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miR-20a对AA大鼠模型滑膜细胞中NLRP3炎症小体的调控作用及其机制的研究

英文缩略词第8-11页
中文摘要第11-15页
Abstract第15-19页
1 前言第20-22页
2 实验材料第22-26页
    2.1 动物第22页
    2.2 试剂第22-23页
    2.3 主要仪器第23-25页
    2.4 溶液和试剂的配制第25-26页
3. 实验方法第26-39页
    3.1 佐剂性关节炎(AA)大鼠模型的建立第26页
    3.2 佐剂性关节炎模型的确立第26-27页
        3.2.1 继发性足肿胀的测定第26页
        3.2.2 多发性关节炎指数(polyarthritis index, PI)评分第26-27页
        3.2.3 脾及胸腺指数第27页
        3.2.4 病理组织学检测第27页
        3.2.5 血清样本采集第27页
    3.3 大鼠滑膜细胞的分离与培养第27-28页
        3.3.1 大鼠滑膜组织的采集第27页
        3.3.2 大鼠滑膜细胞的分离第27-28页
        3.3.3 大鼠滑膜细胞的培养第28页
    3.4 MTT比色法测细胞增殖第28页
    3.5 脂质体瞬时转染NLRP3-siRNA、TXNIP-siRNA、mi R-20amimics进入FLS第28-29页
    3.6 qRT-PCR第29-33页
        3.6.1 细胞总RNA的提取第29-30页
        3.6.2 第一链cDNA的合成第30页
        3.6.3 qRT- PCR检测第30-33页
    3.7 Western Blot第33-36页
        3.7.1 细胞总蛋白制备和定量第33-34页
        3.7.2 蛋白质电泳第34页
        3.7.3 电转移第34-35页
        3.7.4 抗原抗体反应及显色第35-36页
        3.7.5 结果分析第36页
    3.8 酶联免疫吸附试验检测 IL-1β,MMP-1 和 TIMP-1第36页
    3.9 生物信息技术预测miR-20a靶蛋白第36-37页
    3.10 荧光素酶报告基因实验第37页
    3.11 统计学分析第37-39页
4 实验结果第39-65页
    4.1 大鼠AA模型的确立第39-41页
    4.2 NLRP3炎症小体在AA大鼠滑膜细胞中对炎症因子释放的影响及其作用机制第41-50页
        4.2.1 AA大鼠血清中炎症因子IL-1β 的表达第41-42页
        4.2.2 AA大鼠FLS培养上清液中IL-1β、MMP-1、TIMP-1的表达第42页
        4.2.3 IL-1β 对大鼠FLS增殖的影响第42-43页
        4.2.4 AA大鼠滑膜组织蛋白中NLRP3的表达第43-44页
        4.2.5 AA大鼠FLS的提取及NLRP3/ASC/casp-1 mRNA的表达第44-46页
        4.2.6 采用小干扰RNA技术沉默NLRP3,对NLRP3炎症小体及炎症因子IL-1β、MMP-1、TIMP-1 释放的影响。第46-50页
    4.3 TXNIP对NLRP3的表达及炎症因子释放的影响第50-56页
        4.3.1 AA大鼠滑膜组织蛋白中TXNIP的表达第50页
        4.3.2 AA大鼠FLS中TXNIP mRNA的表达第50-51页
        4.3.3 采用小干扰RNA技术沉默TXNIP,对NLRP3炎症小体及炎症因IL-1β、MMP-1、TIMP-1 释放的影响第51-56页
    4.4 AA大鼠FLS中mi R-20a对TXNIP表达的调控及对NLRP3炎症小体的表达和炎症因子IL-1β、MMP-1、TIMP-1 释放的影响第56-65页
        4.4.1 AA大鼠FLS中mi R-20a的表达第56-58页
        4.4.2 mi R-20a靶向调控TXNIP的表达第58-61页
        4.4.3 过表达miR-20a对TXNIP、NLRP3/ASC/caspase-1 及炎症因子IL-1β、MMP-1、TIMP-1 释放的影响第61-65页
5.讨论第65-68页
结论第68-69页
参考文献第69-74页
附录第74-75页
致谢第75-77页
综述第77-89页
    参考文献第84-89页

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