| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-19页 |
| 第一章 文献综述 | 第19-53页 |
| 1 microRNA 的发现及生物合成机制 | 第19-25页 |
| ·microRNA 的发现 | 第19-20页 |
| ·microRNA 的生物合成机制 | 第20-23页 |
| ·microRNA 调节靶基因的机制 | 第23页 |
| ·microRNA 与siRNA 的联系与区别 | 第23-24页 |
| ·植物microRNA 的特点 | 第24-25页 |
| 2 鉴定植物microRNA 的方法 | 第25-29页 |
| ·组织特异性克隆 | 第26页 |
| ·基于生物信息学克隆 | 第26-28页 |
| ·正反向遗传克隆 | 第28-29页 |
| 3 microRNA 数据库 | 第29-30页 |
| 4 microRNA 的功能 | 第30-34页 |
| ·植物miRNA 对植物生长发育的影响 | 第30-32页 |
| ·植物miRNA 对植物抗胁迫的影响 | 第32-34页 |
| 5 microRNA 在豆科植物中的研究 | 第34-41页 |
| ·豆科植物与微生物的共生 | 第34-35页 |
| ·豆科植物与根瘤菌共生固氮各阶段的信息传递和基因表达 | 第35-37页 |
| ·豆科植物中的microRNA | 第37-38页 |
| ·与结瘤相关的microRNA | 第38-41页 |
| 6 Gateway 技术的原理及应用 | 第41-44页 |
| 参考文献 | 第44-53页 |
| 第二章 本研究的意义和内容 | 第53-59页 |
| 1 本研究的意义 | 第53-54页 |
| 2 本研究的基础 | 第54-55页 |
| 3 本研究的内容 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-59页 |
| 第三章 microRNA 的初步筛选 | 第59-84页 |
| 1 材料 | 第60-62页 |
| ·植物材料 | 第60页 |
| ·菌株 | 第60页 |
| ·试剂与配方 | 第60-62页 |
| ·实验设备 | 第62页 |
| ·Northern 杂交探针 | 第62页 |
| 2 实验方法 | 第62-65页 |
| ·大豆的种植 | 第62-63页 |
| ·大豆根瘤菌的培养 | 第63页 |
| ·大豆取材 | 第63页 |
| ·microRNAs 的制备 | 第63-64页 |
| ·Northern 杂交 | 第64-65页 |
| 3 实验结果与分析 | 第65-80页 |
| ·microRNAs 在大豆被诱导的根部中表达 | 第65-67页 |
| ·microRNAs 在大豆基因组中的定位 | 第67-69页 |
| ·miRNAs 在大豆组织中的特异表达 | 第69-70页 |
| ·microRNAs 前体的预测 | 第70-80页 |
| 4 讨论 | 第80-82页 |
| ·miRNA StarFire 系统能够有效提高Northern 杂交的灵敏度 | 第80-81页 |
| ·microRNA 的前体预测 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-84页 |
| 第四章 microRNAs 在突变体中的表达 | 第84-93页 |
| 1 材料 | 第85页 |
| ·植物材料 | 第85页 |
| ·菌株 | 第85页 |
| ·试剂与配方 | 第85页 |
| ·实验设备 | 第85页 |
| 2 实验方法 | 第85-86页 |
| ·大豆突变系的种植 | 第85页 |
| ·大豆根瘤菌的培养 | 第85页 |
| ·大豆突变系的取材 | 第85页 |
| ·microRNA 的制备 | 第85页 |
| ·Northern 杂交 | 第85-86页 |
| 3 实验结果与分析 | 第86-89页 |
| ·microRNA 在对照Bragg 中的表型和在W82 中相同 | 第86-87页 |
| ·microRNA 在突变系中的表型 | 第87-89页 |
| 4 讨论 | 第89-91页 |
| 参考文献 | 第91-93页 |
| 第五章 microRNAs 靶基因的预测及验证 | 第93-116页 |
| 1 材料 | 第94-95页 |
| ·植物材料 | 第94页 |
| ·质粒与菌株 | 第94页 |
| ·试剂与配方 | 第94页 |
| ·实验设备 | 第94页 |
| ·RT-PCR，qRT-PCR 引物 | 第94-95页 |
| ·5'-RACE 引物 | 第95页 |
| 2 实验方法 | 第95-104页 |
| ·microRNA 的提取 | 第95页 |
| ·RNA 反转录合成cDNA | 第95-96页 |
| ·靶基因的RT-PCR 筛选 | 第96页 |
| ·靶基因的定量RT-PCR | 第96-97页 |
| ·用于靶基因5'-RACE 鉴定的m RNA 制备 | 第97-98页 |
| ·靶基因的5'-RACE | 第98-100页 |
| ·胶回收 | 第100-101页 |
| ·pGEM-T Easy 载体连接反应产物 | 第101页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第101-103页 |
| ·pGEM-T Easy 载体连接反应产物的转化（蓝白斑筛选） | 第103页 |
| ·质粒DNA 的少量制备 | 第103-104页 |
| 3 实验结果与分析 | 第104-112页 |
| ·靶基因的生物信息学预测 | 第104-107页 |
| ·靶基因的RT-PCR 表型 | 第107-108页 |
| ·靶基因的qRT-PCR 分析 | 第108-112页 |
| ·靶基因的5'-RACE 验证 | 第112页 |
| 4 讨论 | 第112-114页 |
| 参考文献 | 第114-116页 |
| 第六章 microRNAs 在根瘤发育的作用 | 第116-136页 |
| 1 材料 | 第117页 |
| ·植物材料 | 第117页 |
| ·菌株 | 第117页 |
| ·质粒载体 | 第117页 |
| ·试剂与配方 | 第117页 |
| ·实验设备 | 第117页 |
| 2 实验方法 | 第117-123页 |
| ·大豆的种植 | 第117页 |
| ·发根农杆菌的共转化 | 第117-118页 |
| ·大豆的毛状根转化 | 第118页 |
| ·基因组DNA 的小量提取 | 第118-119页 |
| ·PCR 扩增miRNA 的前体基因 | 第119-120页 |
| ·酶切反应 | 第120页 |
| ·miRNA 的前体与入门载体的连接 | 第120页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第120-121页 |
| ·转化产物的鉴定 | 第121页 |
| ·过量表达目的载体的构建 | 第121-122页 |
| ·目的载体的鉴定 | 第122页 |
| ·发根农杆菌K599 感受态细胞的制备 | 第122-123页 |
| ·发根农杆菌K599 的转化 | 第123页 |
| 3 实验结果与分析 | 第123-133页 |
| ·Gateway 过量表达目的载体的构建 | 第123-127页 |
| ·重组质粒中miRNAs 过量表达 | 第127-128页 |
| ·组成型表达的miRNA 能够引起结瘤数目的变化 | 第128-130页 |
| ·结瘤诱导的miRNA 能够引起结瘤数目的变化 | 第130-133页 |
| 4 讨论 | 第133-134页 |
| 参考文献 | 第134-136页 |
| 第七章 研究结论与展望 | 第136-139页 |
| 1 研究主要结论 | 第136-137页 |
| 2 创新之处 | 第137页 |
| 3 研究中存在的问题 | 第137-138页 |
| 4 今后工作展望 | 第138-139页 |
| 附录 缩写词表 | 第139-141页 |
| 攻读博士期间发表、拟发表的论文和专利 | 第141页 |
