| 摘要 | 第8-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 第1章 绪论 | 第11-21页 |
| 1.1 概述 | 第11-12页 |
| 1.2 普鲁兰酶的研究进展 | 第12-15页 |
| 1.2.1 普鲁兰糖 | 第12页 |
| 1.2.2 普鲁兰水解酶的种类 | 第12-13页 |
| 1.2.3 普鲁兰水解酶蛋白质结构与其基因编码序列的特异性 | 第13页 |
| 1.2.4 普鲁兰水解酶的酶学性质 | 第13-14页 |
| 1.2.5 自然界中普鲁兰水解酶的生产菌种 | 第14页 |
| 1.2.6 普鲁兰水解酶的异源表达 | 第14-15页 |
| 1.3 普鲁兰酶的应用 | 第15-17页 |
| 1.3.1 普鲁兰水解酶在淀粉糖化过程中的应用 | 第15页 |
| 1.3.2 普鲁兰水解酶在高麦芽糖浆生产中的应用 | 第15-16页 |
| 1.3.3 普鲁兰水解酶在高果糖浆生产中的应用 | 第16页 |
| 1.3.4 普鲁兰水解酶在环糊精生产中的应用 | 第16页 |
| 1.3.5 普鲁兰水解酶在抗性淀粉生产中的应用 | 第16-17页 |
| 1.3.6 普鲁兰水解酶在啤酒酿造中的应用 | 第17页 |
| 1.3.7 普鲁兰水解酶的其他应用 | 第17页 |
| 1.4 大肠杆菌表达系统 | 第17-19页 |
| 1.4.1 外源基因在大肠杆菌中表达蛋白质的位置 | 第17-18页 |
| 1.4.2 外源基因在大肠杆菌中的可溶性表达 | 第18页 |
| 1.4.3 外源基因在大肠杆菌中的自诱导表达 | 第18-19页 |
| 1.5 本研究的目的与意义 | 第19-21页 |
| 第2章 重组普鲁兰酶生产菌的构建与表达分析 | 第21-35页 |
| 2.1 试验材料 | 第21-24页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第21页 |
| 2.1.2 工具酶和试剂 | 第21页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第21-22页 |
| 2.1.4 培养基及试剂 | 第22-24页 |
| 2.2 试验方法 | 第24-30页 |
| 2.2.1 苏云金芽孢杆菌BTR05基因组DNA的提取 | 第24页 |
| 2.2.2 苏云金芽孢杆菌BTR05普鲁兰酶基因的克隆 | 第24-25页 |
| 2.2.3 苏云金芽孢杆菌BTR05普鲁兰酶基因表达载体的构建 | 第25-27页 |
| 2.2.4 苏云金芽孢杆菌BTR05普鲁兰酶基因共表达体系的建立 | 第27-28页 |
| 2.2.5 重组工程菌目的蛋白的 Tricine-SDS-PAGE 分析 | 第28页 |
| 2.2.6 普鲁兰酶酶活测定 | 第28-30页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第30-32页 |
| 2.3.1 苏云金芽孢杆菌BTR05基因组DNA提取 | 第30页 |
| 2.3.2 苏云金芽孢杆菌 BTR05 普鲁兰酶基因的克隆 | 第30-31页 |
| 2.3.3 表达载体 pET(K)-Trx-pul 的构建 | 第31页 |
| 2.3.4 工程菌表达产物的 Tricine-SDS-PAGE 分析 | 第31-32页 |
| 2.4 本章小结 | 第32-35页 |
| 第3章 工程菌发酵条件的优化及重组酶酶学性质的表征 | 第35-45页 |
| 3.1 试验材料 | 第35页 |
| 3.1.1 菌株 | 第35页 |
| 3.1.2 培养基 | 第35页 |
| 3.2 试验方法 | 第35-37页 |
| 3.2.1 酶活测定 | 第35页 |
| 3.2.2 重组工程菌发酵条件的优化 | 第35-36页 |
| 3.2.3 重组普鲁兰酶酶学性质的表征 | 第36-37页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第37-44页 |
| 3.3.1 诱导温度对重组工程菌产酶的影响 | 第37-38页 |
| 3.3.2 IPTG浓度对重组工程菌产酶的影响 | 第38-39页 |
| 3.3.3 诱导时机对重组工程菌产酶的影响 | 第39-40页 |
| 3.3.4 诱导时间对重组工程菌产酶的影响 | 第40页 |
| 3.3.5 重组普鲁兰酶作用的最适温度 | 第40-41页 |
| 3.3.6 重组普鲁兰酶的热稳定性 | 第41-42页 |
| 3.3.7 重组普鲁兰酶作用的最适pH值 | 第42-43页 |
| 3.3.8 重组普鲁兰酶酶的底物特异性 | 第43页 |
| 3.3.9 金属离子对重组普鲁兰酶活性的影响 | 第43-44页 |
| 3.4 本章小结 | 第44-45页 |
| 第4章 重组工程菌的自诱导表达 | 第45-51页 |
| 4.1 试验材料 | 第45-46页 |
| 4.1.1 菌株 | 第45页 |
| 4.1.2 贮存液和培养基 | 第45-46页 |
| 4.2 试验方法 | 第46页 |
| 4.2.1 重组工程菌的自诱导培养 | 第46页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第46-50页 |
| 4.3.1 工程菌自诱导表达产物的 Tricine-SDS-PAGE 分析 | 第46-48页 |
| 4.3.2 正交试验优化培养基成分 | 第48-49页 |
| 4.3.3 乳糖浓度对重组工程菌产酶的影响 | 第49-50页 |
| 4.4 本章小结 | 第50-51页 |
| 第5章 结论与展望 | 第51-53页 |
| 5.1 结论 | 第51页 |
| 5.2 展望 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-63页 |
| 致谢 | 第63-65页 |
| 在学期间主要科研成果 | 第65页 |
