| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-20页 |
| ·肺炎支原体简介 | 第10页 |
| ·肺炎支原体的致病性 | 第10-12页 |
| ·肺炎支原体的黏附作用 | 第12-13页 |
| ·肺炎支原体的黏附蛋白 | 第13-18页 |
| ·P1 蛋白 | 第13-14页 |
| ·P30 蛋白 | 第14-15页 |
| ·P116 蛋白 | 第15-16页 |
| ·P65 蛋白 | 第16-17页 |
| ·粘附辅助蛋白 | 第17-18页 |
| ·HMW1、HMW2、HMW3 | 第17-18页 |
| ·蛋白B、C | 第18页 |
| ·肺炎支原体感染的诊断 | 第18-19页 |
| ·本课题的研究内容及意义 | 第19-20页 |
| 第二章 肺炎支原体 P1 基因的克隆 | 第20-38页 |
| ·实验材料 | 第20-24页 |
| ·菌株 | 第20页 |
| ·载体及大肠杆菌 | 第20页 |
| ·酶类试剂及常用试剂盒 | 第20页 |
| ·主要实验药品 | 第20-21页 |
| ·实验溶液配制 | 第21-24页 |
| ·实验仪器 | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25-31页 |
| ·引物的设计与合成 | 第25-26页 |
| ·基因组的抽提 | 第26-27页 |
| ·PCR 扩增目的基因P1 | 第27-28页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第28-29页 |
| ·用回收的PCR 产物构建克隆载体(pEASY-MP-P1F) | 第29页 |
| ·连接产物的转化 | 第29-30页 |
| ·阳性重组子的鉴定及测序 | 第30-31页 |
| ·菌液PCR 方法鉴定阳性重组子 | 第30页 |
| ·重组克隆质粒(pEASY-MP-P1F)的提取 | 第30-31页 |
| ·重组克隆质粒的酶切鉴定 | 第31页 |
| ·重组克隆质粒的测序鉴定 | 第31页 |
| ·实验结果 | 第31-37页 |
| ·肺炎支原体基因组抽提 | 第31-32页 |
| ·目的基因P1 的PCR 扩增 | 第32-33页 |
| ·重组克隆质粒的鉴定 | 第33-37页 |
| ·菌液PCR 方法鉴定阳性重组子 | 第33-34页 |
| ·重组克隆质粒的提取 | 第34页 |
| ·重组克隆质粒的酶切鉴定 | 第34-35页 |
| ·重组克隆质粒的测序分析 | 第35-37页 |
| ·小结 | 第37-38页 |
| 第三章 肺炎支原体 P1 基因的表达 | 第38-51页 |
| ·实验材料 | 第38-39页 |
| ·载体及大肠杆菌 | 第38页 |
| ·酶类试剂及常用试剂盒 | 第38页 |
| ·主要实验药品 | 第38页 |
| ·实验溶液配制 | 第38-39页 |
| ·实验方法 | 第39-46页 |
| ·设计带酶切位点的引物 | 第39-40页 |
| ·PCR 扩增目的基因P1 | 第40-41页 |
| ·构建表达载体(pET32-MP-P1FE) | 第41-42页 |
| ·酶切 | 第41-42页 |
| ·酶切产物的回收 | 第42页 |
| ·连接 | 第42页 |
| ·用氯化钙法制备大肠杆菌TOP10 感受态细胞 | 第42-43页 |
| ·连接产物转化感受态细胞 | 第43页 |
| ·重组表达质粒的鉴定 | 第43-45页 |
| ·菌液PCR 方法鉴定阳性重组子 | 第43-44页 |
| ·重组表达质粒(pET32-MP-P1FE)的提取 | 第44页 |
| ·重组表达质粒的酶切鉴定 | 第44-45页 |
| ·重组表达质粒的测序分析 | 第45页 |
| ·用重组表达质粒转化表达菌株 | 第45页 |
| ·重组表达质粒的诱导表达 | 第45-46页 |
| ·检测目的蛋白的表达 | 第45-46页 |
| ·SDS-PAGE 鉴定步骤 | 第46页 |
| ·目的蛋白的可溶性分析 | 第46页 |
| ·实验结果 | 第46-50页 |
| ·目的基因的获得及菌液PCR 鉴定 | 第46-47页 |
| ·表达载体的酶切和测序鉴定 | 第47-48页 |
| ·目的蛋白的表达及可溶性分析 | 第48-50页 |
| ·检测目的蛋白 | 第48-49页 |
| ·可溶性分析 | 第49-50页 |
| ·小结 | 第50-51页 |
| 第四章 目的蛋白纯化及免疫学检测 | 第51-59页 |
| ·实验材料 | 第51-52页 |
| ·酶类试剂及常用试剂盒 | 第51页 |
| ·实验溶液配制 | 第51-52页 |
| ·实验方法 | 第52-55页 |
| ·纯化目的蛋白 | 第52-54页 |
| ·免疫学检测纯化后的蛋白 | 第54-55页 |
| ·Western Blotting 免疫印迹检测 | 第54-55页 |
| ·ELISA 免疫检测 | 第55页 |
| ·实验结果 | 第55-58页 |
| ·目的蛋白纯化 | 第55-57页 |
| ·免疫检测 | 第57-58页 |
| ·Western Blotting 检测结果 | 第57页 |
| ·ELISA 检测结果 | 第57-58页 |
| ·小结 | 第58-59页 |
| 第五章 结论和展望 | 第59-62页 |
| ·结论 | 第59页 |
| ·展望 | 第59-62页 |
| 参考文献 | 第62-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 附录 (硕士期间发表的论文) | 第67页 |