| 缩写词 | 第9-11页 |
| 摘要 | 第11-13页 |
| Abstract | 第13页 |
| 前言 | 第15-17页 |
| 1 文献综述 | 第17-31页 |
| 1.1 拟南芥突变库的构建及功能基因组学 | 第17-20页 |
| 1.1.1 拟南芥功能基因组学研究概述 | 第17-18页 |
| 1.1.2 拟南芥突变体库的构建方法 | 第18-20页 |
| 1.2 激发标签技术在功能基因组研究上的应用 | 第20-24页 |
| 1.2.1 激发标签技术的主要特点 | 第20-21页 |
| 1.2.2 激发标签技术的作用原理 | 第21页 |
| 1.2.3 激发标签技术在功能基因组中的应用 | 第21-23页 |
| 1.2.4 激发标签技术的发展前景 | 第23-24页 |
| 1.3 拟南芥与丁香假单胞杆菌的互作体系及其抗病信号传导 | 第24-27页 |
| 1.3.1 拟南芥与丁香假单胞杆菌互作体系的建立 | 第24页 |
| 1.3.2 拟南芥与丁香假单胞杆菌互作体系中的R基因和Avr基因 | 第24-26页 |
| 1.3.3 拟南芥与丁香假单胞杆菌体系的互作模式 | 第26页 |
| 1.3.4 拟南芥系统获得性抗性的产生及其信号传导 | 第26-27页 |
| 1.4 渗透胁迫对植物的影响及其与脱落酸的关系 | 第27-31页 |
| 1.4.1 ABA在植物渗透胁迫中的作用 | 第28页 |
| 1.4.2 渗透胁迫调节ABA的合成与降解 | 第28-29页 |
| 1.4.3 渗透胁迫与ABA调节植物基因的表达 | 第29-31页 |
| 2 拟南芥激发标签突变体库的构建 | 第31-39页 |
| 2.1 材料与方法 | 第31-34页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第31页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第31-32页 |
| 2.1.3 实验试剂与营养液 | 第32-33页 |
| 2.1.4 拟南芥的种植 | 第33-34页 |
| 2.1.5 农杆菌的制备 | 第34页 |
| 2.1.6 拟南芥的转化 | 第34页 |
| 2.1.7 拟南芥T1代转化植株的筛选 | 第34页 |
| 2.2 结果与分析 | 第34-35页 |
| 2.2.1 拟南芥T_1代转化植株的筛选结果 | 第34-35页 |
| 2.2.2 拟南芥T_1代转化植株的转化率 | 第35页 |
| 2.2.3 T_1代植株中有表型变化的株系 | 第35页 |
| 2.3 讨论 | 第35-39页 |
| 3 ASR1的基因克隆、转基因验证及初步的功能分析 | 第39-55页 |
| 3.1 材料与方法 | 第39-45页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第39页 |
| 3.1.2 菌株和表达载体 | 第39页 |
| 3.1.3 病原菌菌株 | 第39页 |
| 3.1.4 试剂和仪器 | 第39-40页 |
| 3.1.5 asr1的Southern blotting杂交实验 | 第40-41页 |
| 3.1.5.1 基因组DNA的提取 | 第40页 |
| 3.1.5.2 BAR基因探针的制备 | 第40页 |
| 3.1.5.3 基因组DNA的完全酶切、琼脂糖凝胶电泳及转膜 | 第40-41页 |
| 3.1.5.4 探针的同位素标记 | 第41页 |
| 3.1.5.5 杂交 | 第41页 |
| 3.1.6 Plasmid Rescue克隆ASR1基因 | 第41-42页 |
| 3.1.6.1 asr1基因组DNA的酶切 | 第42页 |
| 3.1.6.2 酶切产物的自连接 | 第42页 |
| 3.1.6.3 感受态大肠杆菌的转化和重组质粒的筛选 | 第42页 |
| 3.1.6.4 DNA序列的测定及同源性比对 | 第42页 |
| 3.1.7 ASR1的Northern blotting分析 | 第42-43页 |
| 3.1.7.1 Northern杂交探针的制备 | 第42-43页 |
| 3.1.7.2 总RNA的提取、甲醛变性电泳、转膜和Northern杂交 | 第43页 |
| 3.1.8 ASR1的转基因验证 | 第43-44页 |
| 3.1.8.1 35S::ASR1 cDNA表达载体的构建 | 第43-44页 |
| 3.1.8.2 野生型拟南芥Col-0的转化 | 第44页 |
| 3.1.9 asr1的假单胞杆菌接种实验 | 第44页 |
| 3.1.10 ASR1的IAA诱导表达实验 | 第44-45页 |
| 3.1.11 asr1生长素反应元件表达模式的GUS检测 | 第45页 |
| 3.1.12 不同光照条件对asr1下胚轴和根发育的影响 | 第45页 |
| 3.2 结果与分析 | 第45-52页 |
| 3.2.1 asr1的遗传分析和表型分析 | 第45-46页 |
| 3.2.2 asr1的Southern杂交实验 | 第46页 |
| 3.2.3 Plasmid Rescue克隆ASR1基因 | 第46-47页 |
| 3.2.4 ASR1基因的Northern blotting分析 | 第47-48页 |
| 3.2.5 ASR1的转基因验证 | 第48-49页 |
| 3.2.6 asr1突变体的假单胞杆菌接种实验 | 第49-50页 |
| 3.2.7 ASR1的IAA诱导表达实验 | 第50页 |
| 3.2.8 asr1生长素反应元件表达模式的GUS检测 | 第50-51页 |
| 3.2.9 不同光照条件对asr1下胚轴和根发育的影响 | 第51-52页 |
| 3.3 讨论 | 第52-55页 |
| 4 ASR1的原核表达、Western杂交以及ASR1:GFP融合蛋白质的亚细胞定位 | 第55-69页 |
| 4.1 材料与方法 | 第55-63页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第55页 |
| 4.1.2 菌株和质粒 | 第55页 |
| 4.1.3 试剂和仪器 | 第55-56页 |
| 4.1.4 ASR1原核表达载体的构建 | 第56页 |
| 4.1.5 在大肠杆菌中诱导ASR1融合蛋白的高效表达 | 第56-57页 |
| 4.1.6 ASR1融合蛋白的大量制备、回收、纯化以及多克隆抗体的制备 | 第57-58页 |
| 4.1.6.1 ASR1融合蛋白的大量制备 | 第57-58页 |
| 4.1.6.2 ASR1融合蛋白的回收和纯化 | 第58页 |
| 4.1.6.3 ASR1融合蛋白多克隆抗体的制备 | 第58页 |
| 4.1.7 ASR1的Western杂交 | 第58-59页 |
| 4.1.8 ASR1:GFP融合蛋白表达载体的构建 | 第59-61页 |
| 4.1.8.1 ASR1 cDNA的PCR扩增 | 第59页 |
| 4.1.8.2 ASR1:GFP融合蛋白表达载体的构建策略 | 第59-61页 |
| 4.1.9 GFP对照表达载体的构建 | 第61-62页 |
| 4.1.10 利用洋葱表皮瞬时表达系统表达ASR1:GFP融合蛋白 | 第62-63页 |
| 4.1.10.1 洋葱表皮细胞的准备 | 第62页 |
| 4.1.10.2 质粒DNA的纯化和金粉包埋 | 第62页 |
| 4.1.10.3 用基因枪法在洋葱表皮细胞中导入外源质粒 | 第62-63页 |
| 4.1.10.4 ASR1:GFP融合蛋白亚细胞定位的显微镜观察 | 第63页 |
| 4.2 结果与分析 | 第63-68页 |
| 4.2.1 ASR1原核表达载体的构建 | 第63-64页 |
| 4.2.2 ASR1的原核表达 | 第64-65页 |
| 4.2.3 ASR1融合蛋白的大量制备、回收、纯化以及多克隆抗体的制备 | 第65页 |
| 4.2.4 ASR1的Western杂交 | 第65-66页 |
| 4.2.5 ASR1:GFP融合蛋白表达载体的构建及酶切验证 | 第66页 |
| 4.2.6 GFP对照表达载体的构建及酶切验证 | 第66-67页 |
| 4.2.7 ASR1:GFP融合蛋白质的亚细胞定位 | 第67-68页 |
| 4.3 讨论 | 第68-69页 |
| 5 激发标签突变体dai1抗逆表型的初步分析以及DAI1候选基因的初步定位 | 第69-79页 |
| 5.1 材料与方法 | 第69-72页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第69页 |
| 5.1.2 dai1抗逆表型的初步分析 | 第69-70页 |
| 5.1.3 dai1的Southern blotting杂交实验 | 第70页 |
| 5.1.4 通过TAIL-PCR扩增T-DNA插入的基因组旁邻序列 | 第70-72页 |
| 5.1.4.1 TAIL-PCR的基本原理 | 第70页 |
| 5.1.4.2 引物和反应条件 | 第70-72页 |
| 5.1.5 DAI1候选基因的初步定位 | 第72页 |
| 5.2 结果与分析 | 第72-78页 |
| 5.2.1 dai1突变体的获得 | 第72-73页 |
| 5.2.2 dai1突变体抗逆表型的初步分析 | 第73-75页 |
| 5.2.2.1 干旱胁迫实验 | 第73页 |
| 5.2.2.2 高盐胁迫实验 | 第73页 |
| 5.2.2.3 ABA反应实验 | 第73-75页 |
| 5.2.3 dai1的Southern杂交实验 | 第75页 |
| 5.2.4 TAIL-PCR扩增dai1的T-DNA旁邻序列 | 第75-77页 |
| 5.2.5 DAI1候选基因的初步定位 | 第77-78页 |
| 5.3 讨论 | 第78-79页 |
| 结论 | 第79-81页 |
| 参考文献 | 第81-92页 |
