| 摘要 | 第3-7页 |
| abstract | 第7-10页 |
| 引言 | 第15-18页 |
| 第一部分 miR-181a在海洛因成瘾患者血浆中的表达水平与意义 | 第18-32页 |
| 1 研究目的 | 第19页 |
| 2 研究对象的选择及资料的收集 | 第19-20页 |
| 2.1 研究对象的选择 | 第19页 |
| 2.2 资料的收集 | 第19-20页 |
| 3 实验材料与方法 | 第20-23页 |
| 3.1 主要仪器 | 第20页 |
| 3.2 主要试剂耗材 | 第20-21页 |
| 3.3 血样的采集与保存 | 第21页 |
| 3.4 血浆RNA提取及测定 | 第21页 |
| 3.5 RNA逆转录 | 第21-22页 |
| 3.5.1 RNA逆转录体系 | 第22页 |
| 3.5.2 RNA逆转录反应程序 | 第22页 |
| 3.6 RT-PCR检测hsa-miR-181a的表达水平 | 第22-23页 |
| 3.7 统计分析 | 第23页 |
| 4 结果 | 第23-30页 |
| 4.1 健康对照组与海洛因成瘾组人口学特征 | 第23-24页 |
| 4.2 海洛因成瘾组毒品使用情况 | 第24-25页 |
| 4.3 健康对照组与海洛因成瘾组血浆miRNA芯片检测 | 第25-26页 |
| 4.4 健康对照组与海洛因成瘾组hsa-miR-181a表达水平的比较 | 第26-27页 |
| 4.5 年龄、学历、职业与hsa-miR-181a表达水平的相关性分析 | 第27-28页 |
| 4.5.1 健康对照组中hsa-miR-181a的相关性分析 | 第27页 |
| 4.5.2 海洛因成瘾组hsa-miR-181a的相关性分析 | 第27-28页 |
| 4.6 ROC曲线下面积 | 第28-30页 |
| 5 讨论 | 第30-31页 |
| 6 小结（一） | 第31-32页 |
| 第二部分 miR-181a生物学功能研究 | 第32-62页 |
| 1 研究目的 | 第33页 |
| 2 材料与方法 | 第33-44页 |
| 2.1 实验动物 | 第33页 |
| 2.2 实验仪器与试剂 | 第33-36页 |
| 2.2.1 主要药品与试剂 | 第33-34页 |
| 2.2.2 主要实验仪器 | 第34-35页 |
| 2.2.3 试剂配制方法 | 第35-36页 |
| 2.3 主要实验方法 | 第36-43页 |
| 2.3.1 大鼠颈静脉插管及“马甲”的制作 | 第36-37页 |
| 2.3.2 大鼠颈静脉插管手术 | 第37页 |
| 2.3.3 海洛因自身给药大鼠模型建立及条件线索诱导复吸行为测试 | 第37-38页 |
| 2.3.4 大鼠NAc脑区微注射慢病毒载体 | 第38页 |
| 2.3.5 观察慢病毒转染情况 | 第38-39页 |
| 2.3.6 NAc脑区总RNA提取 | 第39页 |
| 2.3.7 总RNA逆转录及RT-PCR实验 | 第39-41页 |
| 2.3.8 NAc脑区组织样本蛋白质提取及免疫印迹（Western blot）实验 | 第41-42页 |
| 2.3.9 双荧光素酶实验 | 第42-43页 |
| 2.4 统计分析 | 第43-44页 |
| 3 实验安排 | 第44-46页 |
| 3.1 海洛因自身给药大鼠NAc脑区miRNA芯片检测 | 第44页 |
| 3.2 筛选并验证海洛因自身给药大鼠NAc脑区miRNA芯片结果 | 第44页 |
| 3.3 目标miRNA及其靶基因确定 | 第44页 |
| 3.4 双荧光素酶实验验证rno-miR-181a对MeCP2基因表达的影响 | 第44-45页 |
| 3.5 观察海洛因自身给药大鼠条件线索诱导复吸后MeCP2蛋白表达的变化 | 第45页 |
| 3.6 观察海洛因自身给药大鼠NAc脑区过表达rno-miR-181a后条件线索诱导海洛因复吸行为变化及MeCP2蛋白表达变化情况 | 第45页 |
| 3.7 观察海洛因自身给药大鼠NAc脑区过表达MeCP2siRNA对海洛因线索诱导复吸行为及MeCP2蛋白表达的影响 | 第45-46页 |
| 4 实验结果 | 第46-58页 |
| 4.1 成功建立海洛因自身给药大鼠稳定模型后进行miRNA芯片表达分析 | 第46-48页 |
| 4.1.1 成功建立海洛因自身给药大鼠稳定模型 | 第46页 |
| 4.1.2 扩大大鼠NAc脑区样本对其miRNAs表达芯片结果进行验证 | 第46-48页 |
| 4.2 目标miRNA的靶基因确定 | 第48页 |
| 4.3 双荧光素酶实验验证miR-181a对靶基因MeCP2的影响 | 第48-49页 |
| 4.4 观察海洛因自身给药大鼠戒断后条件线索诱导复吸后MeCP2蛋白表达水平变化 | 第49-50页 |
| 4.5 观察海洛因自身给药大鼠NAc脑区过表达rno-miR-181a后线索诱导的海洛因复吸行为及MeCP2表达变化 | 第50-55页 |
| 4.5.1 大鼠NAc脑区脑区注射慢病毒后成功转染 | 第51-52页 |
| 4.5.2 检测海洛因自身给药大鼠NAc脑区过表达rno-miR-181a后NAc脑区rno-miR-181a表达水平变化 | 第52页 |
| 4.5.3 观察海洛因自身给药大鼠NAc脑区过表达miR-181a后靶基因MeCP2mRNA及其蛋白表达变化 | 第52-54页 |
| 4.5.4 海洛因自身给药大鼠NAc脑区过表达miR-181a后对条件线索诱导的海洛因复吸行为的影响 | 第54-55页 |
| 4.6 海洛因自身给药大鼠NAc脑区过表达LV-siRNA-MeCP2后对条件线索诱导的海洛因复吸行为及MeCP2表达水平的影响 | 第55-58页 |
| 4.6.1 观察海洛因自身给药大鼠NAc脑区过表达LV-siRNA-MeCP2后MeCP2的表达水平变化 | 第55-56页 |
| 4.6.2 观察海洛因自身给药大鼠NAc脑区过表达LV-siRNA-MeCP2后对条件线索诱导的海洛因复吸行为的影响 | 第56-58页 |
| 5 讨论 | 第58-60页 |
| 6 小结（二） | 第60-61页 |
| 7 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-67页 |
| 附录A 缩写词中英文对照表 | 第67-68页 |
| 附录B 文献综述miRNAs与药物成瘾 | 第68-84页 |
| 参考文献 | 第78-84页 |
| 在学研究成果 | 第84-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
