| 摘要 | 第5-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 英文缩略表 | 第12-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-19页 |
| 1.1 病原学 | 第13-14页 |
| 1.2 BEFV的流行病学 | 第14-16页 |
| 1.2.1 宿主 | 第14页 |
| 1.2.2 传播途径 | 第14页 |
| 1.2.3 地理分布 | 第14-16页 |
| 1.3 BEFV的临床症状 | 第16页 |
| 1.4 BEFV的诊断方法 | 第16页 |
| 1.4.1 血清学诊断 | 第16页 |
| 1.4.2 分子生物学检测 | 第16页 |
| 1.5 BEFV疫苗研究进展 | 第16-17页 |
| 1.6 研究背景、目的和意义 | 第17-19页 |
| 第二章 BEFV G蛋白的原核表达与多克隆抗体的制备 | 第19-29页 |
| 2.1 材料 | 第19-20页 |
| 2.1.1 实验毒株及实验动物 | 第19页 |
| 2.1.2 试剂 | 第19页 |
| 2.1.3 仪器设备 | 第19-20页 |
| 2.2 方法 | 第20-25页 |
| 2.2.1 目的基因的RT-PCR扩增 | 第20-21页 |
| 2.2.2 目的片段胶回收 | 第21页 |
| 2.2.3 目的片段的连接、转化和测序 | 第21-22页 |
| 2.2.4 原核表达载体的构建 | 第22-24页 |
| 2.2.5 重组质粒的的原核表达 | 第24页 |
| 2.2.6 重组蛋白的纯化 | 第24页 |
| 2.2.7 BEFV G蛋白的鉴定 | 第24-25页 |
| 2.2.8 兔源多克隆抗体的制备和鉴定 | 第25页 |
| 2.3 结果 | 第25-28页 |
| 2.3.1 BEFV G基因的克隆和序列测定 | 第25-26页 |
| 2.3.2 原核表达载体的构建 | 第26页 |
| 2.3.3 重组蛋白的表达及纯化 | 第26-27页 |
| 2.3.4 重组蛋白的免疫原性分析 | 第27页 |
| 2.3.5 兔源多克隆抗体的制备和鉴定 | 第27-28页 |
| 2.4 讨论 | 第28-29页 |
| 第三章 BEFV抗原捕获ELISA诊断方法的建立 | 第29-34页 |
| 3.1 实验材料 | 第29页 |
| 3.1.1 病毒和样品 | 第29页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第29页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第29页 |
| 3.2 实验方法 | 第29-30页 |
| 3.2.1 捕获抗体与单抗最佳结合浓度的选择 | 第29-30页 |
| 3.2.2 酶标抗体工作浓度的确定 | 第30页 |
| 3.2.3 封闭液的选择 | 第30页 |
| 3.2.4 底物显色时间的确定 | 第30页 |
| 3.2.5 交叉试验 | 第30页 |
| 3.3 结果 | 第30-33页 |
| 3.3.1 捕获抗体与单抗最佳结合浓度的选择 | 第30-31页 |
| 3.3.2 酶标抗体工作浓度的确定 | 第31-32页 |
| 3.3.3 封闭液的选择 | 第32页 |
| 3.3.4 底物显色时间的确定 | 第32-33页 |
| 3.3.5 交叉试验 | 第33页 |
| 3.4 讨论 | 第33-34页 |
| 第四章 天祝白牦牛牛流行热的调查 | 第34-39页 |
| 4.1 实验材料 | 第34页 |
| 4.1.1 样品 | 第34页 |
| 4.1.2 试剂 | 第34页 |
| 4.2 方法 | 第34-37页 |
| 4.2.1 引物设计与合成 | 第34-35页 |
| 4.2.2 BEFV抗体检测 | 第35页 |
| 4.2.3 BEFV抗原捕获ELISA检测 | 第35页 |
| 4.2.4 BEFV实时荧光定量RT-PCR检测 | 第35页 |
| 4.2.5 BEFV G基因 3’片段的扩增及进化分析 | 第35-37页 |
| 4.3 结果 | 第37-38页 |
| 4.3.1 检测结果 | 第37页 |
| 4.3.2 BEFV G基因的扩增及进化分析 | 第37-38页 |
| 4.4 讨论 | 第38-39页 |
| 第五章 BEFV病毒的分离及全基因组的测定 | 第39-44页 |
| 5.1 实验材料 | 第39页 |
| 5.1.1 细胞与毒株 | 第39页 |
| 5.1.2 实验动物 | 第39页 |
| 5.1.3 实验试剂 | 第39页 |
| 5.2 实验方法 | 第39-41页 |
| 5.2.1 实验感染模型的建立 | 第39页 |
| 5.2.2 RT-PCR测病毒血症 | 第39页 |
| 5.2.3 病毒的分离 | 第39-40页 |
| 5.2.4 RT-PCR方法鉴定分离毒株 | 第40页 |
| 5.2.5 抗原捕获ELISA检测 | 第40页 |
| 5.2.6 BEFV JT02L毒株全基因组测序 | 第40-41页 |
| 5.3 实验结果 | 第41-43页 |
| 5.3.1 临床症状 | 第41-42页 |
| 5.3.2 RT-PCR检测病毒血症病毒检测 | 第42页 |
| 5.3.3 病毒的分离及鉴定 | 第42页 |
| 5.3.4 抗原捕获ELISA诊断BEFV | 第42-43页 |
| 5.3.5 BEFV JT02L毒株全基因组测序 | 第43页 |
| 5.4 讨论 | 第43-44页 |
| 第六章 全文结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-50页 |
| 附录 | 第50-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 作者简历 | 第57页 |