| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第12-36页 |
| 1.1 癌症的治疗现状及发展方向 | 第12-14页 |
| 1.2 siRNA药物与肿瘤治疗 | 第14-18页 |
| 1.2.1 RNA干扰的机制 | 第14-15页 |
| 1.2.2 siRNA药物用于肿瘤治疗的优势 | 第15页 |
| 1.2.3 siRNA药物用于肿瘤治疗潜在的靶点 | 第15-17页 |
| 1.2.4 siRNA药物用于肿瘤治疗面临的挑战 | 第17-18页 |
| 1.3 siRNA药物递送系统及肿瘤治疗应用 | 第18-26页 |
| 1.3.1 化学修饰siRNA | 第18-19页 |
| 1.3.2 脂质类siRNA递送载体 | 第19-22页 |
| 1.3.3 聚合物类siRNA递送载体 | 第22-24页 |
| 1.3.4 siRNA耦联递送系统 | 第24-25页 |
| 1.3.5 其它siRNA递送系统 | 第25-26页 |
| 1.4 本课题的选题目的及主要研究内容 | 第26-28页 |
| 参考文献 | 第28-36页 |
| 第二章 阳离子脂质辅助的聚合物纳米颗粒递送siRNA用于肿瘤代谢抑制研究 | 第36-66页 |
| 2.1 引言 | 第36-38页 |
| 2.2 实验材料及方法 | 第38-47页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第38页 |
| 2.2.2 包载siRNA纳米颗粒(NP_(siRNA))的制备及表征 | 第38-39页 |
| 2.2.3 细胞培养 | 第39页 |
| 2.2.4 qRT-PCR检测低糖培养后神经胶质瘤细胞相关基因表达的变化 | 第39页 |
| 2.2.5 流式细胞术(FACS)检测低糖培养后CD133~+神经胶质瘤干细胞比例的变化 | 第39-40页 |
| 2.2.6 有限稀释实验(LDA)检测低糖培养后神经胶质瘤干细胞比例的变化 | 第40页 |
| 2.2.7 FACS检测神经胶质瘤细胞和神经胶质瘤干细胞对纳米颗粒的摄取 | 第40-41页 |
| 2.2.8 激光共聚焦荧光显微镜(CLSM)观察神经胶质瘤细胞和神经胶质瘤干细胞对纳米颗粒的摄取 | 第41页 |
| 2.2.9 高效液相色谱(HPLC)定量检测神经胶质瘤细胞和神经胶质瘤干细胞对纳米颗粒的摄取 | 第41-42页 |
| 2.2.10 qRT-PCR检测包载GLUT3 siRNA纳米颗粒(NP_(siGLUT3))对神经胶质瘤细胞GLUT3基因的沉默效果 | 第42页 |
| 2.2.11 Western blot检测(NP_(siGLUT3))对神经胶质瘤细胞GLUT3基因的沉默效果 | 第42页 |
| 2.2.12 FACS检测(NP_(siGLUT3))对神经胶质瘤细胞葡萄糖摄取的影响 | 第42-43页 |
| 2.2.13 比色法检测(NP_(siGLUT3))对神经胶质瘤细胞葡萄糖摄取的影响 | 第43页 |
| 2.2.14 比色法检测(NP_(siGLUT3))对神经胶质瘤细胞乳酸产生的影响 | 第43-44页 |
| 2.2.15 FACS检测(NP_(siGLUT3))对神经胶质瘤细胞ROS产生的影响 | 第44页 |
| 2.2.16 MTT检测(NP_(siGLUT3))对神经胶质瘤细胞增殖的影响 | 第44-45页 |
| 2.2.17 FACS检测(NP_(siGLUT3))对神经胶质瘤细胞凋亡的影响 | 第45页 |
| 2.2.18 FACS检测(NP_(siGLUT3))对神经胶质瘤干细胞比例的影响 | 第45-46页 |
| 2.2.19 U87MG神经胶质瘤荷瘤小鼠模型的建立和治疗 | 第46页 |
| 2.2.20 治疗结束后肿瘤内GLUT3及干性相关基因表达检测 | 第46页 |
| 2.2.21 FACS检测治疗结束后肿瘤内神经胶质瘤干细胞的比例 | 第46-47页 |
| 2.2.22 免疫组化检测治疗结束后肿瘤内神经胶质瘤干细胞的比例 | 第47页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第47-61页 |
| 2.3.1 纳米颗粒的制备和表征 | 第47-48页 |
| 2.3.2 低糖条件培养富集神经胶质瘤干细胞 | 第48-50页 |
| 2.3.3 细胞水平检测神经胶质瘤干细胞和普通神经胶质瘤细胞对NPFAM-siRNA的摄取 | 第50-52页 |
| 2.3.4 细胞水平检测(NP_(siGLUT3))对GLUT3基因的沉默效果 | 第52-53页 |
| 2.3.5 细胞水平检测(NP_(siGLUT3))对神经胶质瘤细胞代谢的抑制效果 | 第53-56页 |
| 2.3.6 细胞水平检测(NP_(siGLUT3))对细胞增殖,干性和凋亡的影响 | 第56-57页 |
| 2.3.7 体内治疗实验检测(NP_(siGLUT3))的抗肿瘤能力 | 第57-59页 |
| 2.3.8 (NP_(siGLUT3))治疗对U87MG神经胶质瘤干性的影响 | 第59-61页 |
| 2.4 本章小结 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-66页 |
| 第三章 肿瘤酸响应化学键桥联共聚物PEG-Dlink_m-PLGA用于siRNA递送研究 | 第66-102页 |
| 3.1 引言 | 第66-68页 |
| 3.2 实验材料及方法 | 第68-77页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第68-69页 |
| 3.2.2 三种高分子聚合物的合成 | 第69-70页 |
| 3.2.3 包载siRNA纳米颗粒(NP_(siRNA))的制备及表征 | 第70-71页 |
| 3.2.4 ~(dPEG)NP_(PLGA/siRNA)纳米颗粒表面PEG脱壳动力学检测 | 第71页 |
| 3.2.5 纳米颗粒的体内药代动力学检测 | 第71页 |
| 3.2.6 细胞培养 | 第71页 |
| 3.2.7 人乳腺癌荷瘤小鼠模型建立 | 第71-72页 |
| 3.2.8 小动物成像仪检测荷瘤小鼠模型中纳米颗粒的肿瘤富集 | 第72页 |
| 3.2.9 CLSM检测荷瘤小鼠模型中纳米颗粒的肿瘤富集 | 第72页 |
| 3.2.10 HPLC定量检测荷瘤小鼠模型中纳米颗粒的肿瘤富集 | 第72页 |
| 3.2.11 FACS检测荷瘤小鼠模型中纳米颗粒的肿瘤细胞摄取 | 第72-73页 |
| 3.2.12 FACS检测细胞水平纳米颗粒的肿瘤细胞摄取 | 第73页 |
| 3.2.13 CLSM检测细胞水平纳米颗粒的肿瘤细胞摄取 | 第73-74页 |
| 3.2.14 HPLC检测细胞水平纳米颗粒的肿瘤细胞摄取 | 第74页 |
| 3.2.15 FACS检测荷瘤小鼠中(NP_(siRNA))在细胞内的siRNA释放行为 | 第74-75页 |
| 3.2.16 FACS检测细胞水平(NP_(siRNA))在细胞内的siRNA释放行为 | 第75-76页 |
| 3.2.17 HPLC检测(NP_(siRNA))的累积siRNA释放 | 第76页 |
| 3.2.18 体内水平检测NP_(siPlk1)对Plk1基因表达的沉默效果 | 第76页 |
| 3.2.19 细胞水平检测NP_(siPlk1)对Plk1基因表达的沉默效果 | 第76-77页 |
| 3.2.20 检测NP_(siPlk1)对肿瘤的治疗效果 | 第77页 |
| 3.2.21 免疫组化检测治疗结束后肿瘤内细胞增殖和凋亡情况 | 第77页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第77-96页 |
| 3.3.1 包载siRNA纳米颗粒(NP_(siRNA))的制备及表征 | 第77-81页 |
| 3.3.2 检测三种包载siRNA纳米颗粒的药代动力学 | 第81-82页 |
| 3.3.3 酸响应PEG脱壳增加~(dPEG)NP_(PLGA)的肿瘤富集和肿瘤细胞摄取 | 第82-87页 |
| 3.3.4 PLGA疏水中间层加快纳米颗粒的胞内siRNA释放 | 第87-92页 |
| 3.3.5 检测~(dPEG)NP_(PLGA/siPlk1)纳米颗粒对Plk1基因的沉默效果 | 第92-94页 |
| 3.3.6 检测~(dPEG)NP_(PLGA/siPlk1)纳米颗粒对肿瘤生长的抑制效果 | 第94-96页 |
| 3.4 本章小结 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-102页 |
| 附录一 主要仪器设备 | 第102-104页 |
| 附录二 常规试剂 | 第104-106页 |
| 附录三 主要溶液配制 | 第106-110页 |
| 附录四 常规实验方法及检测条件 | 第110-118页 |
| 致谢 | 第118-120页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 | 第120-121页 |
