英文缩略词 | 第8-11页 |
中文摘要 | 第11-15页 |
Abstract | 第15-19页 |
1 前言 | 第20-22页 |
2 实验材料 | 第22-26页 |
2.1 动物 | 第22页 |
2.2 试剂 | 第22-23页 |
2.3 主要仪器 | 第23-25页 |
2.4 溶液和试剂的配制 | 第25-26页 |
3. 实验方法 | 第26-39页 |
3.1 佐剂性关节炎(AA)大鼠模型的建立 | 第26页 |
3.2 佐剂性关节炎模型的确立 | 第26-27页 |
3.2.1 继发性足肿胀的测定 | 第26页 |
3.2.2 多发性关节炎指数(polyarthritis index, PI)评分 | 第26-27页 |
3.2.3 脾及胸腺指数 | 第27页 |
3.2.4 病理组织学检测 | 第27页 |
3.2.5 血清样本采集 | 第27页 |
3.3 大鼠滑膜细胞的分离与培养 | 第27-28页 |
3.3.1 大鼠滑膜组织的采集 | 第27页 |
3.3.2 大鼠滑膜细胞的分离 | 第27-28页 |
3.3.3 大鼠滑膜细胞的培养 | 第28页 |
3.4 MTT比色法测细胞增殖 | 第28页 |
3.5 脂质体瞬时转染NLRP3-siRNA、TXNIP-siRNA、mi R-20amimics进入FLS | 第28-29页 |
3.6 qRT-PCR | 第29-33页 |
3.6.1 细胞总RNA的提取 | 第29-30页 |
3.6.2 第一链cDNA的合成 | 第30页 |
3.6.3 qRT- PCR检测 | 第30-33页 |
3.7 Western Blot | 第33-36页 |
3.7.1 细胞总蛋白制备和定量 | 第33-34页 |
3.7.2 蛋白质电泳 | 第34页 |
3.7.3 电转移 | 第34-35页 |
3.7.4 抗原抗体反应及显色 | 第35-36页 |
3.7.5 结果分析 | 第36页 |
3.8 酶联免疫吸附试验检测 IL-1β,MMP-1 和 TIMP-1 | 第36页 |
3.9 生物信息技术预测miR-20a靶蛋白 | 第36-37页 |
3.10 荧光素酶报告基因实验 | 第37页 |
3.11 统计学分析 | 第37-39页 |
4 实验结果 | 第39-65页 |
4.1 大鼠AA模型的确立 | 第39-41页 |
4.2 NLRP3炎症小体在AA大鼠滑膜细胞中对炎症因子释放的影响及其作用机制 | 第41-50页 |
4.2.1 AA大鼠血清中炎症因子IL-1β 的表达 | 第41-42页 |
4.2.2 AA大鼠FLS培养上清液中IL-1β、MMP-1、TIMP-1的表达 | 第42页 |
4.2.3 IL-1β 对大鼠FLS增殖的影响 | 第42-43页 |
4.2.4 AA大鼠滑膜组织蛋白中NLRP3的表达 | 第43-44页 |
4.2.5 AA大鼠FLS的提取及NLRP3/ASC/casp-1 mRNA的表达 | 第44-46页 |
4.2.6 采用小干扰RNA技术沉默NLRP3,对NLRP3炎症小体及炎症因子IL-1β、MMP-1、TIMP-1 释放的影响。 | 第46-50页 |
4.3 TXNIP对NLRP3的表达及炎症因子释放的影响 | 第50-56页 |
4.3.1 AA大鼠滑膜组织蛋白中TXNIP的表达 | 第50页 |
4.3.2 AA大鼠FLS中TXNIP mRNA的表达 | 第50-51页 |
4.3.3 采用小干扰RNA技术沉默TXNIP,对NLRP3炎症小体及炎症因IL-1β、MMP-1、TIMP-1 释放的影响 | 第51-56页 |
4.4 AA大鼠FLS中mi R-20a对TXNIP表达的调控及对NLRP3炎症小体的表达和炎症因子IL-1β、MMP-1、TIMP-1 释放的影响 | 第56-65页 |
4.4.1 AA大鼠FLS中mi R-20a的表达 | 第56-58页 |
4.4.2 mi R-20a靶向调控TXNIP的表达 | 第58-61页 |
4.4.3 过表达miR-20a对TXNIP、NLRP3/ASC/caspase-1 及炎症因子IL-1β、MMP-1、TIMP-1 释放的影响 | 第61-65页 |
5.讨论 | 第65-68页 |
结论 | 第68-69页 |
参考文献 | 第69-74页 |
附录 | 第74-75页 |
致谢 | 第75-77页 |
综述 | 第77-89页 |
参考文献 | 第84-89页 |