| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-24页 |
| 1. 灰飞虱的发生、危害及抗药性现状 | 第10-13页 |
| 1.1 灰飞虱的发生与危害 | 第10页 |
| 1.2 灰飞虱的抗药性状况 | 第10-11页 |
| 1.3 昆虫的抗药性机理 | 第11-13页 |
| 2. 昆虫对拟除虫菊酯类农药的抗药性发展概况 | 第13-15页 |
| 2.1 昆虫对拟除虫菊酯类农药的抗药性发展 | 第13-14页 |
| 2.2 溴氰菊酯及其作用机理 | 第14-15页 |
| 3. 基因功能的验证 | 第15-21页 |
| 3.1 RNA干扰的研究进展 | 第15-19页 |
| 3.2 昆虫杆状病毒表达系统 | 第19-21页 |
| 4. 本研究的目的及意义 | 第21-24页 |
| 第二章 灰飞虱对溴氰菊酯抗性相关解毒酶基因的RNA干扰效应 | 第24-48页 |
| 1. 材料与方法 | 第25-33页 |
| 1.1 供试昆虫 | 第25页 |
| 1.2 昆虫饲养 | 第25页 |
| 1.3 供试药剂 | 第25页 |
| 1.4 供试主要试剂与仪器 | 第25-26页 |
| 1.5 体外合成dsRNA | 第26-31页 |
| 1.6 灰飞虱喂食dsRNA方法 | 第31页 |
| 1.7 溴氰菊酯抗性相关解毒酶基因的RNAi效应检测 | 第31-33页 |
| 2. 结果与分析 | 第33-46页 |
| 2.1 体外合成dsRNA | 第33-36页 |
| 2.2 实时荧光定量PCR引物的特异性分析 | 第36-41页 |
| 2.3 干扰条件的筛选与优化 | 第41-43页 |
| 2.4 溴氰菊酯的毒理分析 | 第43-46页 |
| 3. 讨论 | 第46-48页 |
| 第三章 灰飞虱对溴氰菊酯抗性相关解毒酶基因的体外功能表达 | 第48-74页 |
| 1. 材料与方法 | 第49-62页 |
| 1.1 主要试剂和仪器设备 | 第49-50页 |
| 1.2 真核表达载体的构建 | 第50-53页 |
| 1.3 重组杆状病毒质粒的构建 | 第53-55页 |
| 1.4 昆虫细胞Sf9的培养 | 第55-56页 |
| 1.5 重组病毒Bacmid DNA对昆虫细胞的转染及侵染 | 第56-57页 |
| 1.6 SDS-PAGE及Western免疫印迹杂交检测 | 第57-60页 |
| 1.7 蛋白含量测定和酶活力测定 | 第60-61页 |
| 1.8 重组表达P450对溴氰菊酯的代谢及RP-HPLC检测 | 第61-62页 |
| 2. 结果与分析 | 第62-72页 |
| 2.1 重组杆状病毒质粒的构建 | 第62-65页 |
| 2.2 重组杆状病毒Bacmid DNA转染Sf9细胞 | 第65-66页 |
| 2.3 Western免疫印迹杂交检测 | 第66页 |
| 2.4 重组表达蛋白的酶学活力测定 | 第66-70页 |
| 2.5 重组表达的细胞色素P450氧化酶对溴氰菊酯的代谢活性分析 | 第70-72页 |
| 3. 讨论 | 第72-74页 |
| 全文总结 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-86页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第86-88页 |
| 致谢 | 第88页 |
