| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-24页 |
| 1.1 解旋酶概述 | 第12-15页 |
| 1.1.1 解旋酶的简介 | 第12-13页 |
| 1.1.2 解旋酶的特性与分类 | 第13-14页 |
| 1.1.3 解旋酶的作用机制 | 第14-15页 |
| 1.2 RecD2解旋酶 | 第15-19页 |
| 1.2.1 RecD2解旋酶的简介 | 第15-17页 |
| 1.2.2 RecD2解旋酶的研究进展 | 第17-19页 |
| 1.3 G-四螺旋DNA概述 | 第19-20页 |
| 1.4 RecD2解旋酶活性研究方法 | 第20-22页 |
| 1.4.1 EMSA法 | 第20-21页 |
| 1.4.2 荧光各项异性值法 | 第21页 |
| 1.4.3 荧光快速停留检测技术 | 第21-22页 |
| 1.4.4 单分子技术 | 第22页 |
| 1.5 本研究的目的与意义 | 第22-24页 |
| 第二章 RecD2解旋酶的原核表达及优化 | 第24-29页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-25页 |
| 2.1.1 质粒、表达菌株、表达载体 | 第24页 |
| 2.1.2 生物试剂 | 第24页 |
| 2.1.3 需要配制的试剂及缓冲液 | 第24页 |
| 2.1.4 主要仪器与设备 | 第24-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-26页 |
| 2.2.1 pET22b-RecD2质粒鉴定 | 第25页 |
| 2.2.2 蛋白表达与培养条件确定 | 第25-26页 |
| 2.3 结果与分析 | 第26-27页 |
| 2.3.1 pET22b-RecD2质粒鉴定结果 | 第26-27页 |
| 2.3.2 RecD2蛋白初步表达结果 | 第27页 |
| 2.4 总结与讨论 | 第27-29页 |
| 第三章 RecD2解旋酶的的纯化 | 第29-36页 |
| 3.1 实验材料 | 第29-30页 |
| 3.1.1 质粒、表达菌株、柱材 | 第29页 |
| 3.1.2 主要配制试剂 | 第29页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第29-30页 |
| 3.2 实验方法 | 第30-31页 |
| 3.2.1 RecD2解旋酶诱导表达 | 第30页 |
| 3.2.2 RecD2解旋酶镍亲和层析 | 第30-31页 |
| 3.2.3 RecD2解旋酶阴离子层析 | 第31页 |
| 3.2.4 RecD2解旋酶浓缩保存及纯度鉴定 | 第31页 |
| 3.3 结果与分析 | 第31-34页 |
| 3.3.1 RecD2解旋酶镍亲和层析结果 | 第31-32页 |
| 3.3.2 RecD2解旋酶阴离子层析结果 | 第32-33页 |
| 3.3.3 RecD2蛋白纯度检测及保存 | 第33-34页 |
| 3.4 总结与讨论 | 第34-36页 |
| 第四章 RecD2解旋酶结合活性分析 | 第36-43页 |
| 4.1 实验材料 | 第36-37页 |
| 4.1.1 材料 | 第36页 |
| 4.1.2 主要缓冲液配制 | 第36页 |
| 4.1.3 DNA底物制备 | 第36-37页 |
| 4.1.4 设备与仪器 | 第37页 |
| 4.2 实验方法 | 第37-39页 |
| 4.2.1 RecD2与单链DNA底物结合时不同盐浓度分析 | 第37-38页 |
| 4.2.2 RecD2与不同DNA底物结合活性分析 | 第38页 |
| 4.2.3 RecD2与不同G4 DNA底物结合活性分析 | 第38-39页 |
| 4.3 结果与分析 | 第39-41页 |
| 4.3.1 RecD2与DNA底物结合时不同盐浓度分析结果 | 第39-40页 |
| 4.3.2 RecD2与不同DNA底物结合活性分析结果 | 第40-41页 |
| 4.3.3 RecD2与不同G4 DNA底物结合活性分析结果 | 第41页 |
| 4.4 总结与讨论 | 第41-43页 |
| 第五章 RecD2解旋酶解旋活性分析 | 第43-54页 |
| 5.1 实验材料 | 第43-45页 |
| 5.1.1 材料 | 第43页 |
| 5.1.2 主要缓冲液配制 | 第43-44页 |
| 5.1.3 DNA底物制备 | 第44-45页 |
| 5.1.4 设备与仪器 | 第45页 |
| 5.2 实验方法 | 第45-47页 |
| 5.2.1 RecD2解旋活性鉴定 | 第45-46页 |
| 5.2.2 RecD2解旋G4 DNA影响因素分析 | 第46-47页 |
| 5.2.3 RecD2解旋不同DNA底物 | 第47页 |
| 5.3 实验结果 | 第47-52页 |
| 5.3.1 RecD2蛋白解旋活性与盐浓度关系分析结果 | 第47-48页 |
| 5.3.2 RecD2蛋白解旋G4 DNA分析结果 | 第48页 |
| 5.3.3 RecD2解旋G4 DNA影响因素分析结果 | 第48-51页 |
| 5.3.4 RecD2解旋不同DNA底物分析结果 | 第51-52页 |
| 5.4 总结与讨论 | 第52-54页 |
| 第六章 总结 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-59页 |
| 缩略词 | 第59-60页 |
| 附录 | 第60-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 作者简介 | 第63页 |
