| 学位论文数据集 | 第4-5页 |
| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 目录 | 第10-13页 |
| Contents | 第13-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-30页 |
| 1.1 PQQ概述 | 第16-23页 |
| 1.1.1 PQQ结构特点及性质 | 第16页 |
| 1.1.2 PQQ的生物合成基因 | 第16-19页 |
| 1.1.3 PQQ的分布 | 第19页 |
| 1.1.4 PQQ的生物学功能 | 第19-21页 |
| 1.1.5 PQQ可能的生物合成途径 | 第21-22页 |
| 1.1.6 PQQ检测方法 | 第22-23页 |
| 1.2 基因组改组 | 第23-25页 |
| 1.2.1 基因组改组的原理 | 第23-24页 |
| 1.2.2 基因组改组的优点 | 第24-25页 |
| 1.2.3 基因组改组选育工业微生物的实例 | 第25页 |
| 1.3 细胞全局转录调机器工程 | 第25-28页 |
| 1.3.1 基因表达网路的复杂性 | 第26页 |
| 1.3.2 gTME原理 | 第26-27页 |
| 1.3.3 gTME的特点和应用 | 第27页 |
| 1.3.4 gTME技术路线 | 第27-28页 |
| 1.4 本课题的研究意义 | 第28-30页 |
| 第二章 基因组改组条件的研究 | 第30-40页 |
| 2.1 引言 | 第30页 |
| 2.2 材料和方法 | 第30-31页 |
| 2.2.1 材料 | 第30-31页 |
| 2.3 原生质体制备及再生的研究 | 第31-33页 |
| 2.3.1 菌体预处理 | 第31页 |
| 2.3.2 原生质体制备及形成率、再生率的计算 | 第31-32页 |
| 2.3.3 实验方案 | 第32-33页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第33-37页 |
| 2.5 原生质体融合条件的研究 | 第37-38页 |
| 2.6 结果与讨论 | 第38-39页 |
| 2.7 小结 | 第39-40页 |
| 第三章 基因组改组选育吡咯喹啉醌高产菌 | 第40-50页 |
| 3.1 引言 | 第40页 |
| 3.2 实验方法 | 第40-42页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第40-41页 |
| 3.2.2 实验方法 | 第41-42页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第42-44页 |
| 3.3.1 第一轮基因组改组 | 第42-43页 |
| 3.3.2 第二轮基因组改组 | 第43-44页 |
| 3.3.3 第三轮基因组改组 | 第44页 |
| 3.4 基因组改组数据分析 | 第44-45页 |
| 3.5 高产菌F3-8的发酵实验 | 第45-47页 |
| 3.6 高产菌F3-8的葡萄糖消耗实验 | 第47-48页 |
| 3.7 小结 | 第48-50页 |
| 第四章 全局转录调控机器工程 | 第50-66页 |
| 4.1 引言 | 第50页 |
| 4.2 实验材料 | 第50-51页 |
| 4.2.1 菌种和质粒 | 第50页 |
| 4.2.2 培养基 | 第50-51页 |
| 4.2.3 分子克隆用酶和试剂 | 第51页 |
| 4.3 实验方法 | 第51-57页 |
| 4.3.1 提取K.pneumoniae基因组DNA | 第51页 |
| 4.3.2 扩增目的基因rpoD | 第51-52页 |
| 4.3.3 提取pET-PK质粒 | 第52-53页 |
| 4.3.4 构建含pET-PK-rpoD质粒的对照菌 | 第53-54页 |
| 4.3.5 阳性克隆E.coli(pET-PK-drpoD)的鉴定 | 第54页 |
| 4.3.6 对照菌K.Pneumoniae(pET-PK-drpoD)的构建 | 第54-55页 |
| 4.3.7 易错PCR扩增rpoD基因 | 第55-56页 |
| 4.3.8 构建基因rpoD突变文库 | 第56页 |
| 4.3.9 工程菌K.P(pET-PK-trpoD)的鉴定 | 第56-57页 |
| 4.3.10 工程菌K.P(pET-PK-trpoD)的发酵 | 第57页 |
| 4.3.11 生物量及PQQ产量的测定 | 第57页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第57-64页 |
| 4.4.1 提取K.pneumoniae基因组DNA | 第57-58页 |
| 4.4.2 PCR扩增σ因子rpoD基因 | 第58页 |
| 4.4.3 阳性克隆E.coli(pET-PK-drpoD)的鉴定 | 第58-59页 |
| 4.4.4 对照菌K.Pneumoniae(pET-PK-drpoD)的构建 | 第59-60页 |
| 4.4.5 构建突变库 | 第60-61页 |
| 4.4.6 重组菌阳性克隆的筛选 | 第61-62页 |
| 4.4.7 重组菌发酵生产PQQ | 第62-63页 |
| 4.4.8 trpoD基因的序列分析 | 第63-64页 |
| 4.5 小结 | 第64-66页 |
| 第五章 Gene shuffling对PQQ产量的影响 | 第66-76页 |
| 5.1 引言 | 第66-67页 |
| 5.2 实验材料 | 第67页 |
| 5.2.1 菌种和质粒 | 第67页 |
| 5.2.2 培养基 | 第67页 |
| 5.3 实验方法 | 第67-72页 |
| 5.3.1 K.pneumoniae六个PQQ基因的克隆 | 第67-70页 |
| 5.3.2 Gene shuffling | 第70-71页 |
| 5.3.3 用非酶法测PQQ产量 | 第71-72页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第72-74页 |
| 5.4.1 PQQ基因簇的质粒提取 | 第72页 |
| 5.4.2 PCR扩增六个基因 | 第72-73页 |
| 5.4.3 CaCl_2热击法转化大肠杆菌 | 第73页 |
| 5.4.4 电转化K.Pneumoniae | 第73-74页 |
| 5.4.5 PQQ产量测定 | 第74页 |
| 5.5 本章小结 | 第74-76页 |
| 第六章 总结与建议 | 第76-78页 |
| 6.1 结论 | 第76-77页 |
| 6.2 创新点 | 第77页 |
| 6.3 问题与建议 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-84页 |
| 附录1 试剂 | 第84-86页 |
| 附录2 仪器设备 | 第86-88页 |
| 致谢 | 第88-90页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第90-92页 |
| 作者和导师简介 | 第92-94页 |
| 附件 | 第94-95页 |
