| 摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-21页 |
| 1.1 苦荞的功效 | 第12页 |
| 1.2 重金属污染现状 | 第12-13页 |
| 1.3 植物修复技术 | 第13页 |
| 1.4 植物络合素 | 第13-16页 |
| 1.4.1 植物络合素研究进展 | 第13页 |
| 1.4.2 植物络合素的结构 | 第13-14页 |
| 1.4.3 植物络合素的合成 | 第14-16页 |
| 1.5 植物络合素合酶 | 第16-18页 |
| 1.5.1 植物络合素合酶的发现和结构 | 第16-17页 |
| 1.5.2 植物络合素合酶的表达调控与转基因研究 | 第17-18页 |
| 1.6 研究目的与意义 | 第18-20页 |
| 实验技术路线 | 第20-21页 |
| 第二章 苦荞FtPCS基因克隆与生物信息学分析 | 第21-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-26页 |
| 2.2.1 引物设计与合成 | 第22页 |
| 2.2.2 苦荞幼苗处理 | 第22页 |
| 2.2.3 RNA提取与cDNA合成 | 第22-23页 |
| 2.2.4 基因组DNA提取 | 第23-24页 |
| 2.2.5 FtPCS基因PCR扩增 | 第24-25页 |
| 2.2.6 目的与克隆载体连接 | 第25页 |
| 2.2.7 连接产物转化 | 第25页 |
| 2.2.8 菌落鉴定 | 第25页 |
| 2.2.9 碱裂解法质粒提取 | 第25-26页 |
| 2.2.10 重组质粒鉴定 | 第26页 |
| 2.2.11 FtPCS基因结构分析 | 第26页 |
| 2.2.12 生物信息学分析 | 第26页 |
| 2.3 结果与分析 | 第26-29页 |
| 2.3.1 FtPCS基因克隆与结构分析 | 第26-28页 |
| 2.3.2 FtPCS基因氨基酸序列分析 | 第28页 |
| 2.3.3 多序列比对和系统发育树分析 | 第28-29页 |
| 2.4 讨论 | 第29-31页 |
| 第三章 苦荞FtPCS基因重组表达及酶活性初步分析 | 第31-42页 |
| 3.1 实验材料 | 第31-32页 |
| 3.1.1 菌种与质粒 | 第31页 |
| 3.1.2 工具酶与试剂 | 第31页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第31页 |
| 3.1.4 主要溶液及配方 | 第31-32页 |
| 3.2 实验方法 | 第32-37页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第32页 |
| 3.2.2 载体构建 | 第32-34页 |
| 3.2.3 重组质粒转化表达菌 | 第34页 |
| 3.2.4 FtPCS蛋白的诱导表达 | 第34页 |
| 3.2.5 FtPCS蛋白可溶性分析 | 第34-35页 |
| 3.2.6 SDS-PAGE电泳 | 第35页 |
| 3.2.7 包涵体洗涤 | 第35-36页 |
| 3.2.8 包涵体复性 | 第36页 |
| 3.2.9 钴离子螯合层析纯化 | 第36页 |
| 3.2.10 反向-HPLC | 第36页 |
| 3.2.11 De Novo质谱分析 | 第36-37页 |
| 3.3 结果与分析 | 第37-40页 |
| 3.3.1 重组表达载体构建 | 第37-38页 |
| 3.3.2 重组蛋白诱导表达及纯化 | 第38-39页 |
| 3.3.3 重组蛋白活性分析 | 第39-40页 |
| 3.3.4 PC化合物结构分析 | 第40页 |
| 3.4 讨论 | 第40-42页 |
| 第四章 苦荞FtPCS基因在酿酒酵母和拟南芥植株中的表达及功能分析 | 第42-54页 |
| 4.1 实验材料 | 第42-43页 |
| 4.1.1 菌种与材料 | 第42页 |
| 4.1.2 工具酶与试剂 | 第42页 |
| 4.1.3 溶液及配方 | 第42-43页 |
| 4.2 实验方法 | 第43-48页 |
| 4.2.1 引物设计 | 第43页 |
| 4.2.2 酵母表达载体构建 | 第43-44页 |
| 4.2.3 阳性克隆鉴定 | 第44页 |
| 4.2.4 重组质粒转化酵母菌株 | 第44-45页 |
| 4.2.5 转基因酵母筛选 | 第45页 |
| 4.2.6 酵母功能互补实验 | 第45-46页 |
| 4.2.7 酵母生长曲线测定 | 第46页 |
| 4.2.8 植物表达载体构建 | 第46-47页 |
| 4.2.9 阳性菌落鉴定 | 第47页 |
| 4.2.10 重组质粒转化农杆菌 | 第47-48页 |
| 4.2.11 蘸花法浸染拟南芥植株 | 第48页 |
| 4.2.12 转基因拟南芥筛选 | 第48页 |
| 4.3 结果与分析 | 第48-51页 |
| 4.3.1 酵母表达载体构建 | 第48页 |
| 4.3.2 重组酵母转化子筛选 | 第48-49页 |
| 4.3.3 重金属敏感型酵母功能恢复 | 第49-50页 |
| 4.3.4 生长曲线测定 | 第50页 |
| 4.3.5 植物表达载体构建 | 第50-51页 |
| 4.3.6 转基因植株筛选 | 第51页 |
| 4.4 讨论 | 第51-54页 |
| 第五章 结论与展望 | 第54-56页 |
| 5.1 结论 | 第54页 |
| 5.2 展望 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| 附录 | 第61-69页 |
| 缩略词 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 作者简介 | 第71页 |