中文摘要 | 第4-6页 |
Abstract | 第6-8页 |
第一部分 文献综述 | 第14-35页 |
第一章 耐盐和嗜盐微生物研究进展 | 第14-28页 |
1.1 已发现的耐盐和嗜盐微生物 | 第14-18页 |
1.1.1 嗜盐古菌 | 第14-15页 |
1.1.2 嗜盐(耐盐)细菌 | 第15-16页 |
1.1.3 嗜盐(耐盐)真菌 | 第16-18页 |
1.2 嗜盐(耐盐)微生物的适应机制 | 第18-24页 |
1.2.1 离子平衡 | 第18-21页 |
1.2.2 相容性溶质策略 | 第21-22页 |
1.2.3 质膜流动性 | 第22-23页 |
1.2.4 对高盐胁迫的响应及相关基因的表达 | 第23-24页 |
1.3 嗜盐(耐盐)微生物的应用 | 第24-25页 |
1.4 在抗逆基因工程方面的应用 | 第25-28页 |
第二章 水通道蛋白研究进展 | 第28-35页 |
2.1 水通道蛋白的种类和进化 | 第28-30页 |
2.2 水通道蛋白的结构 | 第30-32页 |
2.3 水通道蛋白的生理功能 | 第32-34页 |
2.4 本研究的目的及意义 | 第34-35页 |
第二部分 研究内容 | 第35-132页 |
第一章 嗜盐曲霉 cDNA 文库的构建及抗逆相关基因的筛选 | 第35-71页 |
1.1 材料与试剂 | 第35-38页 |
1.1.1 实验菌株及载体 | 第35页 |
1.1.2 主要培养基 | 第35页 |
1.1.3 主要试剂 | 第35-36页 |
1.1.4 主要仪器 | 第36-37页 |
1.1.5 主要试剂的配制 | 第37-38页 |
1.2 实验方法 | 第38-51页 |
1.2.1 嗜盐菌株的主要生物学特征分析 | 第38-40页 |
1.2.2 嗜盐曲霉 cDNA 文库的构建 | 第40-48页 |
1.2.3 抗逆相关基因的筛选 | 第48-51页 |
1.3 结果与分析 | 第51-68页 |
1.3.1 嗜盐曲霉菌株 CCHA 的主要生物学特征 | 第51-58页 |
1.3.2 嗜盐曲霉 cDNA 文库的构建 | 第58-62页 |
1.3.3 耐盐酵母转化子的筛选 | 第62页 |
1.3.4 抗逆相关基因的克隆 | 第62-63页 |
1.3.5 嗜盐曲霉 AgGlpF 基因的生物信息学分析 | 第63-68页 |
1.4 讨论 | 第68-71页 |
第二章 嗜盐曲霉 AgGlpF 基因在酵母中抗逆功能分析 | 第71-84页 |
2.1 材料与试剂 | 第71-72页 |
2.1.1 菌株及载体 | 第71页 |
2.1.2 主要试剂 | 第71页 |
2.1.3 主要仪器设备 | 第71-72页 |
2.1.4 试剂配制 | 第72页 |
2.2 实验方法 | 第72-78页 |
2.2.1 酵母表达载体 pYES2-AgGlpF 的构建 | 第72-75页 |
2.2.2 大肠杆菌 DH5α超级热激感受态的制备 | 第75-76页 |
2.2.3 热激法转化大肠杆菌 DH5α感受态细胞 | 第76页 |
2.2.4 重组表达载体 pYES2-AgGlpF 的提取 | 第76页 |
2.2.5 酵母感受态细胞的制备及转化 | 第76页 |
2.2.6 酵母转化子的诱导培养 | 第76-77页 |
2.2.7 酵母转化子的不同逆境胁迫处理 | 第77-78页 |
2.3 结果与分析 | 第78-83页 |
2.3.1 酵母表达载体 pYES2-AgGlpF 的构建 | 第78-79页 |
2.3.2 重组表达载体 pYES2-AgGlpF 转化酵母菌株 INVSc1 | 第79-80页 |
2.3.3 不同逆境胁迫下酵母转化子的抗性分析 | 第80-83页 |
2.4 讨论 | 第83-84页 |
第三章 AgGlpF 基因在脉胞菌中抗盐功能验证及调控机制的初步研究 | 第84-102页 |
3.1 材料与试剂 | 第84-86页 |
3.1.1 菌株及载体 | 第84页 |
3.1.2 主要试剂 | 第84-85页 |
3.1.3 主要仪器设备 | 第85页 |
3.1.4 主要试剂配制 | 第85-86页 |
3.2 实验方法 | 第86-93页 |
3.2.1 转化脉胞菌表达载体的构建 | 第86-88页 |
3.2.2 重组载体转化粗糙脉胞菌 | 第88-89页 |
3.2.3 嗜盐曲霉 AgGlpF 基因在脉胞菌中抗盐功能分析 | 第89页 |
3.2.4 盐胁迫下不同脉胞菌菌株胞内甘油含量的测定 | 第89-90页 |
3.2.5 盐胁迫下甘油代谢相关基因的表达模式分析 | 第90-93页 |
3.3 结果与分析 | 第93-99页 |
3.3.1 转化粗糙脉胞菌表达载体的构建 | 第93-95页 |
3.3.2 重组表达载体转化粗糙脉胞菌 | 第95页 |
3.3.3 嗜盐曲霉 AgGlpF 基因在脉胞菌中抗盐功能分析 | 第95-96页 |
3.3.4 嗜盐曲霉 AgGlpF 基因中 NPA motifs 的功能验证 | 第96-97页 |
3.3.5 盐胁迫下不同脉胞菌菌株胞内甘油含量的测定 | 第97-98页 |
3.3.6 盐胁迫下甘油代谢相关基因的表达模式分析 | 第98-99页 |
3.4 讨论 | 第99-102页 |
第四章 AgGlpF 基因在提高植物抗逆性中的应用研究 | 第102-123页 |
4.1 材料与试剂 | 第102-104页 |
4.1.1 实验所用植物材料 | 第102页 |
4.1.2 菌株及载体 | 第102页 |
4.1.3 主要试剂 | 第102-103页 |
4.1.4 主要仪器设备 | 第103页 |
4.1.5 主要试剂配制 | 第103-104页 |
4.2 实验方法 | 第104-111页 |
4.2.1 植物表达载体的构建 | 第104-106页 |
4.2.2 农杆菌热激感受态细胞的制备 | 第106-107页 |
4.2.3 冻融法转化农杆菌感受态细胞 | 第107页 |
4.2.4 AgGlpF 基因在植物细胞中的亚细胞定位分析 | 第107-108页 |
4.2.5 花序浸蘸法转化拟南芥 | 第108页 |
4.2.6 转基因拟南芥株系的筛选及 PCR 鉴定 | 第108-109页 |
4.2.7 转基因拟南芥植株的抗性分析 | 第109-110页 |
4.2.8 干旱胁迫下转基因植株胞内甘油含量测定 | 第110页 |
4.2.9 转基因植株叶片失水率的测定 | 第110-111页 |
4.3 结果与分析 | 第111-121页 |
4.3.1 植物表达载体 pGFPGUSPlus-AgGlpF 的构建及转化农杆菌 EHA105 | 第111-112页 |
4.3.2 AgGlpF 基因在植物细胞中的亚细胞定位分析 | 第112页 |
4.3.3 AgGlpF 转基因拟南芥植株的筛选及鉴定 | 第112-114页 |
4.3.4 高渗胁迫下拟南芥植株早期生长发育分析 | 第114-117页 |
4.3.5 高渗胁迫下成熟转基因拟南芥植株的抗性分析 | 第117-119页 |
4.3.6 干旱胁迫下转基因植株胞内甘油含量测定 | 第119-120页 |
4.3.7 转基因植株叶片失水率的测定 | 第120-121页 |
4.4 讨论 | 第121-123页 |
第五章 嗜盐曲霉 AgRPL44 的应用研究 | 第123-132页 |
5.1 试剂与材料 | 第123-124页 |
5.1.1 主要材料 | 第123页 |
5.1.2 主要试剂与耗材 | 第123页 |
5.1.3 主要仪器设备 | 第123-124页 |
5.1.4 主要试剂配制 | 第124页 |
5.2 实验方法 | 第124-127页 |
5.2.1 AgRPL44 稻瘟菌转化子的验证 | 第124-125页 |
5.2.2 AgRPL44 稻瘟菌转化子的高渗胁迫处理 | 第125-126页 |
5.2.3 转 AgRPL44 基因烟草植株的验证 | 第126-127页 |
5.2.4 盐胁迫下转基因烟草幼苗的抗性分析 | 第127页 |
5.3 结果与分析 | 第127-130页 |
5.3.1 AgRPL44 在稻瘟菌遗传转化中的应用研究 | 第127-129页 |
5.3.2 AgRPL44 在提高植物抗盐性中的应用研究 | 第129-130页 |
5.4 讨论 | 第130-132页 |
结论 | 第132-134页 |
参考文献 | 第134-154页 |
作者简介及在学期间所取得的科研成果 | 第154-156页 |
致谢 | 第156页 |