| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 第一章 绪论 | 第19-29页 |
| 1.1 研究背景 | 第19页 |
| 1.2 心肌损伤标志物 | 第19-20页 |
| 1.3 hALB和hTRF检测方法现状 | 第20-21页 |
| 1.3.1 人血清白蛋白(hALB) | 第20页 |
| 1.3.2 人转铁蛋白(hTRF) | 第20-21页 |
| 1.4 高准确度蛋白质检测方法现状 | 第21-27页 |
| 1.4.1 非免疫学检测方法 | 第21-25页 |
| 1.4.1.1 液相色谱法 | 第21页 |
| 1.4.1.2 毛细管电泳法 | 第21-22页 |
| 1.4.1.3 液相色谱质谱法 | 第22页 |
| 1.4.1.4 同位素稀释质谱法(IDMS) | 第22-25页 |
| 1.4.2 免疫学检测方法 | 第25-27页 |
| 1.4.2.1 酶联免疫检测技术(ELISA) | 第25页 |
| 1.4.2.2 免疫荧光法(FBIA) | 第25页 |
| 1.4.2.3 免疫胶体金法 | 第25-26页 |
| 1.4.2.4 Western blot法 | 第26-27页 |
| 1.5 课题提出 | 第27-29页 |
| 第二章 人血清白蛋白和人转铁蛋白纯品含量的同位素稀释质谱方法究 | 第29-43页 |
| 2.1 仪器与试剂 | 第29-31页 |
| 2.1.1 仪器 | 第29-30页 |
| 2.1.2 试剂 | 第30-31页 |
| 2.2 实验内容 | 第31-34页 |
| 2.2.1 hALB和hTRF基本性质表征 | 第31-32页 |
| 2.2.1.1 SDS-PAGE纯度测定 | 第31页 |
| 2.2.1.2 MALDI-TOF分子量测定 | 第31页 |
| 2.2.1.3 蛋白质鉴定 | 第31-32页 |
| 2.2.2 HPLC-IDMS法测定hALB和hTRF蛋白质含量 | 第32-33页 |
| 2.2.2.1 hALB和hTRF样品的水解 | 第32页 |
| 2.2.2.2 HPLC-IDMS分析 | 第32-33页 |
| 2.2.3 质量平衡法测定hALB和hTRF蛋白含量 | 第33-34页 |
| 2.2.3.1 水分测定 | 第33页 |
| 2.2.3.2 灰分测定 | 第33页 |
| 2.2.3.3 凝胶排阻色谱测定hALB纯度 | 第33页 |
| 2.2.3.4 反相高效色谱法测定hTRF纯度 | 第33-34页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第34-41页 |
| 2.3.1 hALB和hTRF基本性质的表征 | 第34-36页 |
| 2.3.1.1 SDS-PAGE纯度测定结果 | 第34页 |
| 2.3.1.2 MALDI-TOF分子量测定结果 | 第34-35页 |
| 2.3.1.3 蛋白质鉴定结果 | 第35-36页 |
| 2.3.2 纯品hALB和hTRF含量质量平衡法测定结果 | 第36-38页 |
| 2.3.2.1 水分测定 | 第36页 |
| 2.3.2.2 灰分测定 | 第36页 |
| 2.3.2.3 凝胶排阻色谱纯度测定 | 第36-37页 |
| 2.3.2.4 反相高效液相色谱纯度测定 | 第37-38页 |
| 2.3.3 纯品hALB和hTRF含量HPLC-IDMS测定水解时间优化结果 | 第38页 |
| 2.3.4 HPLC-IDMS方法的方法准确性、重复性和再现性评价 | 第38-41页 |
| 2.3.4.1 方法重复性 | 第38页 |
| 2.3.4.2 方法再现性 | 第38-39页 |
| 2.3.4.3 方法准确性 | 第39页 |
| 2.3.4.4 方法的不确定度评定 | 第39-41页 |
| 2.3.4.5 HPLC-IDMS方法的检出限与定量限评价 | 第41页 |
| 2.4 结论 | 第41-43页 |
| 第三章 人血清中转铁蛋白含量的同位素稀释质谱方法研究 | 第43-55页 |
| 3.1 仪器与试剂 | 第43-44页 |
| 3.1.1 仪器 | 第43页 |
| 3.1.2 试剂 | 第43-44页 |
| 3.2 实验部分 | 第44-46页 |
| 3.2.1 hTRF的TMT标记和酶切 | 第44页 |
| 3.2.2 标记效率的评价 | 第44-45页 |
| 3.2.3 肽段的nLC-MS/MS分析 | 第45-46页 |
| 3.2.4 hTRF的特异性肽段的选择 | 第46页 |
| 3.2.5 血清中hTRF的酶联免疫吸附分析 | 第46页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第46-53页 |
| 3.3.1 纯品hTRF的质量分数的测定 | 第46页 |
| 3.3.2 hTRF的特异性肽段的选择 | 第46-47页 |
| 3.3.3 标记效率的评价 | 第47-49页 |
| 3.3.4 报告离子纯度校正 | 第49-50页 |
| 3.3.5 TMT-IDMS方法定量血清中hTRF | 第50-51页 |
| 3.3.6 加标回收率 | 第51-52页 |
| 3.3.7 IDMS方法的LOD和LOQ | 第52页 |
| 3.3.8 ELISA定量血清中的hTRF | 第52页 |
| 3.3.9 TMT-IDMS法的测定结果的量值溯源图 | 第52-53页 |
| 3.4 结论 | 第53-55页 |
| 第四章 人血清中hTRF的化学发光免疫印迹测定方法研究 | 第55-67页 |
| 4.1 仪器与试剂 | 第55-56页 |
| 4.1.1 仪器 | 第55页 |
| 4.1.2 试剂 | 第55-56页 |
| 4.2 实验部分 | 第56-57页 |
| 4.2.1 Ladder的配制 | 第56页 |
| 4.2.2 样品的配制 | 第56页 |
| 4.2.3 加样 | 第56-57页 |
| 4.2.4 上机 | 第57页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第57-65页 |
| 4.3.1 一抗的选择 | 第58-59页 |
| 4.3.2 样品前处理方法的选择 | 第59-60页 |
| 4.3.3 血清样品的测定 | 第60页 |
| 4.3.4 标准品的测定 | 第60-61页 |
| 4.3.5 方法学参数的考察 | 第61-65页 |
| 4.3.5.1 重复性 | 第62页 |
| 4.3.5.2 再现性 | 第62-63页 |
| 4.3.5.3 准确性 | 第63页 |
| 4.3.5.4 加标回收率 | 第63-64页 |
| 4.3.5.5 检出限及定量限 | 第64页 |
| 4.3.5.6 定量方法的选择 | 第64-65页 |
| 4.4 结论 | 第65-67页 |
| 第五章 结论 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-73页 |
| 致谢 | 第73-75页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第75-77页 |
| 作者和导师简介 | 第77-78页 |
| 附件 | 第78-79页 |
