| 摘要 | 第8-9页 |
| 英文摘要 | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第11-18页 |
| 1.1 奶牛乳腺上皮细胞中乳蛋白和乳脂肪的合成机理及调控 | 第11-14页 |
| 1.1.1 奶牛乳腺发育与泌乳 | 第11页 |
| 1.1.2 乳蛋白和乳脂肪的合成代谢 | 第11-12页 |
| 1.1.3 奶牛乳蛋白和乳脂肪合成主要信号转导途径研究 | 第12-14页 |
| 1.2 METTL3的研究进展 | 第14-16页 |
| 1.2.1 METTL3的基因分子结构 | 第14-15页 |
| 1.2.2 METTL3的基因功能 | 第15页 |
| 1.2.3 METTL3的调控机理 | 第15-16页 |
| 1.3 氨酰tRNA合成酶的相关研究 | 第16-17页 |
| 1.3.1 氨酰tRNA合成酶的结构与功能 | 第16页 |
| 1.3.2 氨酰tRNA合成酶的非经典功能 | 第16页 |
| 1.3.3 甘氨酰tRNA合成酶的非经典功能 | 第16-17页 |
| 1.4 实验目的与意义 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-23页 |
| 2.1.1 主要实验试剂 | 第18-19页 |
| 2.1.2 主要实验仪器 | 第19-20页 |
| 2.1.3 实验动物细胞与载体 | 第20页 |
| 2.1.4 试剂的配制 | 第20-23页 |
| 2.2 奶牛乳腺上皮细胞的培养纯化与鉴定 | 第23-26页 |
| 2.2.1 奶牛乳腺上皮细胞的原代培养与纯化 | 第23-24页 |
| 2.2.2 奶牛乳腺上皮细胞的鉴定 | 第24-26页 |
| 2.2.3 奶牛乳腺上皮细胞的冻存与复苏 | 第26页 |
| 2.3 奶牛乳腺上皮细胞泌乳模型的建立 | 第26-32页 |
| 2.3.1 过表达METTL3的奶牛乳腺上皮细胞泌乳模型的建立 | 第26-30页 |
| 2.3.2 添加蛋氨酸、雌激素的奶牛乳腺上皮细胞泌乳模型的建立 | 第30页 |
| 2.3.3 抑制METTL3的奶牛乳腺上皮细胞泌乳模型的建立 | 第30-31页 |
| 2.3.4 抑制GlyRS的奶牛乳腺上皮细胞泌乳模型的建立 | 第31页 |
| 2.3.5 过表达GlyRS抑制METTL3的奶牛乳腺上皮细胞泌乳模型的建立 | 第31-32页 |
| 2.4 IF检测不同泌乳模型中METTL3蛋白的表达与定位 | 第32页 |
| 2.5 Western blotting检测不同泌乳模型中乳蛋白与乳脂合成相关信号分子的表达 | 第32页 |
| 2.6 免疫共沉淀分析METTL3与GlyRS的相互作用 | 第32-33页 |
| 2.6.1 胞浆蛋白与胞核蛋白的提取 | 第32-33页 |
| 2.6.2 Co-IP分析METTL3与GlyRS的相互作用 | 第33页 |
| 2.7 数据分析 | 第33-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-48页 |
| 3.1 奶牛乳腺上皮细胞的培养与鉴定 | 第34-36页 |
| 3.1.1 奶牛乳腺上皮细胞的原代培养与纯化 | 第34-35页 |
| 3.1.2 奶牛乳腺上皮细胞的鉴定 | 第35-36页 |
| 3.2 过表达METL3后乳蛋白和乳脂合成相关信号分子表达变化与METTL3的定位变化 | 第36-39页 |
| 3.2.1 METTL3过表达载体的构建 | 第36-38页 |
| 3.2.2 真核表达载体pGCMV-IRES-EGFP-METTL3的瞬时转染 | 第38页 |
| 3.2.3 IF检测过表达METL3后METTL3的表达与定位 | 第38-39页 |
| 3.2.4 Western blotting检测过表达METL3乳蛋白和乳脂肪合成相关信号分子的表达 | 第39页 |
| 3.3 添加蛋氨酸、雌激素后乳蛋白和乳脂合成相关信号分子的表达变化与METTL3的定位变化 | 第39-42页 |
| 3.3.1 添加蛋氨酸、雌激素的奶牛乳腺上皮细胞泌乳模型的建立 | 第39-40页 |
| 3.3.2 IF检测添加蛋氨酸、雌激素后METTL3的表达与定位 | 第40-41页 |
| 3.3.3 Western blotting检测添加蛋氨酸、雌激素后乳蛋白和乳脂肪合成相关信号分子的表达 | 第41-42页 |
| 3.4 METTL3抑制对乳蛋白和乳脂合成相关信号分子表达与METTL3定位的影响 | 第42-44页 |
| 3.4.1 METTL3干扰片段的筛选 | 第42页 |
| 3.4.2 IF检测METL3抑制后METTL3的表达与定位 | 第42-43页 |
| 3.4.3 Western blotting检测METL3抑制后乳蛋白和乳脂肪合成相关信号分子的表达 | 第43-44页 |
| 3.5 Co-IP分析METTL3与GlyRS的相互作用 | 第44-45页 |
| 3.6 GlyRS抑制对乳蛋白和乳脂合成相关信号分子表达的影响 | 第45页 |
| 3.7 过表达GlyRS抑制METTL3后对乳蛋白和乳脂合成相关信号分子表达的影响 | 第45-48页 |
| 3.7.1 GlyRS过表达载体的构建 | 第45-47页 |
| 3.7.2 Western blotting检测过表达GlyRS抑制METTL3后对乳蛋白和乳脂合成相关信号分子表达的影响 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-52页 |
| 4.1 奶牛乳腺上皮细胞的培养与鉴定以及加蛋氨酸、雌激素泌乳模型的建立 | 第48-49页 |
| 4.2 METTL3对乳蛋白、乳脂肪合成的调节机理 | 第49页 |
| 4.3 蛋氨酸、雌激素对METTL3的亚细胞定位 | 第49-50页 |
| 4.4 GlyRS介导蛋氨酸、雌激素对METTL3的影响 | 第50-52页 |
| 5 结论 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-63页 |
| 附录 | 第63-64页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第64页 |
