| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 主要符号对照表 | 第8-9页 |
| 第1章 前言 | 第9-21页 |
| 1.1 利福平及其药物抗性机理 | 第9页 |
| 1.2 细胞蛋白质降解体系 | 第9-14页 |
| 1.2.1 真核细胞蛋白质降解体系 | 第10-11页 |
| 1.2.2 原核细胞蛋白质降解体系 | 第11-14页 |
| 1.3 Clp蛋白家族 | 第14-19页 |
| 1.3.1 ClpXP、ClpAP和ClpS adaptor蛋白 | 第16-18页 |
| 1.3.2 ClpCP和其adaptor蛋白 | 第18-19页 |
| 1.4 本论文研究意义、目的和难点 | 第19-21页 |
| 第2章 材料与方法 | 第21-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第21页 |
| 2.1.1 菌种与质粒载体 | 第21页 |
| 2.1.2 实验试剂和材料 | 第21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-36页 |
| 2.2.1 半定量PCR验证 | 第21-22页 |
| 2.2.2 过表达clpS的M.smegmatis菌株抗利福平生长曲线测定 | 第22页 |
| 2.2.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第22-23页 |
| 2.2.4 蛋白质胶内酶解鉴定 | 第23-24页 |
| 2.2.5 TMT标记定量蛋白质组学 | 第24页 |
| 2.2.6 LC-MS/MS蛋白质质谱分析 | 第24-25页 |
| 2.2.7 蛋白质组学数据处理 | 第25-26页 |
| 2.2.8 利用Fc-III tag从M.smegmatis菌体内获得相互作用蛋白 | 第26页 |
| 2.2.9 蛋白质表达质粒构建和体外表达 | 第26-29页 |
| 2.2.10 蛋白质体外提取和纯化 | 第29-30页 |
| 2.2.11 SEC分析蛋白与ClpS的相互作用 | 第30-31页 |
| 2.2.12 SPR检测ClpS与MSMEG_4909的蛋白结合亲和力 | 第31-32页 |
| 2.2.13 酪蛋白降解的酶活测定法 | 第32-33页 |
| 2.2.14 利用FLAG tag从M. smegmatis菌体外获得相互作用蛋白 | 第33-34页 |
| 2.2.15 MSMEG_4909过表达和野生型菌株的脂质提取 | 第34页 |
| 2.2.16 实时荧光定量q-PCR | 第34-36页 |
| 第3章 过表达clpS菌株抗利福平分析 | 第36-46页 |
| 3.1 clpS敲除菌株和clpS过表达菌株的构建及ClpS蛋白水平分析 | 第36页 |
| 3.2 利福平对于细菌生长的影响 | 第36-39页 |
| 3.3 过表达clpS菌株蛋白质组学的分析 | 第39-42页 |
| 3.4 过表达clpS菌株抗利福平机制的预测 | 第42-44页 |
| 3.5 本章小结及结论 | 第44-46页 |
| 第4章 与ClpS相互作用蛋白探究 | 第46-61页 |
| 4.1 体内pull down鉴定可能与ClpS存在相互作用的蛋白质 | 第46-50页 |
| 4.2 利用SEC分析蛋白质与ClpS的相互作用 | 第50-54页 |
| 4.3 测量ClpS与MSMEG_4909的相互作用力大小 | 第54-58页 |
| 4.4 本章小结及结论 | 第58-61页 |
| 第5章 MSMEG_4909蛋白功能探究 | 第61-75页 |
| 5.1 体内pull down鉴定可能与MSMEG_4909存在相互作用的蛋白质 | 第61-63页 |
| 5.2 体外pull down鉴定可能与MSMEG_4909存在相互作用的蛋白质 | 第63-67页 |
| 5.3 MSMEG_4909过表达菌株的TMT定量蛋白质组学 | 第67-70页 |
| 5.4 ClpS和MSMEG_4909对ClpC1P1P2降解体系的影响 | 第70-74页 |
| 5.5 本章小结及结论 | 第74-75页 |
| 第6章 总结与展望 | 第75-79页 |
| 6.1 本论文工作总结 | 第75-77页 |
| 6.1.1 ClpS蛋白生物功能探究 | 第75-76页 |
| 6.1.2 MSMEG_4909蛋白生物功能探究 | 第76-77页 |
| 6.2 未来工作展望 | 第77-79页 |
| 参考文献 | 第79-86页 |
| 致谢 | 第86-88页 |
| 附录A clpS过表达菌株中部分上调蛋白 | 第88-93页 |
| 附录B clpS过表达菌株中部分下调蛋白 | 第93-97页 |
| 附录C clpS过表达菌株中ClpS蛋白pull down质谱结果 | 第97-104页 |
| 附录D MSMEG_4909过表达菌株中部分上调蛋白 | 第104-109页 |
| 附录E MSMEG_4909 过表达菌株中部分下调蛋白 | 第109-120页 |
| 附录F MSMEG_4909 蛋白在M.smegmatis菌体内pull down质谱结果 | 第120-122页 |
| 附录G MSMEG_4909 蛋白在M.smegmatis菌体外pull down质谱结果 | 第122-125页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第125页 |
