| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 1 文献综述 | 第9-15页 |
| 1.1 梨石细胞研究进展 | 第9-10页 |
| 1.2 木质素结构研究进展 | 第10-11页 |
| 1.3 木质素生物合成途径及基因调控的研究进展 | 第11-13页 |
| 1.4 肉桂酸4羟化酶(C4H)的研究进展 | 第13-14页 |
| 1.5 小结 | 第14-15页 |
| 2 引言 | 第15-16页 |
| 3 实验材料与方法 | 第16-30页 |
| 3.1 实验材料 | 第16页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第16页 |
| 3.1.2 载体和菌株 | 第16页 |
| 3.2 实验试剂和仪器 | 第16-18页 |
| 3.2.1 主要试剂 | 第16-17页 |
| 3.2.2 主要仪器 | 第17-18页 |
| 3.3 实验设计 | 第18-19页 |
| 3.4 实验方法 | 第19-30页 |
| 3.4.1 砀山酥梨果实总RNA的提取 | 第19页 |
| 3.4.2 RNA质量检测 | 第19页 |
| 3.4.3 cDNA第一链合成 | 第19页 |
| 3.4.4 C4H中间片段的克隆 | 第19-20页 |
| 3.4.5 PCR产物胶回收 | 第20-21页 |
| 3.4.6 DH5α感受态的制备 | 第21页 |
| 3.4.7 胶回收产物的连接与转化 | 第21页 |
| 3.4.8 阳性克隆的筛选以及序列测定 | 第21页 |
| 3.4.9 3'-RACE和 5'-RACE cDNA第一链合成 | 第21-22页 |
| 3.4.10 C4H 3'-RACE和 5'-RACE | 第22-24页 |
| 3.4.11 C4H全长的获得及生物信息学分析 | 第24页 |
| 3.4.12 PbC4H的表达分析 | 第24-25页 |
| 3.4.13 PbC4H原核表达载体的构建 | 第25-27页 |
| 3.4.14 PbC4H蛋白的诱导表达及检测 | 第27-28页 |
| 3.4.15 真核表达载体的构建 | 第28-29页 |
| 3.4.16 PbC4H的瞬时表达 | 第29页 |
| 3.4.17 PbC4H的稳定表达 | 第29-30页 |
| 4 结果与分析 | 第30-51页 |
| 4.1 砀山酥梨PbC4H克隆 | 第30-33页 |
| 4.1.1 砀山酥梨果实总RNA的提取 | 第30页 |
| 4.1.2 砀山酥梨PbC4H的TA克隆 | 第30-31页 |
| 4.1.3 PbC4H全长及编码的氨基酸序列 | 第31-33页 |
| 4.2 PbC4H蛋白的生物信息学分析 | 第33-39页 |
| 4.2.1 PbC4H蛋白的功能结构域分析 | 第33页 |
| 4.2.2 PbC4H蛋白的同源进化分析 | 第33-36页 |
| 4.2.3 PbC4H蛋白的疏/亲水性分析 | 第36页 |
| 4.2.4 PbC4H蛋白的跨膜结构域分析 | 第36-37页 |
| 4.2.5 PbC4H蛋白亚细胞定位预测 | 第37页 |
| 4.2.6 PbC4H蛋白信号肽预测 | 第37页 |
| 4.2.7 PbC4H蛋白二级结构分析 | 第37-39页 |
| 4.2.8 PbC4H蛋白三级结构预测 | 第39页 |
| 4.3 PbC4H的表达分析 | 第39-44页 |
| 4.3.1 梨果实总RNA的提取及检测 | 第39-40页 |
| 4.3.2 目的基因PbC4H和内参基因Tubulin的克隆 | 第40-41页 |
| 4.3.3 PbC4H和Tubulin的标准曲线 | 第41-42页 |
| 4.3.4 砀山酥梨不同发育时期PbC4H的表达 | 第42-43页 |
| 4.3.5 不同授粉对PbC4H表达量的影响 | 第43-44页 |
| 4.4 PbC4H原核表达 | 第44-46页 |
| 4.4.1 PbC4H原核表达载体的构建 | 第44-45页 |
| 4.4.2 PbC4H的原核表达 | 第45-46页 |
| 4.5 PbC4H真核表达 | 第46-51页 |
| 4.5.1 真核表达载体的构建 | 第46-48页 |
| 4.5.2 烟草中瞬时表达PbC4H | 第48-49页 |
| 4.5.3 PbC4H遗传转化拟南芥 | 第49-51页 |
| 5 讨论 | 第51-54页 |
| 5.1 PbC4H的克隆和生物信息学分析 | 第51页 |
| 5.2 PbC4H的荧光定量PCR分析 | 第51-52页 |
| 5.3 PbC4H的原核表达 | 第52页 |
| 5.4 PbC4H的真核表达 | 第52-54页 |
| 6 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 附录 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 作者简介 | 第63页 |
| 在读期间发表的论文 | 第63页 |
