| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-13页 |
| 1 引言 | 第13-40页 |
| ·禽白血病简介 | 第13-14页 |
| ·ALV-J 病原学 | 第14-17页 |
| ·ALV-J 病毒结构特征 | 第14-16页 |
| ·实验室宿主系统 | 第16-17页 |
| ·ALV-J 的病理学及诊断技术 | 第17-26页 |
| ·病理学 | 第17-22页 |
| ·诊断技术 | 第22-24页 |
| ·ALV的流行病学 | 第24-26页 |
| ·ALV 的免疫抑制 | 第26-28页 |
| ·免疫抑制的主要机理 | 第27页 |
| ·免疫抑制的临床症状 | 第27页 |
| ·免疫抑制的危害 | 第27-28页 |
| ·ALV-J 在我国的流行现状及造成的危害 | 第28-29页 |
| ·ALV-J 的防治 | 第29-30页 |
| ·免疫接种 | 第29页 |
| ·防治措施 | 第29-30页 |
| ·培育 ALV 抗性鸡 | 第30页 |
| ·RNAi 的研究进展 | 第30-38页 |
| ·RNAi 的发现 | 第30-31页 |
| ·RNAi 的分子机制 | 第31-33页 |
| ·RNAi 的制备 | 第33-34页 |
| ·siRNA与miRNA | 第34-37页 |
| ·RNAi技术的应用 | 第37-38页 |
| ·研究目的及意义 | 第38-40页 |
| 2 Real-time PCR 检测禽白血病病毒的研究 | 第40-60页 |
| ·实验材料 | 第40-41页 |
| ·毒株 | 第40页 |
| ·主要试剂 | 第40页 |
| ·主要仪器设备 | 第40-41页 |
| ·主要溶液及其配制 | 第41页 |
| ·实验方法 | 第41-47页 |
| ·ALV pol 基因及 ALV-J 特异性的 PCR 扩增 | 第41-43页 |
| ·荧光定量 PCR 标准品质粒的制备 | 第43-45页 |
| ·荧光定量PCR 扩增 | 第45-46页 |
| ·荧光定量 PCR 的特异性试验 | 第46页 |
| ·荧光定量 PCR 的敏感性试验 | 第46页 |
| ·荧光定量 PCR 的重复性试验 | 第46页 |
| ·用建立的 Real-time PCR 方法对临床实际样本的检测 | 第46-47页 |
| ·结果 | 第47-58页 |
| ·ALV pol 基因片段与ALV-J 特异性的PCR 扩增结果 | 第47-48页 |
| ·标准品质粒的鉴定结果 | 第48页 |
| ·标准品质粒的 Real-timePCR 扩增及标准曲线的建立 | 第48-50页 |
| ·敏感性试验 | 第50-52页 |
| ·特异性试验 | 第52-53页 |
| ·重复性试验 | 第53-54页 |
| ·临床实际样本检测 | 第54-58页 |
| ·讨论 | 第58-59页 |
| ·结论 | 第59-60页 |
| 3 载体表达miRNA抑制J亚群禽白血病病毒复制 | 第60-85页 |
| ·实验材料 | 第60-63页 |
| ·病毒与细胞 | 第60页 |
| ·试剂 | 第60-61页 |
| ·主要仪器设备 | 第61页 |
| ·主要溶液及其配制 | 第61-63页 |
| ·实验方法 | 第63-70页 |
| ·miRNA 设计与真核表达载体的构建 | 第63-65页 |
| ·间接免疫荧光法对 ALV-J 病毒滴度的测定 | 第65页 |
| ·重组质粒的转染 | 第65-66页 |
| ·禽白血病病毒接种 | 第66页 |
| ·间接免疫荧光法检测 ALV 活病毒囊膜蛋白的表达水平 | 第66页 |
| ·Western blot 检测重组质粒转染 DF-1 细胞后病毒囊膜蛋白表达水平 | 第66-67页 |
| ·Real-time PCR 检测gag，pol，env 基因片段mRNA 表达水平 | 第67-70页 |
| ·统计学处理 | 第70页 |
| ·结果 | 第70-82页 |
| ·靶向gag, pol,env 基因的miRNA 设计结果 | 第70-72页 |
| ·重组质粒的鉴定结果 | 第72-73页 |
| ·间接免疫荧光对病毒滴度检测结果 | 第73-74页 |
| ·间接免疫荧光对ALV 活病毒囊膜蛋白表达水平的检测结果 | 第74-76页 |
| ·Western-blot检测ALV-J囊膜糖蛋白的结果 | 第76-77页 |
| ·Real-time PCR对ALV-J gag，pole，nv基因mRNA的定量检测结果 | 第77-82页 |
| ·讨论 | 第82-84页 |
| ·结论 | 第84-85页 |
| 4 多靶点串联miRNA 表达载体的构建及其抑制禽白血病病毒复制 | 第85-94页 |
| ·材料与方法 | 第85-86页 |
| ·病毒与细胞 | 第85页 |
| ·试剂 | 第85页 |
| ·引物 | 第85-86页 |
| ·实验内容 | 第86-88页 |
| ·miRNA 串联表达载体的构建与鉴定研究目的及意义 | 第86-87页 |
| ·串联质粒的转染与病毒接种 | 第87页 |
| ·串联质粒对ALV-J 复制抑制作用的检测 | 第87-88页 |
| ·实验结果 | 第88-92页 |
| ·串联质粒的鉴定结果 | 第88-89页 |
| ·串联miRNAs 质粒对 ALV-J 复制抑制作用的检测 | 第89-92页 |
| ·讨论 | 第92-93页 |
| ·结论 | 第93-94页 |
| 全文结论 | 第94-95页 |
| 创新点 | 第95-96页 |
| 致谢 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-106页 |
| 作者简介 | 第106页 |
