| 摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 英文缩略词表 | 第14-15页 |
| 第1章 绪论 | 第15-35页 |
| 1.1 microRNAs(miRNAs) | 第15-20页 |
| 1.1.1 miRNAs的生物合成 | 第15-16页 |
| 1.1.2 miRNAs在胃癌中的生物学功能 | 第16-20页 |
| 1.2 缺氧诱导因子 1（HIF-1） | 第20-27页 |
| 1.2.1 HIF-1 蛋白成员 | 第20-21页 |
| 1.2.2 HIF-1 的转录后调控 | 第21-25页 |
| 1.2.3 HIF-1 的生物学功能 | 第25-27页 |
| 1.3 TGF-β 信号通路对miRNAs的调控 | 第27-31页 |
| 1.3.1 TGF-β 家族 | 第27-28页 |
| 1.3.2 Smads介导的miRNAs表达调控 | 第28-30页 |
| 1.3.3 Smads介导的miRNAs转录后调控 | 第30页 |
| 1.3.4 miRNAs对Smads蛋白的调控 | 第30-31页 |
| 1.4 缺氧对miRNAs表达的调控 | 第31-33页 |
| 1.4.1 miRNAs在细胞适应缺氧中的作用 | 第32页 |
| 1.4.2 HIF依赖性调控 | 第32-33页 |
| 1.4.3 HIF非依赖性调控 | 第33页 |
| 1.5 课题设计思路 | 第33-35页 |
| 第2章 TGF-β1 调控miR5743p表达的分子机制研究 | 第35-57页 |
| 2.1 实验材料 | 第35-40页 |
| 2.1.1 细胞株 | 第35页 |
| 2.1.2 载体、引物和寡核苷酸合成 | 第35-36页 |
| 2.1.3 试剂 | 第36-37页 |
| 2.1.4 溶液配制 | 第37-39页 |
| 2.1.5 仪器 | 第39-40页 |
| 2.2 实验方法 | 第40-47页 |
| 2.2.1 细胞总RNA的提取 | 第40页 |
| 2.2.2 RT-PCR和qRT-PCR | 第40-42页 |
| 2.2.3 Western Blot分析 | 第42-44页 |
| 2.2.4 染色质免疫沉淀（Ch IP）实验 | 第44-46页 |
| 2.2.5 双荧光素酶报告实验 | 第46-47页 |
| 2.2.6 MTT实验 | 第47页 |
| 2.2.7 统计学处理 | 第47页 |
| 2.3 实验结果 | 第47-54页 |
| 2.3.1 TGF-β1 上调AGS细胞中miR5743p表达 | 第47-48页 |
| 2.3.2 SB431542阻断TGF-β1 对miR5743p表达的上调作用 | 第48-49页 |
| 2.3.3 Smad4参与TGF-β1 诱导miR5743p的表达 | 第49-50页 |
| 2.3.4 miR-574 启动子分析与预测 | 第50-51页 |
| 2.3.5 Smad4参与TGF-β1 引起的基因转录 | 第51-52页 |
| 2.3.6 TGF-β1 引起Smad4与miR-574 启动子序列直接结合 | 第52-53页 |
| 2.3.7 miR5743p参与TGF-β1 诱导的AGS细胞增殖抑制 | 第53-54页 |
| 2.4 讨论 | 第54-57页 |
| 第3章 miR-574 和HIF-1α 正反馈调控的研究 | 第57-81页 |
| 3.1 实验材料 | 第57-59页 |
| 3.1.1 细胞株 | 第57页 |
| 3.1.2 载体、引物和寡核苷酸合成 | 第57-58页 |
| 3.1.3 试剂 | 第58页 |
| 3.1.4 溶液配制 | 第58-59页 |
| 3.1.5 仪器 | 第59页 |
| 3.2 实验方法 | 第59-64页 |
| 3.2.1 细胞总RNA的提取，RT-PCR和q RT-PCR | 第59页 |
| 3.2.2 Western Blot分析 | 第59页 |
| 3.2.3 细胞免疫荧光 | 第59-60页 |
| 3.2.4 染色质免疫沉淀（Ch IP）实验 | 第60页 |
| 3.2.5 双荧光素酶报告实验 | 第60-61页 |
| 3.2.6 免疫共沉淀 | 第61-62页 |
| 3.2.7 载体构建 | 第62-63页 |
| 3.2.8 SGC-7901 稳转细胞株筛选 | 第63页 |
| 3.2.9 统计学处理 | 第63-64页 |
| 3.3 实验结果 | 第64-77页 |
| 3.3.1 缺氧引起的HIF-1α 蛋白增加诱导miR-574 表达 | 第64-69页 |
| 3.3.2 过表达miR-574 上调细胞中HIF-1α 蛋白水平 | 第69-71页 |
| 3.3.3 CUL2是miR5743p直接作用的靶基因 | 第71-73页 |
| 3.3.4 过表达miR-574 抑制E3-泛素连接酶复合体的形成 | 第73-74页 |
| 3.3.5 过表达miR-574 对HIF复合物表达和分布影响 | 第74-75页 |
| 3.3.6 HIF-1α 和mi R-574 正反馈调控研究 | 第75-77页 |
| 3.4 讨论 | 第77-81页 |
| 第4章 miR-574 调控血管生成的研究 | 第81-97页 |
| 4.1 实验材料 | 第81-82页 |
| 4.1.1 细胞株 | 第81页 |
| 4.1.2 引物和寡核苷酸合成 | 第81页 |
| 4.1.3 试剂 | 第81-82页 |
| 4.1.4 溶液配制 | 第82页 |
| 4.1.5 仪器 | 第82页 |
| 4.2 实验方法 | 第82-84页 |
| 4.2.1 细胞总RNA的提取，RT-PCR和q RT-PCR | 第82页 |
| 4.2.2 Western Blot分析 | 第82页 |
| 4.2.3 Transwell实验 | 第82-83页 |
| 4.2.4 小管形成实验 | 第83页 |
| 4.2.5 MTT实验 | 第83-84页 |
| 4.2.6 ELISA实验 | 第84页 |
| 4.2.7 统计学处理 | 第84页 |
| 4.3 实验结果 | 第84-93页 |
| 4.3.1 miR-574 对血管生成的影响 | 第84-87页 |
| 4.3.2 miR5743p对血管生成的影响 | 第87-90页 |
| 4.3.3 miR5745p对血管生成的影响 | 第90-92页 |
| 4.3.4 miR5745p通过激活MAPK参与血管生成 | 第92-93页 |
| 4.4 讨论 | 第93-97页 |
| 第5章 结论 | 第97-99页 |
| 参考文献 | 第99-115页 |
| 作者简介及在学期间取得的研究成果 | 第115-117页 |
| 致谢 | 第117页 |
