| 摘要 | 第13-16页 |
| ABSTRACT | 第16-18页 |
| 符号与缩写 | 第19-20页 |
| 第一章 绪论 | 第20-48页 |
| 1.1 DNA概述 | 第20-21页 |
| 1.1.1 DNA化学组成和结构 | 第20页 |
| 1.1.2 DNA的作用功能 | 第20-21页 |
| 1.2 DNA纳米技术 | 第21-22页 |
| 1.3 粘性末端介导的链置换反应的原理及应用 | 第22-33页 |
| 1.3.1 粘性末端介导的链置换反应的基本原理 | 第22-23页 |
| 1.3.2 粘性末端介导的链置换反应的调控方式 | 第23-27页 |
| 1.3.3 粘性末端介导的链置换反应的应用 | 第27-33页 |
| 1.4 酶促链置换反应 | 第33-37页 |
| 1.4.1 缺口依赖的链置换放大 | 第34-35页 |
| 1.4.2 引物依赖的链置换放大 | 第35-37页 |
| 1.5 本论文的创新点以及研究内容 | 第37-40页 |
| 1.5.1 创新点 | 第37-38页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第38-40页 |
| 1.6 参考文献 | 第40-48页 |
| 第二章 粘性末端介导的链置换反应结合等温放大方法用于单碱基突变的检测 | 第48-70页 |
| 2.1 引言 | 第48-50页 |
| 2.2 实验部分 | 第50-54页 |
| 2.2.1 仪器 | 第50-51页 |
| 2.2.2 材料与试剂 | 第51-53页 |
| 2.2.3 实验步骤 | 第53-54页 |
| 2.2.3.1 高温高压灭菌 | 第53页 |
| 2.2.3.2 DNA的分装及储存 | 第53页 |
| 2.2.3.3 粘性末端介导的链置换反应引发的等温放大反应 | 第53-54页 |
| 2.2.3.4 荧光强度的测定和标准曲线的建立 | 第54页 |
| 2.2.3.5 HeLa细胞裂解液的制备 | 第54页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第54-65页 |
| 2.3.1 识别探针和信号探针的设计 | 第54-55页 |
| 2.3.2 粘性末端介导的链置换反应引发的等温放大方法的可行性研究 | 第55-56页 |
| 2.3.3 反应条件的优化 | 第56-60页 |
| 2.3.3.1 识别探针浓度的优化 | 第56-57页 |
| 2.3.3.2 信号探针浓度的优化 | 第57-58页 |
| 2.3.3.3 聚合酶和切刻内切酶浓度的优化 | 第58-60页 |
| 2.3.3.4 NMM浓度的优化 | 第60页 |
| 2.3.4 粘性末端介导链置换反应引发的等温放大方法的分析性能 | 第60-65页 |
| 2.3.4.1 不同的粘性末端长度对链置换反应速率的影响 | 第60-62页 |
| 2.3.4.2 荧光强度对不同浓度目标DNA的响应以及线性范围的确定 | 第62-63页 |
| 2.3.4.3 精密度和重现性的考察 | 第63-64页 |
| 2.3.4.4 特异性的考察 | 第64-65页 |
| 2.3.4.5 回收率实验 | 第65页 |
| 2.4 结论 | 第65-66页 |
| 2.5 参考文献 | 第66-70页 |
| 第三章 结合诱导的缝合Toehold活化策略用于可控的DNA链置换反应 | 第70-92页 |
| 3.1 引言 | 第70-71页 |
| 3.2 实验部分 | 第71-74页 |
| 3.2.1 仪器装置 | 第71页 |
| 3.2.2 材料与试剂 | 第71-74页 |
| 3.3 实验步骤 | 第74-76页 |
| 3.3.1 结合诱导的缝合Toehold链置换反应的探针制备 | 第74页 |
| 3.3.2 利用荧光方法监测缝合Toehold介导链置换反应以及荧光数据处理 | 第74-76页 |
| 3.3.3 缝合Toehold介导的链置换反应的聚丙烯酰胺电泳实验 | 第76页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第76-88页 |
| 3.4.1 缝合Toehold介导的链置换反应的原理 | 第76-77页 |
| 3.4.2 Hg~(2+)诱导的缝合Toehold介导的链置换反应的可行性验证 | 第77-78页 |
| 3.4.3 反应条件的优化 | 第78-80页 |
| 3.4.3.1 Mg~(2+)度的优化 | 第78-79页 |
| 3.4.3.2 Hg~(2+)与其结合序列作用的反应缓冲液pH的优化 | 第79-80页 |
| 3.4.4 Hg~(2+)结合序列的设计 | 第80-81页 |
| 3.4.5 Toehold长度对链置换反应速率的影响 | 第81-82页 |
| 3.4.6 汞离子调控链置换反应速率的情况考察 | 第82-84页 |
| 3.4.7 缝合Toehold活化策略的通用性考察 | 第84-88页 |
| 3.4.7.1 ATP响应的缝合Toehold活化策略引发的链置换反应原理 | 第84-85页 |
| 3.4.7.2 ATP响应的组合Toehold活化策略引发的链置换反应可行性验证 | 第85-86页 |
| 3.4.7.3 ATP调控链置换反应速率的情况考察 | 第86-88页 |
| 3.5 结论 | 第88-89页 |
| 3.6 参考文献 | 第89-92页 |
| 第四章 DNA结构开关触发的免标记荧光放大方法用于尿嘧啶糖基化酶和抑制剂的筛选 | 第92-112页 |
| 4.1 引言 | 第92-93页 |
| 4.2 实验部分 | 第93-96页 |
| 4.2.1 仪器装置 | 第93页 |
| 4.2.2 材料与试剂 | 第93-95页 |
| 4.2.3 实验步骤 | 第95-96页 |
| 4.2.3.0 高压灭菌 | 第95页 |
| 4.2.3.1 DNA的退火 | 第95页 |
| 4.2.3.2 荧光放大方法用于UDG活性的检测和抑制剂筛选 | 第95-96页 |
| 4.2.3.3 荧光强度的测定和标准曲线的建立 | 第96页 |
| 4.2.3.4 细胞裂解液的制备 | 第96页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第96-107页 |
| 4.3.1 基于构象可变式探针一个碱基移除的荧光放大方法检测UDG的原理 | 第96-97页 |
| 4.3.2 构象转变机制和荧光放大功能的证明 | 第97-99页 |
| 4.3.3 构象可变式探针的设计 | 第99-101页 |
| 4.3.4 实验条件的优化 | 第101-104页 |
| 4.3.5 体系的传感性能 | 第104-107页 |
| 4.3.5.1 灵敏度考察 | 第104-105页 |
| 4.3.5.2 特异性考察 | 第105-106页 |
| 4.3.5.3 抑制剂筛选 | 第106-107页 |
| 4.4 结论 | 第107-108页 |
| 4.5 参考文献 | 第108-112页 |
| 第五章 基于DNA三向节活化的杂交链式反应用于尿嘧啶DNA糖基化酶和DNA甲基化转移酶的高灵敏检测 | 第112-142页 |
| 5.1 引言 | 第112-113页 |
| 5.2 实验部分 | 第113-117页 |
| 5.2.1 仪器装置 | 第113页 |
| 5.2.2 材料与试剂 | 第113-114页 |
| 5.2.3 实验步骤 | 第114-117页 |
| 5.2.3.1 高压灭菌 | 第114-115页 |
| 5.2.3.2 DNA的退火 | 第115页 |
| 5.2.3.3 UDG与其识别探针作用以及M.SssI与其识别探针的作用 | 第115页 |
| 5.2.3.4 杂交链式反应的进行 | 第115页 |
| 5.2.3.5 染料的加入以及荧光测定 | 第115-116页 |
| 5.2.3.6 UDG以及DNA甲基化转移酶抑制剂的筛选 | 第116页 |
| 5.2.3.7 细胞裂解液的制备以及实际样品的检测 | 第116-117页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第117-137页 |
| 5.3.1 DNA三向节活化为基础的杂交链式反应检测UDG酶活性原理 | 第117-119页 |
| 5.3.2 DNA三向节活化的杂交链式反应检测UDG活性的可行性分析 | 第119-121页 |
| 5.3.3 UDG酶识别探针的设计 | 第121-123页 |
| 5.3.4 实验条件的优化 | 第123-127页 |
| 5.3.5 DNA三向节活化的杂交链式反应用于检测UDG活性 | 第127-131页 |
| 5.3.5.1 灵敏度 | 第127-128页 |
| 5.3.5.2 特异性考察 | 第128-129页 |
| 5.3.5.3 细胞裂解液中UDG酶活性的测定 | 第129-130页 |
| 5.3.5.4 抑制剂筛选 | 第130-131页 |
| 5.3.6 DNA三向节活化的杂交链式反应用于检测M.SssI活性原理 | 第131-133页 |
| 5.3.7 DNA三向节活化的杂交链式反应检测M.SssI活性的可行性研究 | 第133-134页 |
| 5.3.8 DNA三向节活化的杂交链式反应检测M.SssI活性的性能 | 第134-137页 |
| 5.3.8.1 灵敏度 | 第134-135页 |
| 5.3.8.2 特异性 | 第135-136页 |
| 5.3.8.3 抑制剂筛选 | 第136-137页 |
| 5.4 结论 | 第137-138页 |
| 5.5 参考文献 | 第138-142页 |
| 致谢 | 第142-144页 |
| 博士期间发表论文 | 第144-145页 |
| 附件 | 第145-161页 |
