| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-9页 |
| 上篇 文献综述 | 第9-17页 |
| 1. 鼻咽癌的概述 | 第9页 |
| 2. Survivin基因的概述 | 第9-11页 |
| ·Survivin基因的结构 | 第10页 |
| ·Survivin基因的生物学功能 | 第10-11页 |
| ·Survivin基因影响细胞分裂 | 第10-11页 |
| ·Survivin抑制细胞凋亡 | 第11页 |
| ·Survivin与肿瘤 | 第11页 |
| 3. CDK1基因的概述 | 第11-13页 |
| ·在细胞周期调控中CDK1的作用 | 第12页 |
| ·CDK1与肿瘤 | 第12-13页 |
| 4. shRNA干扰技术 | 第13-14页 |
| 5. 本研究的目的及意义 | 第14-15页 |
| 6. 技术路线 | 第15-17页 |
| 下篇 研究内容 | 第17-58页 |
| 第一章 单基因Survivin、CDK1靶向shRAN表达载体的构建及筛选 | 第17-39页 |
| 1. 材料与方法 | 第17-31页 |
| ·材料 | 第17-21页 |
| ·质粒 | 第17-18页 |
| ·主要试剂 | 第18-19页 |
| ·主要仪器与设备 | 第19-20页 |
| ·主要溶液的配制 | 第20-21页 |
| ·方法 | 第21-31页 |
| ·Survivin、CDK1靶向shRNA重组质粒的构建及鉴定 | 第21-27页 |
| ·细胞的复苏、传代培养及细胞计数 | 第27页 |
| ·shRNA表达载体转染CNE2细胞 | 第27-28页 |
| ·RT-PCR检测Survivin、CDK1基因 | 第28-31页 |
| 2. 结果 | 第31-36页 |
| ·LB-Amp平板筛选阳性克隆 | 第31-32页 |
| ·重组载体pU6-Survivin_(shRNA)、pU6-CDK1_(shRNA)的测序结果 | 第32-33页 |
| ·重组载体pU6-Survivin_(shRNA)、pU6-CDK1_(shRNA)的纯度和浓度结果 | 第33-34页 |
| ·RNA质量检测 | 第34页 |
| ·筛选具有干扰效应的单基因shRAN表达载体 | 第34-36页 |
| 3. 讨论 | 第36-39页 |
| 第二章 联合基因Survivin、CDK1的shRNAs靶向干扰对鼻咽癌CNE-2细胞增殖、凋亡的影响 | 第39-58页 |
| 1. 材料与方法 | 第39-45页 |
| ·材料 | 第39-41页 |
| ·质粒 | 第39页 |
| ·主要试剂 | 第39页 |
| ·主要仪器及设备 | 第39-40页 |
| ·主要试剂的配制 | 第40-41页 |
| ·方法 | 第41-45页 |
| ·串联重组质粒pU6-Survivin_(shRNA)-U6-CDK1_(shRNA)的构建及鉴定 | 第41-42页 |
| ·pU6-Survivin_(shRNA)-U6-CDK1_(shRNA)表达载体体外干扰实验 | 第42页 |
| ·RT-qPCR检测Survivin、CDK1基因表达 | 第42-43页 |
| ·Western blot分析 | 第43-44页 |
| ·MTT法测定细胞增殖活性 | 第44-45页 |
| ·流式细胞仪检测细胞凋亡 | 第45页 |
| ·统计学分析 | 第45页 |
| 2. 结果 | 第45-55页 |
| ·LB-Amp平板筛选阳性克隆 | 第45-46页 |
| ·pU6-Survivin_(shRNA)-CDK1_(shRNA)重组载体的酶切鉴定 | 第46-47页 |
| ·pU6-Survivin_(shRNA)-CDK1_(shRNA)重组载体的测序结果 | 第47-48页 |
| ·重组载体pU6-Survivin_(shRNA)-CDK1_(shRNA)的纯度和浓度结果 | 第48页 |
| ·RNA质量检测 | 第48-49页 |
| ·RT-qPCR检测Survivin、CDK1基因的表达 | 第49-51页 |
| ·Western blot检测结果 | 第51-52页 |
| ·MTT法检测细胞增殖活性 | 第52页 |
| ·细胞生长曲线 | 第52-53页 |
| ·流式细胞仪检测转染48h的细胞凋亡 | 第53-55页 |
| 3. 讨论 | 第55-58页 |
| 结论 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 攻读硕士期间的研究成果 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
