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柔嫩艾美耳球虫cDNA文库的构建及其主要抗原基因的克隆与表达

摘要第4-6页
ABSTRACT第6-7页
第一章 球虫病研究概况第12-25页
    1.1 球虫病研究简史第12-14页
    1.2 球虫的分类学第14-15页
    1.3 球虫卵囊形态特征第15-17页
        1.3.1 卵囊外形第16页
        1.3.2 卵囊大小第16页
        1.3.3 卵囊色泽第16页
        1.3.4 卵囊外膜第16页
        1.3.5 卵膜孔(微孔)第16-17页
        1.3.6 卵囊残体第17页
        1.3.7 孢子囊第17页
        1.3.8 极粒第17页
        1.3.9 孢子囊残体第17页
        1.3.10 子孢子第17页
    1.4 球虫生活史第17-25页
        1.4.1 孢子生殖(Sporogony)第17-18页
        1.4.2 裂殖生殖(shizogony)第18-22页
        1.4.3 配子生殖(gametogony)第22-25页
第二章 球虫体外培养的研究进展第25-39页
    2.1 球虫的细胞培养第25-36页
        2.1.1 培养基第26-27页
        2.1.2 卵囊的制备第27页
        2.1.3 鸡肾细胞的制备第27-28页
        2.1.4 子孢子的制备、纯化及接种第28-29页
        2.1.5 各种艾美耳球虫在细胞培养基上的发育第29-33页
        2.1.6 细胞培养基上艾美耳球虫的发育过程第33-36页
    2.2 球虫在鸡胚中的培养第36-38页
        2.2.1 球虫在鸡胚中的发育及病理反应第36-37页
        2.2.2 影响球虫在鸡胚中发育的因素第37-38页
    2.3 结语第38-39页
第三章 艾美耳球虫功能基因组的研究进展第39-55页
    3.1 功能基因组学的概念第39-40页
    3.2 功能基因组学研究的主要内容、意义及其方法第40-44页
        3.2.1 功能基因组学研究的主要内容第40页
        3.2.2 功能基因组学研究的意义第40页
        3.2.3 功能基因组学的研究方法第40-44页
    3.3 艾美耳球虫基因组第44-55页
        3.3.1 分子核型第44-45页
        3.3.2 基因组研究第45-47页
        3.3.3 鸡球虫基因的研究进展第47-55页
第四章 鸡球虫免疫及疫苗的研究进展第55-66页
    4.1 鸡球虫的免疫原性第55-56页
        4.1.1 免疫原性第55-56页
        4.1.2 抗原分子及抗原基因的分析与鉴定第56页
    4.2 宿主的免疫应答作用与保护性免疫作用机制第56-58页
        4.2.1 免疫应答作用第56-58页
        4.2.2 宿主保护性免疫作用机制第58页
    4.3 交叉免疫问题第58-59页
    4.4 球虫疫苗的研究概况第59-66页
        4.4.1 强毒苗第59-60页
        4.4.2 弱毒苗第60-61页
        4.4.3 亚单位疫苗第61-62页
        4.4.4 重组疫苗第62-63页
        4.4.5 核酸疫苗第63-65页
        4.4.6 展望第65-66页
第五章 柔嫩艾美耳球虫卵囊的收集及阳性血清的制备第66-71页
    5.1 材料与方法第66-68页
        5.1.1 材料第66页
        5.1.2 方法第66-67页
        5.1.3 免疫血清的检测第67-68页
    5.2 结果与分析第68-70页
        5.2.1 单一种E.tenella YL 株卵囊收集的结果第68-69页
        5.2.2 鸡抗E.tenella YL 株阳性血清ELISA 检测结果第69页
        5.2.3 兔抗鸡E.tenella YL 株阳性血清ELISA 检测结果第69-70页
    5.3 讨论第70-71页
第六章 柔嫩艾美耳球虫CDNA 表达文库的构建第71-90页
    6.1 材料与方法第71-82页
        6.1.1 材料第71-72页
        6.1.2 方法第72-82页
    6.2 结果第82-85页
        6.2.1 总RNA 提取和mRNA 分离第82页
        6.2.2 双链cDNA 检测结果第82-83页
        6.2.3 大片段cDNA 的选择第83页
        6.2.4 cDNA 文库基础库容量第83页
        6.2.5 扩增文库库容量第83-84页
        6.2.6 cDNA 表达文库插入片段长度分析第84-85页
    6.3 讨论第85-90页
        6.3.1 孢子化卵囊和子孢子的质量问题第85-86页
        6.3.2 总RNA 和mRNA 的质量问题第86页
        6.3.3 m RNA 分离及引物的选择第86-87页
        6.3.4 cDNA 表达文库的质量问题第87-90页
第七章 柔嫩艾美耳球虫YL 株3-1E 基因的克隆、表达与蛋白结构预测第90-106页
    7.1 材料与方法第90-98页
        7.1.1 材料第90-91页
        7.1.2 方法第91-98页
    7.2 结果与分析第98-105页
        7.2.1 E. tenella YL 3-1E 基因的克隆第98-99页
        7.2.2 E. tenella YL 3-1E 基因序列测定及序列分析第99-102页
        7.2.3 3-1E 蛋白结构预测第102-104页
        7.2.4 重组表达质粒pGEX-3-1E 的构建及鉴定第104页
        7.2.4 重组表达质粒pGEX-3-1E 的构建及鉴定第104页
        7.2.5 3-1E 基因表达产物SDS-PAGE 分析第104-105页
    7.3 讨论第105-106页
第八章 柔嫩艾美耳球虫CDNA 表达文库的免疫学筛选与克隆第106-119页
    8.1 材料与方法第106-111页
        8.1.1 材料第106-107页
        8.1.2 方法第107-111页
    8.2 结果第111-116页
        8.2.1 阳性克隆的筛选结果第111-112页
        8.2.2 阳性噬斑PCR 扩增结果第112页
        8.2.3 阳性克隆的重组质粒鉴定结果第112-113页
        8.2.4 目的片段的序列测定及分析结果第113-116页
    8.3 讨论第116-119页
第九章 MIC-2 基因的表达与功能分析第119-128页
    9.1 材料与方法第119-121页
        9.1.1 材料第119页
        9.1.2 方法第119-121页
    9.2 结果与分析第121-126页
        9.2.1 重组表达质粒pGEX-MIC-2 的构建及鉴定第121-122页
        9.2.2 MIC-2 基因表达产物SDS-PAGE 分析第122页
        9.2.3 MIC-2 基因及其编码蛋白的结构预测第122-126页
    9.3 讨论第126-128页
        9.3.1 外源蛋白质融合表达策略第126页
        9.3.2 外源蛋白质表达部位选择策略第126-127页
        9.3.3 生物信息学技术分析预测编码蛋白的结构与功能策略第127页
        9.3.4 MIC-2 外源蛋白融合表达的特点第127-128页
第十章 重组表达抗原对鸡球虫感染的免疫保护效果研究第128-139页
    10.1 材料与方法第128-133页
        10.1.1 材料第128-129页
        10.1.2 方法第129-133页
    10.2 结果与分析第133-137页
        10.2.1 可溶性蛋白的Western-blotting 分析结果第133页
        10.2.2 蛋白含量第133-134页
        10.2.3 增重变化第134-135页
        10.2.4 克盲肠内容物卵囊数第135-136页
        10.2.5 盲肠病变记分情况第136-137页
        10.2.6 抗球虫指数(ACI)第137页
    10.3 讨论第137-139页
结论第139-140页
参考文献第140-152页
附录第152-158页
缩略语英汉对照表第158-159页
致谢第159-160页
作者简介第160-161页

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