| 摘要 | 第8-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 缩略词表 | 第14-15页 |
| 文献综述 | 第15-42页 |
| 1 小麦赤霉病菌禾谷镰刀菌分类进展 | 第15-24页 |
| 1.1 赤霉病的危害和病原菌种类 | 第15-16页 |
| 1.2 禾谷镰刀菌种群划分 | 第16-18页 |
| 1.2.1 与致病性相关类型的划分 | 第16页 |
| 1.2.2 禾谷镰刀菌分类体系的发展 | 第16-18页 |
| 1.3 禾谷镰刀菌毒素 | 第18-24页 |
| 1.3.1 禾谷镰刀菌毒素类型 | 第18-20页 |
| 1.3.2 单端孢霉烯族毒素的分子生物学研究 | 第20-21页 |
| 1.3.3 禾谷镰刀菌毒素的危害 | 第21-22页 |
| 1.3.3.1 禾谷镰刀菌毒素对植物的致病作用 | 第21页 |
| 1.3.3.2 禾谷镰刀菌毒素对人畜的危害 | 第21-22页 |
| 1.3.4 禾谷镰刀菌毒素检测方法 | 第22-24页 |
| 1.3.4.1 定量检测 | 第22-23页 |
| 1.3.4.1.1 生物检测法 | 第22页 |
| 1.3.4.1.2 化学检测法 | 第22-23页 |
| 1.3.4.1.3 免疫化学检测法 | 第23页 |
| 1.3.4.2 定性检测 | 第23-24页 |
| 2 植物抗病性研究 | 第24-28页 |
| 2.1 植物抗病机制 | 第24-25页 |
| 2.2 与植物抗病相关基因的种类 | 第25-28页 |
| 2.2.1 植物本身的抗病基因 | 第25-26页 |
| 2.2.2 防卫基因 | 第26-27页 |
| 2.2.3 其它抗病基因 | 第27-28页 |
| 3 禾谷类植物基因转化技术 | 第28-30页 |
| 3.1 原生质体遗传转化 | 第28页 |
| 3.2 基因枪法遗传转化 | 第28-29页 |
| 3.3 根癌农杆菌介导的遗传转化 | 第29页 |
| 3.4 花粉管通道法遗传转化 | 第29-30页 |
| 4 小麦抗病基因工程 | 第30-36页 |
| 4.1 小麦转基因研究概况 | 第30-31页 |
| 4.2 小麦抗赤霉病育种基因工程 | 第31-36页 |
| 4.2.1 小麦抗赤霉病的抗源筛选 | 第32页 |
| 4.2.2 小麦赤霉病抗性遗传分析及抗性基因QTL定位 | 第32-33页 |
| 4.2.3 小麦抗赤霉病相关基因的应用 | 第33-36页 |
| 4.2.3.1 防卫反应相关的蛋白基因的应用 | 第33-35页 |
| 4.2.3.2 赤霉病菌毒素合成基因的应用 | 第35页 |
| 4.2.3.3 防卫反应信号传导途径中的一些调控基因应用 | 第35页 |
| 4.2.3.4 镰刀菌特异抗体介导的融合蛋白基因的应用 | 第35-36页 |
| 5 水稻抗病基因工程 | 第36-42页 |
| 5.1 抗病毒基因工程 | 第36-37页 |
| 5.2 抗细菌基因工程 | 第37-38页 |
| 5.3 水稻抗真菌病害基因工程 | 第38-42页 |
| 第一章 禾谷镰刀菌的系统群及毒素化学型分析 | 第42-68页 |
| 1 前言 | 第42-43页 |
| 2 材料与方法 | 第43-51页 |
| 2.1 材料 | 第43页 |
| 2.1.1 菌株 | 第43页 |
| 2.1.2 各种培养基、试剂及试剂盒 | 第43页 |
| 2.2 方法 | 第43-51页 |
| 2.2.1 禾谷镰刀菌分离和纯化 | 第43页 |
| 2.2.2 菌丝培养及基因组DNA提取 | 第43-44页 |
| 2.2.3 禾谷镰刀菌SCAR类型鉴定 | 第44-45页 |
| 2.2.4 禾谷镰刀菌系统进化种群鉴定 | 第45-48页 |
| 2.2.4.1 3个基因部分序列的克隆测序 | 第45-48页 |
| 2.2.4.2 镰刀菌类群鉴定 | 第48页 |
| 2.2.5 禾谷镰刀菌毒素化学型分析 | 第48-51页 |
| 2.2.5.1 DON和NIV毒素化学型鉴定 | 第48-49页 |
| 2.2.5.2 DON毒素衍生物产生菌鉴定 | 第49-50页 |
| 2.2.5.3 Tri7基因片段克隆与序列分析 | 第50-51页 |
| 3 结果与分析 | 第51-65页 |
| 3.1 禾谷镰刀菌的形态鉴定 | 第51-52页 |
| 3.2 禾谷镰刀菌的SCAR类型鉴定 | 第52-56页 |
| 3.3 禾谷镰刀菌系统进化类群分析 | 第56-57页 |
| 3.4 禾谷型和亚洲型禾谷镰刀菌的地理分布 | 第57-60页 |
| 3.5 禾谷镰刀菌毒素化学型鉴定 | 第60-63页 |
| 3.5.1 DON和NIV毒素化学型鉴定 | 第60-61页 |
| 3.5.2 DON毒素衍生物产生菌分析鉴定 | 第61-63页 |
| 3.6 禾谷镰刀菌Tri7基因的多样性分析 | 第63-65页 |
| 4 讨论 | 第65-68页 |
| 4.1 禾谷镰刀菌系统进化类群和地理分布的关系 | 第65-66页 |
| 4.2 禾谷镰刀菌毒素化学型分类 | 第66页 |
| 4.3 禾谷镰刀菌系统进化类群和毒素化学型分类的关系 | 第66-67页 |
| 4.4 新15-AcDON型菌株的发现 | 第67-68页 |
| 第二章 转镰刀菌特异抗体融合蛋白小麦的分析与鉴定 | 第68-83页 |
| 1 前言 | 第68页 |
| 2 材料与方法 | 第68-76页 |
| 2.1 材料及试剂 | 第68-69页 |
| 2.2 方法 | 第69-76页 |
| 2.2.1 小麦愈伤的培养 | 第69页 |
| 2.2.2 基因枪介导的小麦转化 | 第69-71页 |
| 2.2.2.1 微弹制备 | 第69-70页 |
| 2.2.2.2 金粉-DNA的包裹 | 第70页 |
| 2.2.2.3 基因枪轰击小麦愈伤 | 第70-71页 |
| 2.2.3 转基因小麦植株的获得 | 第71页 |
| 2.2.4 转基因植株的PCR检测 | 第71-72页 |
| 2.2.4.1 小麦基因组DNA提取 | 第71-72页 |
| 2.2.4.2 转基因小麦的PCR检测 | 第72页 |
| 2.2.5 转基因植株的抗赤霉病性检测 | 第72-73页 |
| 2.2.5.1 供试菌株的培养与分生孢子液的制备 | 第72页 |
| 2.2.5.2 田间抗病性鉴定 | 第72-73页 |
| 2.2.5.2.1 接种方法 | 第72页 |
| 2.2.5.2.2 调查方法 | 第72-73页 |
| 2.2.6 转基因植株的RT-PCR检测 | 第73-76页 |
| 2.2.6.1 叶片总RNA抽提步骤 | 第73-74页 |
| 2.2.6.2 总RNA中基因组DNA的消除 | 第74页 |
| 2.2.6.3 cDNA第一链的合成 | 第74-75页 |
| 2.2.6.4 PCR扩增 | 第75-76页 |
| 3 结果与分析 | 第76-81页 |
| 3.1 转基因小麦的获得 | 第76页 |
| 3.2 转基因小麦T0代的PCR检测 | 第76-77页 |
| 3.3 转基因小麦T1代抗赤霉病性筛选 | 第77-78页 |
| 3.4 转基因小麦T1代PCR检测 | 第78-79页 |
| 3.5 转基因小麦T1代RT-PCR检测 | 第79页 |
| 3.6 转基因小麦T2代抗赤霉病性鉴定 | 第79-81页 |
| 4 讨论 | 第81-83页 |
| 第三章 转抗菌肽水稻的分析与鉴定 | 第83-106页 |
| 1 前言 | 第83-84页 |
| 2 材料与方法 | 第84-91页 |
| 2.1 材料及试剂 | 第84页 |
| 2.2 方法 | 第84-91页 |
| 2.2.1 水稻愈伤诱导培养 | 第84页 |
| 2.2.2 基因枪介导的水稻转化 | 第84-85页 |
| 2.2.2.1 微弹制备及金粉-包裹 | 第84页 |
| 2.2.2.2 基因枪轰击水稻愈伤 | 第84-85页 |
| 2.2.3 转基因水稻植株的获得 | 第85页 |
| 2.2.4 转基因植株的PCR检测 | 第85-86页 |
| 2.2.4.1 水稻基因组DNA提取 | 第85页 |
| 2.2.4.2 转基因水稻的PCR反应 | 第85-86页 |
| 2.2.5 转基因植株的Western blot分析 | 第86-87页 |
| 2.2.5.1 水稻总蛋白提取 | 第86页 |
| 2.2.5.2 SDS-PAGE电泳检测 | 第86-87页 |
| 2.2.5.3 Western blot分析 | 第87页 |
| 2.2.5 转基因植株的Southern blot分析 | 第87-89页 |
| 2.2.5.1 水稻基因组DNA的酶切 | 第87-88页 |
| 2.2.5.2 碱性条件下DNA向尼龙膜的毛细管转移 | 第88页 |
| 2.2.5.3 探针制备 | 第88页 |
| 2.2.6.4 预杂交 | 第88页 |
| 2.2.5.4 探针的标记 | 第88-89页 |
| 2.2.5.5 杂交、洗膜及放射自显影 | 第89页 |
| 2.2.6 转基因水稻的抗稻瘟病性鉴定 | 第89-90页 |
| 2.2.6.1 供试菌株的培养与筛选 | 第89-90页 |
| 2.2.6.2 接种鉴定方法 | 第90页 |
| 2.2.6.3 染色显微观察 | 第90页 |
| 2.2.7 转基因水稻的抗纹枯病性鉴定 | 第90-91页 |
| 3 结果与分析 | 第91-104页 |
| 3.1 转基因水稻筛选 | 第91-92页 |
| 3.2 转抗菌肽水稻T1代PCR检测 | 第92-93页 |
| 3.3 转抗菌肽水稻T1代Western blot检测 | 第93页 |
| 3.4 转抗菌肽水稻T2代PCR检测 | 第93-95页 |
| 3.5 转抗菌肽水稻T2代Southern blot分析 | 第95-96页 |
| 3.6 转抗菌肽水稻T2代抗稻瘟病性鉴定 | 第96-101页 |
| 3.6.1 供试菌株的筛选 | 第96-97页 |
| 3.6.2 转抗菌肽水稻的抗稻瘟病性鉴定 | 第97-101页 |
| 3.7 转抗菌肽水稻T2代抗纹枯病性鉴定 | 第101-104页 |
| 4 讨论 | 第104-106页 |
| 4.1 多基因共转化植株的筛选 | 第104页 |
| 4.2 转抗菌肽水稻的抗病性 | 第104-105页 |
| 4.3 多基因共转化中无抗生素标记基因植株的获得 | 第105-106页 |
| 参考文献 | 第106-127页 |
| 致谢 | 第127-128页 |
| 附录A:各种培养基、溶液及试剂的配制 | 第128-135页 |
| 附录B:博士在读期间已发表或已接受的文章 | 第135-136页 |
