| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-20页 |
| 1.1 斑马鱼早期消化系统发育的研究进展 | 第13-17页 |
| 1.1.1 斑马鱼肝脏发育的过程 | 第13-14页 |
| 1.1.2 斑马鱼肠道发育的过程 | 第14-16页 |
| 1.1.3 斑马鱼胆囊发育的过程 | 第16-17页 |
| 1.2 遗传诱变的介绍 | 第17-18页 |
| 1.2.1 ENU诱变的简介 | 第17页 |
| 1.2.2 ENU诱变的特性与优势 | 第17-18页 |
| 1.2.3 以斑马鱼作为模式生物及筛选材料的优势 | 第18页 |
| 1.3 转录组学的研究进展 | 第18-20页 |
| 1.3.1 转录组学及比较转录组学概述 | 第18-19页 |
| 1.3.2 转录组学研究方法的发展 | 第19-20页 |
| 第二章 引言 | 第20-23页 |
| 2.1 本研究工作的目的和意义 | 第20-21页 |
| 2.2 本研究工作研究内容和预期结果 | 第21-23页 |
| 2.2.1 本研究工作的研究内容 | 第21-22页 |
| 2.2.2 本研究工作预期结果 | 第22-23页 |
| 第三章 研究对象、实验材料和研究方法 | 第23-47页 |
| 3.1 斑马鱼品系及饲养 | 第23-24页 |
| 3.1.1 斑马鱼简介 | 第23页 |
| 3.1.2 斑马鱼饲养 | 第23-24页 |
| 3.2 实验仪器、试剂以及耗材 | 第24-26页 |
| 3.2.1 实验仪器 | 第24-25页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第25页 |
| 3.2.3 实验耗材 | 第25-26页 |
| 3.3 试剂配制 | 第26-31页 |
| 3.3.1 全胚RNA原位杂交(Whole mount RNA in situ hybridization)相关试剂 | 第26-29页 |
| 3.3.2 分子克隆操作相关试剂 | 第29-31页 |
| 3.4 菌株和质粒 | 第31页 |
| 3.5 Taq DNA polymerase的制备与提纯 | 第31-32页 |
| 3.6 MgCl_2法制备大肠杆菌DH5α感受态细胞 | 第32页 |
| 3.7 斑马鱼RNA的提取以及cDNA的合成 | 第32-34页 |
| 3.7.1 斑马鱼RNA的提取 | 第32-33页 |
| 3.7.2 斑马鱼1st-Strand cDNA合成 | 第33-34页 |
| 3.8 含目的基因的重组质粒的构建 | 第34-39页 |
| 3.8.1 扩增目的基因片段 | 第34页 |
| 3.8.2 目的片段PCR产物纯化 | 第34-36页 |
| 3.8.3 T载体与目的片段连接重组 | 第36页 |
| 3.8.4 重组子的转化(Transformation) | 第36-37页 |
| 3.8.5 菌落PCR筛选阳性重组子 | 第37-38页 |
| 3.8.6 阳性重组质粒的纯化 | 第38-39页 |
| 3.8.7 重组质粒的鉴定及测序 | 第39页 |
| 3.9 用于原位杂交的反义RNA探针的制备 | 第39-41页 |
| 3.9.1 线性化反义RNA探针模板 | 第39-40页 |
| 3.9.2 纯化RNA探针模板 | 第40-41页 |
| 3.9.3 探针合成及纯化 | 第41页 |
| 3.10 斑马鱼早期胚胎RNA原位杂交(Whole mount RNA in situ hybridization) | 第41-43页 |
| 3.10.1 早期胚胎的收集、固定及保存 | 第41-42页 |
| 3.10.2 全胚原位杂交流程 | 第42-43页 |
| 3.11 ENU诱变及遗传筛选流程 | 第43-45页 |
| 3.11.1 ENU处理野生型斑马鱼 | 第43页 |
| 3.11.2 ENU遗传筛选的基本策略 | 第43-44页 |
| 3.11.3 本研究中的遗传筛选方法 | 第44-45页 |
| 3.12 野生型斑马鱼消化器官转录组测序 | 第45-47页 |
| 3.12.1 野生型斑马鱼消化器官RNA样品获取 | 第45页 |
| 3.12.2 转录组测序基本策略及方法 | 第45-47页 |
| 第四章 实验结果 | 第47-56页 |
| 4.1 筛选突变体方法的可行性验证 | 第47-49页 |
| 4.1.1 BES-H_2O_2-Ac在野生型斑马鱼体内标记情况 | 第47-48页 |
| 4.1.2 lfabp探针合成及在野生型斑马鱼体内的表达情况 | 第48-49页 |
| 4.2 ENU诱变与F2家族的建立 | 第49-54页 |
| 4.2.1 F2代筛选与突变体的传代 | 第49-50页 |
| 4.2.2 F3代建立与筛选 | 第50-51页 |
| 4.2.3 F3突变体的表型分类 | 第51-54页 |
| 4.3 消化器官转录组样品获取及初步分析 | 第54-56页 |
| 4.3.1 斑马鱼消化器官转录组样品获取 | 第54页 |
| 4.3.2 转录组数据的初步分析 | 第54-56页 |
| 第五章 结果讨论与分析 | 第56-58页 |
| 5.1 ENU遗传筛选工作成果讨论 | 第56页 |
| 5.2 ENU遗传筛选过程中的一些问题 | 第56-58页 |
| 第六章 结论与展望 | 第58-60页 |
| 6.1 斑马鱼肠道、肝脏和胆囊突变体的正向遗传筛选 | 第58页 |
| 6.2 斑马鱼消化器官转录组测序 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-68页 |
| 致谢 | 第68-70页 |
| 附录 | 第70-81页 |
| 在读期间发表论文及参与课题 | 第81页 |
| 发表论文 | 第81页 |
| 参与项目 | 第81页 |
| 参与其他课题 | 第81页 |
