| 摘要 | 第2-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 引言 | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-29页 |
| 1.1 昆虫表皮几丁质及其组装 | 第10-14页 |
| 1.1.1 几丁质的结构 | 第10-11页 |
| 1.1.2 昆虫表皮的结构 | 第11-12页 |
| 1.1.3 昆虫表皮几丁质的代谢与组装 | 第12-14页 |
| 1.2 昆虫几丁质脱乙酰基酶 | 第14-23页 |
| 1.2.1 昆虫几丁质脱乙酰基酶的分类 | 第14-16页 |
| 1.2.2 昆虫几丁质脱乙酰基酶的催化机制 | 第16-19页 |
| 1.2.3 昆虫几丁质脱乙酰基酶的功能研究 | 第19-22页 |
| 1.2.4 昆虫几丁质脱乙酰基酶的性质研究 | 第22-23页 |
| 1.3 双链RNA干扰技术 | 第23-28页 |
| 1.3.1 双链RNA的制备方法 | 第23-24页 |
| 1.3.2 双链RNA技术干扰昆虫生长发育的原理 | 第24-27页 |
| 1.3.3 双链RNA干扰技术在害虫防治中的应用 | 第27-28页 |
| 1.4 本论文的选题依据和研究内容 | 第28-29页 |
| 1.4.1 选题依据 | 第28页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第28-29页 |
| 2 家蚕几丁质脱乙酰基酶1催化域的重组表达、分离纯化及结晶条件研究 | 第29-39页 |
| 2.1 引言 | 第29页 |
| 2.2 实验材料与方法 | 第29-34页 |
| 2.2.1 BmCDA1-CAD目的片段和载体片段的获得 | 第29-30页 |
| 2.2.2 重组BmCDA1-CAD表达载体的连接与转化 | 第30页 |
| 2.2.3 表达载体转化毕赤酵母GS115 | 第30页 |
| 2.2.4 酵母阳性克隆子的筛选和培养 | 第30-31页 |
| 2.2.5 重组BmCDA1-CAD的甲醇诱导表达和检测 | 第31-32页 |
| 2.2.6 重组BmCDA1-CAD蛋白的金属螯合层析纯化 | 第32-33页 |
| 2.2.7 蛋白质结晶条件的初筛和优化 | 第33页 |
| 2.2.8 蛋白质晶体的观察 | 第33-34页 |
| 2.3 结果与分析 | 第34-38页 |
| 2.3.1 表达载体pPIC9-BmCDA1-CAD的构建 | 第34-35页 |
| 2.3.2 重组BmCDA1-CAD的分离纯化 | 第35-36页 |
| 2.3.3 蛋白质结晶条件的初步筛选结果 | 第36-37页 |
| 2.3.4 蛋白质结晶条件的多次优化结果 | 第37-38页 |
| 2.4 小结 | 第38-39页 |
| 3 家蚕几丁质脱乙酰基酶1的全长蛋白和催化域的生化性质表征 | 第39-53页 |
| 3.1 引言 | 第39页 |
| 3.2 材料和方法 | 第39-44页 |
| 3.2.1 全长BmCDA1和BmCDA1-CAD的底物结合活性检测 | 第39-40页 |
| 3.2.2 新的几丁质脱乙酰基酶活性检测方法的建立 | 第40-41页 |
| 3.2.3 BmCDA1和Bm CDA1-CAD的催化活性检测 | 第41-42页 |
| 3.2.4 BmCDA1-CAD与BmCDA7序列比对分析 | 第42页 |
| 3.2.5 BmCAD1/7 目的片段和载体片段的获得 | 第42-43页 |
| 3.2.6 蛋白突变体BmCAD1/7 表达载体转化毕赤酵母 | 第43页 |
| 3.2.7 酵母阳性克隆子的筛选和甲醇诱导培养 | 第43页 |
| 3.2.8 蛋白突变体BmCAD1/7 的诱导表达与检测 | 第43-44页 |
| 3.3 结果与分析 | 第44-51页 |
| 3.3.1 BmCDA1和Bm CDA1-CAD对四种几丁质底物的结合活性 | 第44-47页 |
| 3.3.2 BmCDA1和Bm CDA1-CAD的催化活性 | 第47页 |
| 3.3.3 利用同源模建分析BmCDA1-CAD与BmCDA7结构差异 | 第47-49页 |
| 3.3.4 表达载体pPIC9-BmCAD1/7 的构建 | 第49-50页 |
| 3.3.5 蛋白突变体BmCAD1/7 的表达 | 第50-51页 |
| 3.4 小结 | 第51-53页 |
| 4 利用大肠杆菌表达亚洲玉米螟脱乙酰基酶1双链RNA | 第53-63页 |
| 4.1 引言 | 第53页 |
| 4.2 实验材料与方法 | 第53-57页 |
| 4.2.1 外源基因目的片段和载体片段的获得 | 第53-54页 |
| 4.2.2 外源基因表达载体的连接和转化 | 第54页 |
| 4.2.3 阳性克隆子的筛选和诱导培养 | 第54页 |
| 4.2.4 外源dsRNA的诱导表达条件优化 | 第54-55页 |
| 4.2.5 外源dsRNA的提取条件优化 | 第55-56页 |
| 4.2.6 外源dsRNA的浓度测定方法 | 第56页 |
| 4.2.7 外源dsRNA的稳定性研究 | 第56-57页 |
| 4.3 结果与分析 | 第57-62页 |
| 4.3.1 外源基因dsRNA表达载体的构建 | 第57-58页 |
| 4.3.2 外源dsRNA的表达与提取 | 第58-59页 |
| 4.3.3 外源dsRNA的最佳诱导菌液浓度 | 第59-60页 |
| 4.3.4 外源dsRNA的产量 | 第60-61页 |
| 4.3.5 外源dsRNA的稳定性 | 第61-62页 |
| 4.4 小结 | 第62-63页 |
| 结论 | 第63-64页 |
| 展望 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
| 附录A BmCDA1-CAD序列 | 第70-71页 |
| 附录B BmCDA7序列 | 第71-72页 |
| 附录C 部分已报道的昆虫几丁质脱乙酰基酶 | 第72-74页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75-77页 |
