | 第69-70页 |
| 5.2.7 番茄叶片侵染实验 | 第70页 |
| 5.2.8 荧光定量PCR分析7号、79号目的基因表达情况 | 第70-71页 |
| 5.3 结果与分析 | 第71-79页 |
| 5.3.1 构建pCAMBIA-Bar-Bc79质粒 | 第71-72页 |
| 5.3.2 互补转化子的获得及其BAR基因鉴定 | 第72-73页 |
| 5.3.3 7号互补转化子的表型观察 | 第73-74页 |
| 5.3.4 7号转化子药物敏感性实验 | 第74-77页 |
| 5.3.5 79号转化子药物敏感性实验 | 第77-78页 |
| 5.3.6 7号转化子几丁质含量测定实验 | 第78-79页 |
| 5.4 讨论 | 第79-81页 |
| 第六章 结论与展望 | 第81-83页 |
| 参考文献 | 第83-88页 |
| 致谢 | 第88-90页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第90页 |
