| 摘要 | 第3-8页 |
| ABSTRACT | 第8-12页 |
| 中英文缩略词表 | 第17-18页 |
| 第1章 前言 | 第18-27页 |
| 1.1 抗真菌药物敏感性试验方法M27-A3 | 第18-19页 |
| 1.2 白色念珠菌MLST分型研究 | 第19-21页 |
| 1.3 白色念珠菌致病性研究 | 第21-24页 |
| 1.3.1 白色念珠菌多态性 | 第21页 |
| 1.3.2 生物膜形成 | 第21-22页 |
| 1.3.3 粘附 | 第22页 |
| 1.3.4 侵袭 | 第22页 |
| 1.3.5 分泌型水解酶 | 第22-23页 |
| 1.3.6 热激蛋白（Hsps）和小热激蛋白（s Hsps） | 第23-24页 |
| 1.4 Htr Ap | 第24-26页 |
| 1.4.1 Htr Ap结构和分类 | 第24页 |
| 1.4.2 Htr Ap功能 | 第24-26页 |
| 1.5 本研究的主要内容 | 第26页 |
| 1.6 本研究的创新性和意义 | 第26-27页 |
| 第2章 临床白色念珠菌抗真菌药物敏感性和MLST分型研究 | 第27-43页 |
| 第1节 材料和方法 | 第27-32页 |
| 1.1 实验材料 | 第27-28页 |
| 1.1.1 标本来源和质控菌株 | 第27页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第27页 |
| 1.1.3 主要设备和仪器 | 第27-28页 |
| 1.1.4 主要缓冲液和培养基配方 | 第28页 |
| 1.2 实验方法 | 第28-32页 |
| 1.2.1 185 株临床白色念珠菌分离、纯化和鉴定 | 第28-29页 |
| 1.2.2 185 株白色念珠菌药物敏感性检测 | 第29页 |
| 1.2.3 白色念珠菌基因组DNA提取 | 第29-30页 |
| 1.2.4 185 株临床分离白色念珠菌MLST分型 | 第30-32页 |
| 第2节 结果 | 第32-39页 |
| 2.1 白色念珠菌临床资料统计 | 第32页 |
| 2.2 185 株临床分离白色念珠菌抗真菌药物敏感性试验 | 第32页 |
| 2.3 185 株临床分离白色念珠菌MLST分型 | 第32-39页 |
| 第3节 讨论 | 第39-42页 |
| 3.1 抗真菌药物敏感性试验 | 第39-40页 |
| 3.2 白色念珠菌MLST基因分型 | 第40-42页 |
| 第4节 结论 | 第42-43页 |
| 第3章 白色念珠菌Ca Htr Ap丝氨酸蛋白酶功能初探 | 第43-79页 |
| 第1节 材料和方法 | 第43-55页 |
| 1.1 实验材料 | 第43-44页 |
| 1.1.1 质粒、菌株和动物 | 第43页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第43-44页 |
| 1.1.3 主要设备和仪器 | 第44页 |
| 1.1.4 主要缓冲液和培养基配方 | 第44页 |
| 1.2 实验方法 | 第44-55页 |
| 1.2.1 Ca Htr Ap生物信息学分析 | 第44-45页 |
| 1.2.2 Ca Htr A1p及其水解活性丝氨酸突变体蛋白的获得 | 第45-51页 |
| 1.2.2.1 原核表达引物和定点突变引物设计 | 第45-46页 |
| 1.2.2.2 Ca Htr A1基因克隆 | 第46页 |
| 1.2.2.3 水解活性活性丝氨酸位点突变基因的构建 | 第46-47页 |
| 1.2.2.4 原核表达质粒p ET-28c提取 | 第47页 |
| 1.2.2.5 DNA片段与质粒p ET-28c双酶切 | 第47页 |
| 1.2.2.6 双酶切片段的连接 | 第47页 |
| 1.2.2.7 大肠杆菌Trans5α 感受态制备与转化 | 第47-48页 |
| 1.2.2.8 原核表达质粒阳性克隆筛选 | 第48页 |
| 1.2.2.9 表达宿主菌Transtta(DE3)生长曲线测定 | 第48-49页 |
| 1.2.2.10 融合蛋白诱导表达的检测 | 第49-50页 |
| 1.2.2.11 重组质粒诱导表达条件优化 | 第50-51页 |
| 1.2.2.12 Ca Htr A1p及其丝氨酸位点突变蛋白的获得 | 第51页 |
| 1.2.3 Ca Htr Ap及其丝氨酸位点突变体蛋白体外活性检测 | 第51-52页 |
| 1.2.3.1 Ca Htr A1p酶活反应条件优化 | 第51-52页 |
| 1.2.3.2 Ca Htr A1p及其水解活性丝氨酸突变蛋白体外活性比较 | 第52页 |
| 1.2.4 小鼠抗Ca Htr Ap多克隆抗体制备 | 第52-53页 |
| 1.2.4.1 抗Ca Htr A1p多克隆抗体制备 | 第52页 |
| 1.2.4.2 多克隆抗体Anti-Ca Htr A1p验证 | 第52-53页 |
| 1.2.5 Ca Htr Ap亚细胞定位检测 | 第53页 |
| 1.2.6 与Ca Htr Ap相互作用的白色念珠菌蛋白筛选 | 第53-55页 |
| 1.2.6.1 免疫共沉淀筛选与Ca Htr Ap相互作用蛋白 | 第53-54页 |
| 1.2.6.2 质谱仪检测相互作用蛋白 | 第54-55页 |
| 第2节 结果 | 第55-73页 |
| 2.1 Ca Htr A基因及其编码产物生物信息学分析 | 第55-56页 |
| 2.2 Ca Htr A1p及其水解活性丝氨酸位点突变体蛋白的获得 | 第56-63页 |
| 2.2.1 Ca Htr A1p及其水解活性丝氨酸突变体原核表达载体构建 | 第56-59页 |
| 2.2.1.1 菌液PCR验证阳性重组子 | 第56-57页 |
| 2.2.1.2 重组质粒双酶切验证 | 第57-58页 |
| 2.2.1.3 重组质粒测序验证 | 第58页 |
| 2.2.1.4 融合蛋白Ca Htr A1p及其水解活性丝氨酸突变体空间结构比较 | 第58-59页 |
| 2.2.2 Ca Htr A1p及其丝氨酸位点突变体蛋白的获得 | 第59-63页 |
| 2.2.2.1 表达宿主菌Transtta(DE3)生长曲线测定 | 第59-60页 |
| 2.2.2.2 融合蛋白诱导表达检测 | 第60-61页 |
| 2.2.2.3 融合蛋白诱导表达条件优化 | 第61-62页 |
| 2.2.2.4 融合蛋白表达和纯化 | 第62-63页 |
| 2.3 Ca Htr A1p丝氨酸蛋白酶功能体外验证 | 第63-67页 |
| 2.3.1 体外酶活性反应条件优化 | 第63-65页 |
| 2.3.2 Ca Htr A1p及其丝氨酸位点突变体蛋白体外活性比较 | 第65-67页 |
| 2.4 多克隆抗体制备及活性验证 | 第67页 |
| 2.5 Ca Htr Ap亚细胞定位检测 | 第67-68页 |
| 2.6 与Ca Htr Ap相互作用的白色念珠菌蛋白筛选 | 第68-73页 |
| 第3节 讨论 | 第73-78页 |
| 3.1 Ca Htr Ap是一种典型的丝氨酸蛋白酶，其中Ser219和Ser220有协同效应 | 第73-74页 |
| 3.2 与Ca Htr Ap相互作用的白色念珠菌蛋白 | 第74-76页 |
| 3.3 Ca Htr Ap是一种细胞质蛋白，可能与假菌丝形成有关 | 第76-78页 |
| 第4节 结论 | 第78-79页 |
| 第4章 展望 | 第79-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-91页 |
| 附录 | 第91-109页 |
| 攻读硕士期间研究成果 | 第109-110页 |
| 综述 | 第110-116页 |
| 参考文献 | 第115-116页 |
