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苹果SUMO E3连接酶MdSIZ1调控逆境应答和花青苷积累的研究

缩略词表第1-11页
中文摘要第11-13页
Abstract第13-15页
1 前言第15-33页
   ·SUMO化结构及SUMO化过程第15-18页
     ·翻译后修饰简介第15页
     ·SUMO蛋白的发现第15-16页
     ·SUMO蛋白的结构第16页
     ·SUMO化过程简介第16-17页
     ·参与SUMO化过程的酶第17-18页
   ·SUMO化在植物中的功能第18-21页
     ·SUMO化在逆境胁迫中的功能第18-20页
     ·SUMO化在ABA信号途径中的功能第20页
     ·SUMO化在植物生长和发育中的功能第20-21页
     ·SUMO化在开花途径中的功能第21页
     ·SUMO化在植物抗病方面的功能第21页
     ·SUMO化在氮素同化中的功能第21页
   ·植物中SIZ1的研究第21-23页
     ·植物SIZ1的基本结构第21-22页
     ·SIZ1的基本功能第22-23页
     ·SIZ1在其他植物中的研究第23页
   ·磷同化吸收第23-24页
   ·植物应对低磷的应答机制第24页
   ·缺磷响应基因的研究第24-25页
     ·缺磷响应功能基因的研究第24页
     ·缺磷响应的转录因子的研究第24-25页
     ·SUMO E3连接酶SIZ1响应缺磷的研究第25页
   ·苹果的缺磷症状及防治第25-26页
   ·花青苷的合成第26-27页
   ·环境因子对花青苷的影响第27-29页
     ·外部因素对花青苷的影响第27-28页
     ·内部因素对花青苷的影响第28-29页
   ·WBM蛋白复合体第29-31页
     ·MYB转录因子第29页
     ·bHLH转录因子第29-30页
     ·WD40转录因子第30页
     ·WBM蛋白复合体调控花青苷的合成第30-31页
     ·WBM蛋白复合体中的翻译后修饰第31页
   ·研究目的及意义第31-33页
2 材料和方法第33-59页
   ·实验材料第33-35页
     ·菌株第33页
     ·载体第33页
     ·植物材料第33页
     ·酶、抗生素、各种化学药品及生化试剂第33-34页
     ·仪器与设备第34页
     ·培养基第34页
     ·抗生素第34页
     ·溶液和缓冲液第34-35页
   ·实验方法第35-59页
     ·植物组织总RNA提取第35-36页
     ·植物RNA的纯化(除DNA)方法第36-37页
     ·反转录cDNA第一链的合成第37页
     ·荧光定量PCR(RT-PCR)第37-38页
     ·基因扩增第38页
     ·PCR产物的回收第38-39页
     ·连接反应第39页
     ·大肠杆菌感受态细胞的转化第39-40页
     ·测序第40页
     ·质粒DNA的提取第40-41页
     ·质粒DNA的酶切第41页
     ·表达载体的构建第41-43页
     ·根癌农杆菌LBA4404和GV3101感受态细胞的制备与转化第43页
     ·植物转化方法第43-45页
     ·植物基因组DNA的提取及纯化第45-46页
     ·植物体花青苷的测定第46-47页
     ·酵母双杂转化方法第47-49页
     ·蛋白技术第49-57页
     ·瞬时表达注射苹果实验第57-59页
3 结果与分析第59-93页
   ·苹果SUMO E3连接酶MdSIZ1功能研究第59-69页
     ·MdSIZ1的进化树分析第59-61页
     ·AtSUMO1抗体可以检测苹果中的SUMO结合第61-62页
     ·在逆境胁迫下SUMO结合水平明显提高第62页
     ·逆境胁迫诱导MdSIZ1的表达第62-63页
     ·MdSIZ1苹果中作为SUMO E3连接酶第63-65页
     ·MdSIZ1恢复siz1-2 在逆境环境下的SUMO结合水平第65-66页
     ·MdSIZ1部分恢复siz1-2 的株高和叶片大小第66-68页
     ·MdSIZ1部分恢复siz1-2 突变体萌发率第68-69页
   ·苹果MdSIZ1调控缺磷胁迫第69-75页
     ·在苹果中缺磷条件诱导MdSIZ1基因的表达第69-70页
     ·在苹果中缺磷条件下诱导SUMO化第70-71页
     ·MdPHR1被SUMO蛋白修饰第71-72页
     ·MdSIZ1部分恢复了siz1-2 的缺磷条件下的存活率第72-73页
     ·MdSIZ1转基因愈伤影响缺磷相关基因的表达量第73-74页
     ·缺磷处理下MdSIZ1转基因愈伤改变SUMO结合水平第74页
     ·过量表达MdSIZ1转基因愈伤提高对缺磷的抗性第74-75页
   ·MdSIZ1调控花青苷积累的机制研究第75-92页
     ·MdSIZ1与MdMYB1蛋白的相互作用第75-78页
     ·MdSIZ1介导MdMYB1的SUMO化修饰第78-81页
     ·MdSIZ1在蛋白水平稳定MdMYB1抑制 26S蛋白酶体的降解第81-85页
     ·在愈伤中MdSIZ1通过依赖MdMYB1的途径促进花青苷的形成第85-88页
     ·在苹果果实中MdSIZ1通过依赖MdMYB1的途径促进花青苷的形成第88-92页
   ·MdSIZ1调控各种生理反应模式图第92-93页
4 讨论第93-99页
   ·在苹果中逆境胁迫诱导SUMO化并且诱导在转录水平诱导MdSIZ1第93-94页
   ·苹果中MdSIZ1调控低温胁迫通过MdCIbHLH1第94页
   ·MdPHR1的SUMO化修饰被MdSIZ1介导第94-95页
   ·MdSIZ1提高缺磷的耐受性第95-96页
   ·MdSIZ1与MdMYB1互作第96-97页
   ·MdSIZ1调控MdMYB1的稳定性第97页
   ·MdSIZ1调控花青苷的积累第97-98页
   ·展望第98-99页
5 结论第99-100页
参考文献第100-113页
6 附录第113-118页
   ·本文中使用的引物第113-114页
   ·载体示意图第114-118页
     ·克隆载体PMD18-T第114-115页
     ·酵母双杂载体pGAD424第115-116页
     ·酵母双杂交载体pGBT9第116页
     ·原核表达载体pGEX-4T-1第116-117页
     ·原核表达载体pEASY第117页
     ·IL60BS载体图第117页
     ·反义病毒载体pTRV2第117页
     ·过量或抑制表达载体pCXSN第117-118页
7 致谢第118-119页
8 攻读学位期间发表以及待发表的论文第119页

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