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绿僵菌Mamrd1基因的克隆与功能分析

中文摘要第1-4页
ABSTRACT第4-9页
缩略词第9-10页
1 绪论第10-18页
   ·引言第10-11页
   ·研究背景及进展第11-15页
     ·致病机制研究第11-12页
     ·致病基因研究进展第12-14页
     ·Mrd1 基因研究进展第14页
     ·RNA 干扰技术应用第14-15页
   ·研究目的第15页
   ·研究内容及技术路线第15-17页
     ·研究内容第15-16页
     ·技术路线第16-17页
   ·本研究创新之处第17-18页
2 材料与方法第18-32页
   ·材料第18-20页
     ·供试菌株和昆虫第18页
     ·主要仪器设备第18页
     ·主要试剂第18-19页
     ·主要溶液配制第19-20页
   ·获取MAMRD1 基因CDNA 全长及生物信息学分析第20-22页
     ·引物设计第20-21页
     ·Blast 在线比对第21-22页
     ·一级结构分析第22页
     ·二级结构分析第22页
     ·进化树同源性分析第22页
   ·构建干扰菌株第22-26页
     ·EST 序列的获取第22-23页
     ·酶切干扰载体(PDPB)第23页
     ·重组载体构建第23-24页
     ·转化大肠杆菌第24页
     ·转化绿僵菌第24-25页
     ·筛选稳定的转化子及检测第25-26页
   ·体外干扰效率检测第26-28页
   ·分子功能验证第28-29页
   ·生长特征分析第29-30页
     ·菌落形态及菌丝分支模式第29页
     ·体外生物量的测定第29页
     ·产孢量第29-30页
     ·孢子萌发率第30页
   ·毒力分析第30-32页
     ·生物测定第30页
     ·体内菌丝观察第30页
     ·体内菌丝生物量测定第30页
     ·Mamrd1 基因表达量及体内干扰效率的检测第30-32页
3 结果与分析第32-46页
   ·CDNA 的获取及生物信息学分析第32-35页
     ·Blast 在线比对cDNA第32-33页
     ·一级结构分析第33页
     ·二级结构分析第33-34页
     ·进化树同源分析第34-35页
   ·干扰菌株阳性克隆的筛选及验证第35-37页
     ·EST 序列的获取及载体的双酶切第35-36页
     ·转化子的检测第36-37页
   ·体外干扰效率检测第37-39页
   ·分子功能验证第39-40页
   ·生长特性分析第40-43页
     ·菌落及菌丝形态第40-41页
     ·体外生物量测定第41页
     ·产孢率第41页
     ·孢子萌发率第41-43页
   ·毒力分析第43-46页
     ·生物测定第44页
     ·体内菌丝观测第44页
     ·体内菌丝生物量测定第44-45页
     ·Mamrd1 表达量及体内干扰效率检测第45-46页
4 讨论第46-51页
   ·RNAI 技术采用第46页
   ·干扰效率的影响因素第46-47页
   ·菌丝分支统计研究第47-48页
   ·MAMRD1 影响生长和产孢的机制第48页
   ·MAMRD1 影响致病的机制第48-49页
   ·MRD1 基因的潜在价值第49-51页
致谢第51-52页
参考文献第52-57页
附录 作者在攻读学位期间发表的论文目录第57页

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