| 中文摘要 | 第10-12页 |
| ABSTRACT | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-20页 |
| 1.1 课题的研究背景 | 第15-18页 |
| 1.1.1 二氧化硫与心血管疾病 | 第15页 |
| 1.1.2 线粒体与NRF1与TFAM研究进展 | 第15-16页 |
| 1.1.3 自由基与线粒体研究进展 | 第16-17页 |
| 1.1.4 二氧化硫及其衍生物诱导心肌细胞凋亡的分子机制研究进展 | 第17-18页 |
| 1.2 课题的研究目的及意义 | 第18页 |
| 1.3 课题的研究内容及实验技术路线 | 第18-19页 |
| 1.3.1 课题的研究内容 | 第18-19页 |
| 1.4 课题的创新之处 | 第19-20页 |
| 第二章 NRF1-pcDNA3.1与TFAM-pcDNA3.1质粒的构建 | 第20-32页 |
| 2.1 前言 | 第20页 |
| 2.2 实验试剂及仪器 | 第20-21页 |
| 2.2.1 主要试剂 | 第20页 |
| 2.2.2 主要仪器 | 第20-21页 |
| 2.3 实验方法与步骤 | 第21-26页 |
| 2.3.1 总RNA提取 | 第21页 |
| 2.3.2 cDNA的合成 | 第21页 |
| 2.3.3 TFAM及NRF1 cDNA全长的扩增 | 第21-22页 |
| 2.3.4 PCR扩增TFAM和NRF1带酶切位点的DNA片段 | 第22-23页 |
| 2.3.5 胶回收含酶切位点的DNA片段 | 第23-24页 |
| 2.3.6 酶切 | 第24页 |
| 2.3.7 连接 | 第24-25页 |
| 2.3.8 转化 | 第25页 |
| 2.3.9 质粒提取 | 第25-26页 |
| 2.3.10 H9C2细胞的转染 | 第26页 |
| 2.4 结果与分析 | 第26-30页 |
| 2.4.1 TFAM和NRF1 cDNA全长的扩增结果 | 第26-27页 |
| 2.4.2 含酶切位点的TFAM和NRF1 DNA片段扩增结果 | 第27页 |
| 2.4.3 酶切质粒pcDNA3.1的电泳结果 | 第27-28页 |
| 2.4.4 TFAM和NRF1菌落PCR扩增结果 | 第28页 |
| 2.4.5 重组质粒TFAM-pcDNA3.1与NRF1-pcDNA3.1的酶切结果 | 第28-29页 |
| 2.4.6 重组质粒TFAM-pcDNA3.1与NRF1-pcDNA3.1的测序 | 第29页 |
| 2.4.7 质粒在H9C2细胞中转染效率 | 第29-30页 |
| 2.5 讨论 | 第30-32页 |
| 第三章 NRF1/TFAM高表达及ROS抑制剂可缓和NaHSO_3诱导的线粒体紊乱 | 第32-40页 |
| 3.1 前言 | 第32页 |
| 3.2 实验材料与方法 | 第32-35页 |
| 3.2.1 实验试剂及仪器 | 第32页 |
| 3.2.2 细胞培养及染毒 | 第32-33页 |
| 3.2.3 大鼠NRF1/TFAM高表达 | 第33页 |
| 3.2.4 H9C2细胞转染 | 第33页 |
| 3.2.5 ROS检测 | 第33页 |
| 3.2.6 ATP检测 | 第33-34页 |
| 3.2.7 RNA提取及Real-Time PCR | 第34页 |
| 3.2.8 蛋白提取及Western blot | 第34页 |
| 3.2.9 数据统计分析 | 第34-35页 |
| 3.3 结果与分析 | 第35-38页 |
| 3.3.1 NRF1在NaHSO_3诱导心肌细胞线粒体功能异常中的作用 | 第35页 |
| 3.3.2 TFAM在NaHSO_3诱导心肌细胞线粒体功能异常中的作用 | 第35-36页 |
| 3.3.3 不同时间NaHSO_3染毒对H9C2细胞内ROS的影响 | 第36-37页 |
| 3.3.4 ROS在NaHSO_3诱导心肌细胞线粒体功能异常中的作用 | 第37-38页 |
| 3.4 讨论 | 第38-40页 |
| 第四章 NaHSO_3诱导H9C2心肌细胞凋亡的分子机制 | 第40-47页 |
| 4.1 前言 | 第40页 |
| 4.2 实验材料与方法 | 第40-41页 |
| 4.2.1 实验试剂及仪器 | 第40页 |
| 4.2.2 细胞培养及染毒 | 第40-41页 |
| 4.3 实验方法及步骤 | 第41-43页 |
| 4.3.1 H9C2细胞凋亡检测 | 第41页 |
| 4.3.2 H9C2细胞caspase-3活性检测 | 第41-42页 |
| 4.3.3 Western blot | 第42页 |
| 4.3.4 细胞免疫荧光图像采集 | 第42-43页 |
| 4.4 数据处理 | 第43页 |
| 4.5 结果与分析 | 第43-45页 |
| 4.5.1 不同时间的NaHSO_3对H9C2心肌细胞凋亡情况的影响 | 第43-44页 |
| 4.5.2 不同时间的NaHSO_3对H9C2心肌细胞凋亡相关蛋白表达水平及caspase-3活性的影响 | 第44-45页 |
| 4.5.3 不同时间处理下的H9C2心肌细胞免疫荧光图像 | 第45页 |
| 4.6 讨论 | 第45-47页 |
| 第五章 结论 | 第47-48页 |
| 5.1 NRF1/TFAM高表达可缓和NaHSO_3诱导的线粒体紊乱 | 第47页 |
| 5.2 NALC可以阻止NaHSO_3诱导的H9C2细胞线粒体功能障碍 | 第47页 |
| 5.3 NaHSO_3可能通过内源性线粒体途径诱导心肌细胞发生了凋亡 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-55页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 个人简况及联系方式 | 第57-59页 |
