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水稻黑条矮缩病病原检测方法研究

摘要第1-7页
ABSTRACT第7-8页
第一章 文献综述第8-26页
   ·水稻黑条矮缩病毒的研究进展第8-15页
     ·水稻黑条矮缩病毒的流行分布第8页
     ·RBSDV的寄主范围和发病症状第8-9页
     ·RBSDV的传播介体和侵染循环第9-10页
     ·影响RBSDV流行的因素第10页
     ·RBSDV分类属性及粒子形态第10-12页
     ·RBSDV基因组及其编码的蛋白第12-15页
   ·南方水稻黑条矮缩病毒研究进展第15-20页
     ·SRBSDV寄主范围和发病症状第16-17页
     ·SRBSDV的传播介体和流行规律第17-19页
     ·SRBSDV流行特点及影响因素第19页
     ·SRBSDV基因组及其编码蛋白第19-20页
   ·水稻黑条矮缩病病原的检测第20-24页
     ·生物学检测方法第20-21页
     ·电镜技术第21页
     ·血清学方法第21-22页
     ·其它分子生物学检测方法第22页
     ·荧光定量PCR技术第22-24页
   ·本研究的目的及意义第24-26页
第二章 应用P8蛋白多克隆抗体检测RBSDV/SRBSDV第26-39页
   ·材料与试剂第26页
     ·实验材料第26页
     ·实验试剂第26页
     ·实验仪器第26页
     ·相关试剂和培养基配制第26页
   ·实验方法第26-30页
     ·P8抗体制备第27-28页
       ·引物设计第27页
       ·PB蛋白的诱导表达和检测第27页
       ·抗原溶液制备及动物免疫第27-28页
       ·采集血清第28页
     ·Western blot检测抗体第28-29页
     ·间接ELISA检测方法第29-30页
     ·Dot-blot检测RBSDV方法的建立第30页
   ·结果与分析第30-38页
     ·P8蛋白表达载体的构建第30-31页
     ·P8蛋白的诱导表达和纯化第31-32页
     ·P8多克隆抗体纯化及特异性分析第32-33页
     ·P8多克隆抗体特异性及灵敏度分析第33-35页
     ·P8多克隆抗体的稀释倍数和—抗反应时间第35页
     ·最佳显色时间第35-36页
     ·应用P8抗体检测病株和昆虫样品第36-38页
   ·小结第38-39页
第三章 高分辨率溶解曲线(HRM)方法同步检测RBSDV/SRBSDV第39-55页
   ·材料与方法第41-44页
     ·材料第41页
     ·试剂与仪器第41页
       ·试剂第41页
       ·仪器第41页
     ·试验方法第41-44页
       ·样品总RNA提取第41页
       ·RT-PCR第41-42页
       ·HRM方法设计引物第42页
       ·HRM方法反应体系及程序第42-43页
       ·HRM分型方法的重复性分析第43页
       ·HRM检测方法的准确性分析第43-44页
   ·结果与分析第44-53页
     ·RNA提取结果第44页
     ·病株标准样品的确定第44-45页
     ·引物设计及其有效性分析第45-47页
     ·检测方法的建立第47-48页
     ·HRM方法的反应体积第48-49页
     ·重复性评估第49页
     ·准确性评估第49-51页
     ·HRM方法的应用第51-53页
   ·讨论第53-54页
   ·结论第54-55页
参考文献第55-60页
附录第60-64页
致谢第64页

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