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基于伪型病毒的猪瘟中和抗体检测方法的初步建立及猪瘟病毒E2蛋白的细胞定位研究

 摘要第1-5页
Abstract第5-13页
1 引言第13-35页
   ·猪瘟病毒概述第13-14页
   ·猪瘟病毒及其分类第14-15页
   ·猪瘟病毒基因组与编码蛋白第15-17页
   ·猪瘟病毒的结构蛋白第17-21页
   ·猪瘟病毒的非结构蛋白第21-24页
   ·猪瘟病毒的细胞表面受体第24-26页
   ·猪瘟病毒的毒力相关基因第26-27页
   ·猪瘟病毒的繁殖与装配第27-28页
   ·猪瘟病毒诊断技术的研究进展第28-32页
     ·猪瘟抗原诊断技术的研究进展第28-31页
     ·猪瘟抗体诊断技术的研究进展第31-32页
   ·伪型病毒的研究进展第32-34页
     ·伪型病毒国外的研究现状第33-34页
     ·伪型病毒国内的研究现状第34页
   ·本研究的目的与意义第34-35页
2 试验材料、流程与方法第35-51页
   ·试验材料第35-38页
     ·质粒第35页
     ·细胞、病毒与抗体第35-36页
     ·主要试剂、生物学软件第36-37页
     ·主要仪器第37-38页
   ·试验流程图第38-39页
   ·试验方法第39-51页
     ·目的蛋白的分析、表达与鉴定第39-44页
     ·复制缺陷型病毒VSV△G*G 的制备第44-46页
     ·猪瘟伪型病毒VSV△G*CSF 的制备第46-49页
     ·利用猪瘟伪型病毒VSV△G*CSF 进行中和试验第49-50页
     ·利用猪瘟伪型病毒对被感染细胞中E2 蛋白的定位进行研究第50-51页
3 试验结果第51-67页
   ·目的蛋白的分析、改造第51-53页
     ·CSFV 囊膜蛋白的跨膜区预测分析第51-52页
     ·CSFV 囊膜蛋白E2 的亲/疏水性、带电荷情况及其二级结构分析与 3D 模型的建立第52-53页
   ·表达CSFV 全部囊膜蛋白重组表达质粒的获得与鉴定第53-55页
   ·CSFV 囊膜蛋白E2 的部分缺失第55-56页
     ·CSFV 囊膜蛋白E2 部分缺失重组表达质粒的获得与酶切鉴定第55页
     ·重组蛋白的Western blot 分析与间接免疫荧光鉴定第55-56页
   ·复制缺陷型病毒VSV△G*G 制备方法的改良第56-59页
     ·转染质粒的提取、鉴定与浓度测定第56-57页
     ·转染质粒pVSV-G 后G 蛋白的表达第57-58页
     ·传统方法与改良方法制备的复制缺陷型病毒VSV△G*G第58页
     ·利用两种方法制备复制缺陷型病毒VSV△G*G 的滴度比较第58页
     ·存放条件对两种方法制备的复制缺陷型病毒滴度的影响分析第58-59页
   ·利用改良方法进行猪瘟伪型病毒VSV△G*CSF 的制备与毒价测定第59-60页
   ·猪瘟伪型病毒的鉴定第60-63页
     ·间接免疫荧光检测第60-61页
     ·免疫电镜观测第61-62页
     ·激光共聚焦检测第62-63页
   ·利用猪瘟伪型病毒监检中和抗体方法的初步建立第63-66页
     ·待检血清最佳稀释度的确立第63页
     ·利用猪瘟伪型病毒VSV△G*CSF 对10 份现地样品进行中和试验第63-64页
     ·与试剂盒检测10 份样品的结果进行比较第64-65页
     ·特异性试验第65-66页
   ·激光共聚焦检测不同时间CSFV 的囊膜蛋白E2 在被感染细胞中的定位第66-67页
4 讨论第67-72页
   ·猪瘟伪型病毒是一种安全、直观的中和抗体检测工具第67-68页
   ·猪瘟囊膜蛋白E2 的锚定序列含有膜定位信号第68-70页
   ·猪瘟伪型病毒是进行病毒基因传递的载体第70页
   ·重组水疱性病毒系统成为伪型病毒的制备的有效工具第70-71页
   ·改良方法能够提高了伪型病毒制备效率第71页
   ·利用生物学软件分析能够题号试验的可行性第71-72页
5 结论第72页
6 展望第72-73页
致谢第73-74页
参考文献第74-84页
作者简介第84-85页

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