| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 文献综述 | 第12-20页 |
| 1 草莓镶脉病毒 | 第12-13页 |
| 1.1 草莓镶脉病毒的分布及危害 | 第12页 |
| 1.2 草莓镶脉病毒基因组结构 | 第12页 |
| 1.3 草莓镶脉病毒编码的蛋白及功能 | 第12-13页 |
| 2 RNA沉默 | 第13-16页 |
| 2.1 RNA沉默概述 | 第13-14页 |
| 2.2 植物病毒编码的RNA沉默抑制子 | 第14-16页 |
| 2.2.1 抑制子靶向沉默相关RNAs | 第14-15页 |
| 2.2.2 抑制子与寄主蛋白相互作用 | 第15-16页 |
| 2.2.3 沉默抑制子的其他策略 | 第16页 |
| 3 病毒侵染性克隆与病毒载体 | 第16-20页 |
| 3.1 植物病毒侵染性克隆 | 第17页 |
| 3.2 植物病毒载体 | 第17-20页 |
| 引言 | 第20-21页 |
| 材料与方法 | 第21-32页 |
| 1 供试材料 | 第21-22页 |
| 1.1 感染SVBV病样来源 | 第21页 |
| 1.2 植物材料 | 第21页 |
| 1.3 菌种、载体和质粒 | 第21页 |
| 1.4 酶和化学试剂 | 第21页 |
| 1.5 常用缓冲溶液和培养基 | 第21页 |
| 1.6 抗生素 | 第21-22页 |
| 1.7 仪器设备 | 第22页 |
| 2 试验方法 | 第22-32页 |
| 2.1 草莓叶片总DNA的提取 | 第22页 |
| 2.2 Easy Pure试剂盒提取RNA | 第22页 |
| 2.3 cDNA的合成 | 第22页 |
| 2.4 PCR技术 | 第22页 |
| 2.5 PCR产物的克隆 | 第22-24页 |
| 2.5.1 PCR产物回收和纯化 | 第22-23页 |
| 2.5.2 DNA的连接 | 第23页 |
| 2.5.3 感受态细胞的制备 | 第23页 |
| 2.5.4 连接产物的转化 | 第23页 |
| 2.5.5 阳性克隆的PCR鉴定 | 第23-24页 |
| 2.5.6 质粒提取 | 第24页 |
| 2.6 重组质粒的鉴定 | 第24页 |
| 2.7 农杆菌瞬时浸润策略 | 第24页 |
| 2.7.1 农杆菌浸润本氏烟 | 第24页 |
| 2.7.2 SVBV侵染性克隆接种森林草莓 | 第24页 |
| 2.8 SVBV沈阳分离物和SVBV北京分离物全长克隆 | 第24-26页 |
| 2.8.1 扩增SVBV的引物设计 | 第24-25页 |
| 2.8.2 SVBV全长序列的克隆 | 第25-26页 |
| 2.8.3 SVBV分离物的序列分析 | 第26页 |
| 2.9 SVBV-US和SVBV-SY侵染性克隆的构建 | 第26-28页 |
| 2.9.1 SVBV-US侵染性克隆的构建方法 | 第26-27页 |
| 2.9.2 SVBV-SY侵染性克隆的构建方法 | 第27-28页 |
| 2.10 SVBV P6移码突变侵染性克隆的构建 | 第28-29页 |
| 2.10.1 P6移码突变策略 | 第28页 |
| 2.10.2 P6移码突变侵染性克隆的构建 | 第28-29页 |
| 2.11 SVBV病毒载体的构建 | 第29-30页 |
| 2.11.1 多克隆位点插入策略 | 第29-30页 |
| 2.11.2 SVBV病毒载体的构建流程 | 第30页 |
| 2.12 ELISA检测P6蛋白表达量 | 第30页 |
| 2.13 实时荧光定量PCR | 第30-32页 |
| 结果与分析 | 第32-53页 |
| 1 SVBV P6抑制基因沉默的机制 | 第32-39页 |
| 1.1 P6不能抑制ds GFP介导的RNA沉默 | 第32-34页 |
| 1.2 P6不能局部回复已沉默的 16c本氏烟 | 第34-39页 |
| 2 SVBV沈阳分离物和SVBV北京分离物全长基因组的克隆 | 第39-43页 |
| 2.1 SVBV全长基因组的克隆 | 第39页 |
| 2.2 SVBV-SY和SVBV-BJ的序列分析 | 第39-43页 |
| 3 SVBV-US和SVBV-SY侵染性克隆构建与侵染性鉴定 | 第43-46页 |
| 3.1 SVBV-US侵染性克隆的构建 | 第43页 |
| 3.2 SVBV-SY侵染性克隆的构建 | 第43-44页 |
| 3.3 SVBV侵染性克隆接种验证 | 第44-46页 |
| 4 SVBV P6移码突变侵染性克隆的构建 | 第46-48页 |
| 4.1 P6移码突变 | 第46-47页 |
| 4.2 P6移码突变侵染性克隆的构建 | 第47页 |
| 4.3 P6移码突变侵染性克隆接种验证 | 第47-48页 |
| 5 SVBV病毒载体的构建 | 第48-53页 |
| 5.1 质粒pSVBV-MCS的构建 | 第48-49页 |
| 5.2 SVBV病毒载体的构建 | 第49-50页 |
| 5.3 SVBV病毒载体接种验证 | 第50-53页 |
| 讨论 | 第53-56页 |
| 1 P6抑制RNA沉默的机制 | 第53页 |
| 2 SVBV基因组序列变异 | 第53-54页 |
| 3 SVBV不同分离物侵染性差异 | 第54页 |
| 4 SVBV病毒载体 | 第54-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 作者简介 | 第65页 |
