| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第9-17页 |
| 1.1 谷氨酰胺酶的来源 | 第9页 |
| 1.2 谷氨酰胺酶的结构和催化机理研究 | 第9-10页 |
| 1.3 谷氨酰胺酶的酶学性质、重组表达及发酵生产研究 | 第10-13页 |
| 1.3.1 谷氨酰胺酶的重组表达 | 第10-11页 |
| 1.3.2 谷氨酰胺酶的酶学性质研究 | 第11-12页 |
| 1.3.3 谷氨酰胺酶的发酵生产研究 | 第12-13页 |
| 1.4 谷氨酰胺酶的应用研究进展 | 第13-14页 |
| 1.4.1 谷氨酰胺酶在医学上的应用 | 第13页 |
| 1.4.2 谷氨酰胺酶在食品上的应用 | 第13-14页 |
| 1.5 本课题的立题意义和主要研究内容 | 第14-17页 |
| 1.5.1 立题意义 | 第14-16页 |
| 1.5.2 主要研究内容 | 第16-17页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第17-28页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-21页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第17页 |
| 2.1.2 主要实验试剂 | 第17-18页 |
| 2.1.3 引物设计 | 第18页 |
| 2.1.4 菌株与质粒 | 第18-20页 |
| 2.1.5 培养基及相关试剂配制 | 第20-21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-28页 |
| 2.2.1 大肠杆菌感受态的制备及转化 | 第21页 |
| 2.2.2 大肠杆菌和枯草芽孢杆菌基因组的提取 | 第21页 |
| 2.2.3 目的基因的克隆、纯化及连接pMD18-T载体 | 第21-22页 |
| 2.2.4 重组质粒的构建 | 第22-23页 |
| 2.2.5 枯草芽孢杆菌感受态的制备方法和转化 | 第23页 |
| 2.2.6 重组谷氨酰胺酶的表达 | 第23页 |
| 2.2.7 谷氨酰胺酶酶活测定 | 第23-24页 |
| 2.2.8 谷氨酰胺酶的酶学性质研究 | 第24-25页 |
| 2.2.9 重组菌产谷氨酰胺酶酶活的摇瓶发酵培养基优化 | 第25-26页 |
| 2.2.10 重组菌产谷氨酰胺酶酶活的摇瓶发酵条件优化 | 第26页 |
| 2.2.11 5L发酵罐水平重组菌产谷氨酰胺酶酶活的发酵调控研究 | 第26-28页 |
| 第三章 结果和讨论 | 第28-51页 |
| 3.1 重组菌的构建与表达 | 第28-34页 |
| 3.1.1 谷氨酰胺酶基因glsB、ybgJ、ylaM和Mglu的克隆 | 第28-29页 |
| 3.1.2 重组质粒的构建和转化 | 第29-32页 |
| 3.1.3 重组谷氨酰胺酶的表达和SDS-PAGE分析 | 第32-34页 |
| 3.2 重组谷氨酰胺酶酶学性质研究 | 第34-40页 |
| 3.2.1 重组谷氨酰胺酶的纯化和SDS-PAGE分析 | 第34-35页 |
| 3.2.2 重组谷氨酰胺酶的最适反应pH和pH稳定性 | 第35-36页 |
| 3.2.3 重组谷氨酰胺酶的最适反应温度和热稳定性 | 第36-37页 |
| 3.2.4 EDTA和金属离子对重组谷氨酰胺酶的影响 | 第37-38页 |
| 3.2.5 重组谷氨酰胺酶的耐盐性研究 | 第38-40页 |
| 3.3 重组菌B. subtilis 168/pMA5-Mglu摇瓶发酵培养基的优化 | 第40-45页 |
| 3.3.1 不同种类碳源及碳源浓度对重组菌产谷氨酰胺酶的影响 | 第40-41页 |
| 3.3.2 氮源及其浓度对重组菌产谷氨酰胺酶的影响 | 第41-43页 |
| 3.3.3 L-谷氨酰胺和L-谷氨酸钠对重组菌产谷氨酰胺酶的影响 | 第43页 |
| 3.3.4 磷酸盐对重组菌产谷氨酰胺酶的影响 | 第43-44页 |
| 3.3.5 金属离子及其浓度对重组菌产谷氨酰胺酶的影响 | 第44-45页 |
| 3.4 重组菌B. subtilis 168/pMA5-Mglu摇瓶发酵条件的优化 | 第45-48页 |
| 3.4.1 初始pH对重组菌产谷氨酰胺酶的影响 | 第45-46页 |
| 3.4.2 温度对重组菌产谷氨酰胺酶的影响 | 第46页 |
| 3.4.3 摇床转速对重组菌产谷氨酰胺酶的影响 | 第46-47页 |
| 3.4.4 接种量对重组菌产谷氨酰胺酶的影响 | 第47-48页 |
| 3.5 重组菌B. subtilis 168/pMA5-Mglu 5 L发酵罐产酶的条件调控研究 | 第48-51页 |
| 3.5.1 pH调控对重组菌产谷氨酰胺酶酶活的影响 | 第48-49页 |
| 3.5.2 不同转速调控对重组菌产谷氨酰胺酶酶活的影响 | 第49-50页 |
| 3.5.3 补料发酵 | 第50-51页 |
| 主要结论与展望 | 第51-53页 |
| 主要结论 | 第51-52页 |
| 展望 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-58页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第58页 |
