| 摘要 | 第11-13页 |
| ABSTRACT | 第13-14页 |
| 英文缩略语 | 第15-17页 |
| 前言 | 第17-18页 |
| 第一篇 文献综述 | 第18-76页 |
| 第一章 捻转血矛线虫和捻转血矛线虫病 | 第18-32页 |
| 1 捻转血矛线虫病概述 | 第18-21页 |
| 1.1 病原 | 第18页 |
| 1.2 生活史 | 第18-19页 |
| 1.3 流行病学 | 第19页 |
| 1.4 临床症状及病理变化 | 第19页 |
| 1.5 防治研究 | 第19-21页 |
| 1.5.1 化学药物 | 第19-20页 |
| 1.5.2 生物防治 | 第20页 |
| 1.5.3 疫苗研究 | 第20-21页 |
| 2 捻转血矛线虫是研究消化道寄生线虫的模式种 | 第21-22页 |
| 3 捻转血矛线虫分子生物学研究进展 | 第22-26页 |
| 3.1 免疫保护性抗原 | 第22页 |
| 3.2 发育调控基因 | 第22-24页 |
| 3.3 免疫调节分子 | 第24页 |
| 3.4 药物作用靶点和抗药性基因 | 第24-26页 |
| 参考文献 | 第26-32页 |
| 第二章 半乳糖结合凝集素 | 第32-60页 |
| 1 Galectins的分类及分布 | 第32-34页 |
| 2 Galectins的结构 | 第34-37页 |
| 3 Galectins的功能 | 第37-47页 |
| 3.1 哺乳动物galectins的功能研究 | 第37-44页 |
| 3.1.1 哺乳动物原型galectins | 第38-39页 |
| 3.1.2 哺乳动物串联重复型galectins | 第39-43页 |
| 3.1.3 哺乳动物嵌合型galectins | 第43-44页 |
| 3.2 寄生虫galectins的功能 | 第44-47页 |
| 3.2.1 蠕虫galectins | 第44-47页 |
| 3.2.2 原虫galectins | 第47页 |
| 3.3 其他物种galectins | 第47页 |
| 4 Galectin的受体及其参与的信号通路 | 第47-49页 |
| 4.1 Galectin的受体 | 第47-48页 |
| 4.2 Galectin参与的信号通路 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-60页 |
| 第三章 蛋白质间相互作用的研究方法 | 第60-76页 |
| 1 在异种系统中检测蛋白质间相互作用 | 第60-63页 |
| 1.1 酵母双杂交 | 第60-62页 |
| 1.2 细菌双杂交 | 第62页 |
| 1.3 哺乳动物细胞双杂交 | 第62-63页 |
| 1.4 转染细胞免疫共沉淀 | 第63页 |
| 2 在活细胞中检测蛋白质间的相互作用 | 第63-64页 |
| 2.1 荧光共振能量转移 | 第63页 |
| 2.2 荧光相关谱技术 | 第63页 |
| 2.3 共聚焦显微镜检测细胞内蛋白质的共定位 | 第63-64页 |
| 2.4 蛋白质片段互补法分析生物化学网络 | 第64页 |
| 3 离体实验方法 | 第64-67页 |
| 3.1 等温滴定热分析技术 | 第64-65页 |
| 3.2 圆二色光谱 | 第65页 |
| 3.3 核磁共振 | 第65页 |
| 3.4 表面等离子共振 | 第65-66页 |
| 3.5 凝胶迁移阻滞实验 | 第66页 |
| 3.6 荧光偏振实验 | 第66页 |
| 3.7 印记叠加 | 第66-67页 |
| 4 基于蛋白组学的技术 | 第67-70页 |
| 4.1 蛋白质间相互作用的计算机预测 | 第67页 |
| 4.2 双向凝胶电泳分析 | 第67页 |
| 4.3 质谱分析 | 第67-68页 |
| 4.4 网络资源 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-76页 |
| 第二篇 实验研究 | 第76-180页 |
| 第四章 Hco-gal-m/f-山羊外周血淋巴细胞酵母双杂交系统的构建 | 第76-104页 |
| 1 材料与方法 | 第77-90页 |
| 1.1 实验材料 | 第77-79页 |
| 1.1.1 试验动物 | 第77页 |
| 1.1.2 质粒与菌种 | 第77页 |
| 1.1.3 主要试剂 | 第77页 |
| 1.1.4 主要仪器 | 第77-78页 |
| 1.1.5 溶液配制 | 第78-79页 |
| 1.2 方法 | 第79-90页 |
| 1.2.1 山羊PBMC cDNA文库的构建 | 第79-84页 |
| 1.2.2 Hco-gal-m/f诱饵质粒的构建 | 第84-88页 |
| 1.2.3 酵母双杂交系统功能性检测 | 第88-89页 |
| 1.2.4 优化筛选条件 | 第89-90页 |
| 2 结果 | 第90-98页 |
| 2.1 山羊PBMC的分离 | 第90-91页 |
| 2.2 细胞总RNA质量检测 | 第91页 |
| 2.3 PCR扩增双链cDNA程序中循环数的确定 | 第91-92页 |
| 2.4 山羊PBMC cDNA文库质量评价 | 第92-93页 |
| 2.4.1 电转化效率 | 第92页 |
| 2.4.2 文库滴度 | 第92页 |
| 2.4.3 插入片段大小 | 第92-93页 |
| 2.5 重组诱饵质粒pDHB1-Hco-gal-m/f的构建与鉴定 | 第93-94页 |
| 2.6 诱饵质粒pDHB1-Hco-gal-m/f在NMY51酵母中表达情况的检测 | 第94-95页 |
| 2.7 酵母双杂交系统功能性检测 | 第95-96页 |
| 2.8 筛选3-AT的最适浓度 | 第96-98页 |
| 3 讨论 | 第98-100页 |
| 参考文献 | 第100-104页 |
| 第五章 山羊PBMC中Hco-gal-m/f结合蛋白的筛选 | 第104-122页 |
| 1 材料与方法 | 第104-108页 |
| 1.1 实验材料 | 第104-105页 |
| 1.1.1 质粒及菌种 | 第104页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第104页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第104-105页 |
| 1.2 方法 | 第105-108页 |
| 1.2.1 用诱饵pDHB1-Hco-Gal-m/f在山羊PBMC cDNA文库中筛选结合蛋白 | 第105-106页 |
| 1.2.2 从酵母阳性克隆中提取质粒转化DH_(5α)细胞 | 第106-107页 |
| 1.2.3 酵母质粒转化DH5α扩增及酶切鉴定 | 第107页 |
| 1.2.4 阳性捕获质粒的返回验证 | 第107-108页 |
| 1.2.5 返回验证呈阳性的捕获质粒内插入片段的鉴定及序列分析 | 第108页 |
| 2 结果 | 第108-115页 |
| 2.1 酵母双杂交初筛结果 | 第108-109页 |
| 2.2 返回酵母验证结果 | 第109-111页 |
| 2.3 通过返回验证的捕获质粒插入片段鉴定及分析结果 | 第111-115页 |
| 2.3.1 序列鉴定结果 | 第111页 |
| 2.3.2 生物信息学分析结果 | 第111-115页 |
| 3 讨论 | 第115-119页 |
| 参考文献 | 第119-122页 |
| 第六章 Hco-Gal-m/f结合蛋白TMEM63A的基因克隆、表达及抗体制备 | 第122-142页 |
| 1 材料与方法 | 第122-129页 |
| 1.1 实验材料 | 第122-125页 |
| 1.1.1 试验动物 | 第122-123页 |
| 1.1.2 质粒及菌株 | 第123页 |
| 1.1.3 主要试剂 | 第123页 |
| 1.1.4 主要仪器 | 第123页 |
| 1.1.5 溶液配制 | 第123-125页 |
| 1.2 方法 | 第125-129页 |
| 1.2.1 RACE技术扩增TMEM63A的全长基因 | 第125-127页 |
| 1.2.2 TMEM63A的生物信息学分析 | 第127页 |
| 1.2.3 重组表达载体pET28a-63A-NO的构建 | 第127-128页 |
| 1.2.4 重组蛋白63A-NO的表达与纯化 | 第128-129页 |
| 1.2.5 多克隆抗体的制备 | 第129页 |
| 2 结果 | 第129-136页 |
| 2.1 TMEM63A基因的5'和3'端扩增 | 第129-134页 |
| 2.2 重组表达质粒pET28a-63A-NO的构建及鉴定 | 第134页 |
| 2.3 重组蛋白63A-NO的表达与纯化 | 第134-136页 |
| 2.4 大鼠抗63-NO抗体的效价及特异性检测 | 第136页 |
| 3 讨论 | 第136-138页 |
| 参考文献 | 第138-142页 |
| 第七章 Co-IP验证Hco-Gal-m/f与TMEM147、SERPI和TMEM63A的结合 | 第142-152页 |
| 1 材料与方法 | 第142-146页 |
| 1.1 实验材料 | 第142-143页 |
| 1.1.1 试验动物 | 第142页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第142-143页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第143页 |
| 1.2 方法 | 第143-146页 |
| 1.2.1 细胞裂解物的准备 | 第143页 |
| 1.2.2 TMEM147与rHco-Gal-m结合的co-IP检测样品制备 | 第143-144页 |
| 1.2.3 SERP1与rHco-Gal-m结合的co-IP检测样品制备 | 第144-145页 |
| 1.2.4 TMEM63A与rHco-Gal-m结合的co-IP检测样品制备 | 第145-146页 |
| 1.2.5 Western blot检测co-IP样品 | 第146页 |
| 2 结果 | 第146-148页 |
| 3 讨论 | 第148-150页 |
| 参考文献 | 第150-152页 |
| 第八章 Hco-gal-m/f结合蛋白的定位及功能研究 | 第152-180页 |
| 1 材料与方法 | 第152-160页 |
| 1.1 实验材料 | 第153-154页 |
| 1.1.1 试验动物 | 第153页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第153页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第153页 |
| 1.1.4 试剂配制 | 第153-154页 |
| 1.2 方法 | 第154-160页 |
| 1.2.1 TMEM147、SERP1和TMEM63A在山羊PBMC不同亚型细胞上的分布研究 | 第154-155页 |
| 1.2.2 Hco-gal-m/f结合分子在山羊PBMC内的定位研究 | 第155-156页 |
| 1.2.3 siRNA干扰山羊PBMC中TMEM147,SERP1和TMEM63A的条件优化 | 第156-158页 |
| 1.2.4 Co-IP检验TMEM147,SERP1和TMEM63A干扰后与rHco-gal-m的结合 | 第158页 |
| 1.2.5 TMEM147,SERP1和TMEM63A干扰后山羊PBMC内细胞因子mRNA转录及分泌变化的检验 | 第158-159页 |
| 1.2.6 数据处理 | 第159-160页 |
| 2 结果 | 第160-172页 |
| 2.1 TMEM147,SERP1和TMEM63A在T细胞、B细胞和单核细胞上均有分布 | 第160页 |
| 2.2 TMEM147,SERP1和TMEM63A在山羊PBMC内的定位 | 第160-163页 |
| 2.3 荧光定量PCR引物的检验及干扰条件的优化结果 | 第163-165页 |
| 2.3.1 siRNA的转染效率 | 第163页 |
| 2.3.2 荧光定量PCR引物的检验 | 第163-164页 |
| 2.3.3 不同siRNA的干扰效果比较结果 | 第164-165页 |
| 2.3.4 不同干扰时间的选择 | 第165页 |
| 2.4 TMEM147,SERP1和TMEM63A的干扰影响其与rHco-gal-m的结合 | 第165-166页 |
| 2.5 TMEM147,SERP1和TMEM63A的干扰影响山羊PBMC在不同刺激下细胞因子mRNA的转录 | 第166-170页 |
| 2.5.1 TMEM147的干扰对细胞因子mRNA转录的影响 | 第167-168页 |
| 2.5.2 SERP1的干扰对细胞因子mRNA转录的影响 | 第168-169页 |
| 2.5.3 TMEM63A的干扰对细胞因子mRNA转录的影响 | 第169-170页 |
| 2.6 TMEM147,SERP1和TMEM63A的干扰影响山羊PBMC在不同刺激下细胞因子的分 泌 | 第170-172页 |
| 3 讨论 | 第172-175页 |
| 参考文献 | 第175-180页 |
| 全文总结 | 第180-182页 |
| 致谢 | 第182-184页 |
| 博士期间论文发表情况 | 第184页 |
